широко реагирующими, так и со специфическими антисворотками. Отмечены фрагменты, коррелирующие с двумя и более антисыворотками (не кросс-реагирующими друг с другом). Кроме того, есть уникальные фрагменты. На ГУ международном совещании (Воркшопа) признано наличие 50 аллоантигенных специфичностей ВоГА класса I (D.Bernoco et al, 1991).
В настоящее время не получены антигены ВоГ.А класса II, поэтому серологические методы исследования этой области ГКГС неприемлемы. Генетическая структура локусов BoLA класса Ш была описана с помощью Саузер блотгибридизации геномной ДНК с пробами кДНК человека, содержащими последовательность генов Д-области. Это позволило выявить ряд генов этой области, в частности: по два гена DQA и ООВ; один ген DRA, по меньшей мере три DRB (один из них, по-видимому, псевдоген), один ген DOB, по одному гену DZA, DYA, DYB и DIB.
Гены DQ, DR, DP, DO и DZ должны были существовать до того, как основные группы млекопитающих отделились друг от друга, т.е. около 70 млн. лет назад. У всех млекопитающих выявлено по одному гену DRA, РОВ и ОХА. Число копий остальных генов класса П варьирует у разных видов, что предполагает в эволюции ГКГС таких событий, как дуплекации и делеции. Аналогов генов DY в геноме человека не обнаружено. У крупного рогатого скота не описаны гены, аналогичные ОР. С помощью ПДРФанализа выявлен высокий полиморфизм генов РО и DA. Описано 20 вариантов DQA, 17-DQB, 5-ОБАи 25-ОВВ (L.Andersson et al., 1986, 1988; S.Sigurdardottir et al., 1988). Описаны рестриктные варианты локусов TCPIB и C4. Метод ПДРФ можно применять для рутинного типирования генов класса П в популяционных выборках (Г.Е.Сулимова и др., 1990). В настоящее время метод ПДРФ гена DRB успешно используется для сравнительного анализа уровня полиморфизма у разных пород, например голштинской и симментальской (S.M.Schmytz et al., 1991).
Аналогом высокополиморфного гена человека НГА-ОВВ1 служит ген ВоГА-ОВВЗ. Методом Нозорнгибридизации показано сходство последовательности этого гена с ранее установленными последовательностями двух других генов DRB (M.G.Burke et al.,
1991). Первоначально был сиквинирован ген ВоГ.А-ОВВ1, затем BoLA-DRB2 и позднее ген ВоГА-ОВВ из клана Al, предположительно являющийся аллельным вариантом BoLA-DRB3. Сходство экзонов 2, 3 и 4 гена ОВВЗ с теми же участками ОВВ1, DRB2 и Al составляют 83,1: 86,3 и 6,8% соответственно. Последовательность 61 экзона DRB3 сходна с bl экзонами гена DRB1 на 72,1%, DRB2 на 74,8% и А] - на 93,6%.
Для изучения ГКГС у крупного рогатого скота помимо ПДРФ-анализа применен ПЦР (полимеразная цепная реакция). Как и в случае НГА, исследование методом ПЦР стало возможным после определения нуклеотидной последовательности генов BoLA. В настоящее время сиквинирована большая часть экзонов и участков интронов ВоГ.А ООВ гена; кроме того экзоны 2, 3 и 4, а также части последовательностей между ними генов ОКА и DQA, частично секвенированы последовательности BoLA-DIB (помимо уже перечисленных DRB1, DRB2 и DRB3).
Метод полимеразной цепной реакции с последующим секвенированием применен для изучения полиморфизма экзона, кодирующего первый наиболее полиморфный домен ВоГА-ОВВ. Первоначально использовали образцы ДНК четырнадцати различных вариантов гаплотипов класса II, определенных с помощью ПДРФ-анализа. В результате выявили 14 аллелей в одном локусе DRB3. Отличие в последовательностях разных аллелей при попарном сравнении выявили от 5 до 21 аминокислотных замен из 83 сравниваемых положений. Кроме того, изучение второго экзона этим методом проведено у африканских пород крупного рогатого скота (включая зебу), в результате чего обнаружено 8 новых аллелей (S.Johansson, L.Andersson, 1992). В дальнейшем проведено изучение полиморфизма гена DRB3 методом ПЦР в сочетании с последующим рестрикционным анализом, приведшее к определению более 30 аллелей.
Генетическое разнообразие на аминокислотном уровне, обнаруженное у крупного рогатого скота для продуктов гена DRB3, сходно с ранее установленным для локуса НГА-ОКВВ1. Как в случае генов класса П НГА, выявлено значительное превышение значимых нуклеотидных замен над "молчащими" в экзоне, коди-
рующим первый домен ВоГ.А-ОВВЗ, что предполагает действие отбора, способствующего генетическому разнообразию молекул. Сравнение полиморфизма локуса DRBу человека и крупного рогатого скота показывает поразительное сходство в расположении полиморфных участков и степени их полиморфности. Повидимому, большая часть полиморфных положений принадлежит сайту узнавания молекул класса II. Кроме этого отмечено 8 совпадающих полиморфных положений в молекуле DRB человека и крупного рогатого скота, лежащих, вероятно, за пределами сайта узнавания.
Нами, совместно с Институтом общей генетики РАН, был проведен анализ полиморфизма b-1 домена DRB и промоторного участка (5 область) гена ООВ у крупного рогатого скота холмогорской, черно-пестрой, герефордской пород и зубров. Применялся метод полимерной цепной реакции (ПЦР) в сочетаниис рестрикционным анализом отдельных фрагментов .
По методу ПЦР было тестировано 18 фрагментов разной длины. Кроме того, часть образцов ДНК не давала амплификации (0-вариант). Каждый из амплифицированных фрагментов характеризует аллельный вариант гена. Наибольшее количество вариантов гена DRB выявлено в холмогорской породе (12 аллелей), причем копии гена представлены фрагментами разной длины, частоты которых варьируют от 0,09 до 1,00 ( табл. 7). У чернопестрой породы выявлено 7 аллелей, которые представлены в данной группе животных с высокой частотой (не менее 0,45) и два из них характерны только для этой группы и, по-видимому, могут служить её породными маркерами. Крайне ограниченное число аллелей у исследованных групп герефордской породы и зубров (3 и 2 аллеля соответственно). У герефордских животных найдены, встречающиеся только у них, два фрагмента (180 и 199 п.н.). Фрагменты, обнаруженные у зубров (220 и 141 п.н.), имеются и у пород молочного скота.
Полученные фрагменты распределяются на несколько типов: присущие только одной породе, общие для всех изученных пород, общие для двух пород и зубров. При этом надо отметить, что выборка не вполне достаточна, т.к. в большинстве случаев колиЧество животных не велико (холмогорских — 60, черно-пестрых —
