доменов, полиморфизм будет возрастать в геометрической про. порции. Необходимо знать, какие полиморфные варианты ДНК изменяют структуру и функцию белка, кодируемого данной последовательностью. Только тогда можно оценить значимость тех или иных вариантов и перспективность их использования в селекции.
Связь BoLA с устойчивостью к болезням
Связь определенных аллелей ГКГС с болезнями изучается очень активно, но, в основном, на уровне лейкоцитарных антигенов. Однако имеется и ряд работ, раскрывающих на молекулярном уровне сложный характер изменений в самой молекуле ДНК.
Установлен факт, показывающий молекулярную основу ассоциации различных гаплотипов с ревматоидным артритом за счет того, что в различных Ь-цепях (кодируемых генами класса II) присутствует общий эпитоп. Применение ПЦР-анализа в сочетании с секвенированием позволило выявить у 83% из обследованной группы больных высококонсервативный эпитоп в Ъ-цепях, кодируемых гаплотипами DR4 и DRI. Два из субтипов DR4 (Dw4 и О\14) ассоциированы с заболеваниями, а два других (Dwl0 и Dw13) нет. Показано, что первые два субтипа несут общий гипервариабильный аллельный участок, локализованныйс 67-й по 74ю позицию последовательности аминокислотных остатков, а два последних имеют значимые замены в этом участке. В DRI третий гипервариабильный аллельный участок отличается от такового у DR4Dw4 и Dwl4 одной молчащей заменой в 71-м положении (B.R. Wordsworth et al., 1989).
Описано существование делеций в центральной части HLA, которые изменяют число копий генов в этом районе в тех гаплотипах, которые наиболее часто ассоциируются с аутоиммунными заболеваниями (K.Tokylada et al., 1989). Вариации числа копий генов в центральной части ГКГС нередко сопровождаются ассоциацией с аутоиммунными заболеваниями у человека, а также могут быть маркерами чувствительности к ретровирусным инфекциям (P.I.Cameron et al., 1988).
Показаны ассоциации с HLA таких инфекций, как вирусного иммунодефицита человека, проказы, туберкулеза, малярии и друГИХ.
У крупного рогатого скота эти исследования начаты в связи с заболеваемостью маститом. Эти работы проводились в ГИЗ "Лесные поляны" на животных холмогорской породы. Оказалось, что фрагменты 320 и 220 61-домена DRB могут служить генетическими маркерами восприимчивости к маститу, т.к. присутствуют только у больных животных. У этих же животных в 3 раза выше частота фрагментов в 76 и 100 п.н. (табл. 11)
Фрагменты получены в четко определенных сочетаниях (генотипах). Чаще встречается генотип A, несущий только фрагмент в 141 п.н. Причем у здоровых животных этот генотип встречается в 2 раза чаще. Варианты (генотипы) В, D и Е возможно, ассоциируют с восприимчивостью к маститу, т.к. были обнаружены только в группе больных животных. Вариант С был только у здоровых коров.
При рестриктном анализе варианта А корреляции подвариантов с устойчивостью или восприимчивостью к маститу не выявлено.
Таблица 11. Частота продуктов амплификации Ь1-домена гена ОВВ у больных маститом и здоровых коров ( С.С. Соколова, Г.Е Сулимова, 1993
| Размер фрагмента | Частота | фрагмента, % |
|---|---|---|
| здоровые животные | ||
| 320-316 | ||
| 280-278 | ||
| | 220-216 | 020 | 035 |
| В005 ТОО ПОХ ОИ | 035 | |
| ОТ ТОНИ0850.95 ПО ОИ | 035 | |
| ПТИ ПОС СООО | 0,60 | |
| 00| | ||
В группе здоровых и больных маститом коров был проведен И анализ 5'-нетранслируемой области гена ООВ. По частоте ос-
новных вариантов этого участка значимых различий не выявлено, Более существенные различия обнаружены при рестриктном ана. лизе Г-варианта. По результатам анализа можно сделать следующие заключения.
-
Подвариант L (Al+H+) - последовательность с сайтами рестрикции для Alul в районе 73-го и для НЙ в районе нуклеотида от 5'-конца фрагмента. Частота в опытной и контрольной группах различается несущественно- 0,33 и 0,39.
-
Подвариант Г, (А!-Н+) представляет собой последовательность с сайтом рестрикции для Ншй в 47-ом нуклеотиде от 5'конца фрагмента, но без сайта для Alul. Этот подвариант предполагает более высокую устойчивость к маститу. Его встречаемость у здоровых животных- 0,54, у больных- 0,2.
-
Подвариант L (AI+H-) - это фрагмент без сайта рестрикции для Hinfl, но с сайтом для Alul в районе 73-го нуклеотида. OH ассоциируется с повышенной заболеваемостью маститом. Встречаемость в группе больных животных- 0,446, у здоровых- 0,007.
Таким образом изучение 5'-нетранслируемого участка гена ООВ, ответственного за регуляторную функцию гена, подтвердило его более высокий консерватизм по сравнению с 61-доменом гена DRB. Однако полиморфизм, выявляемый с помощью рестриктаз оказался в 5'-участке гена РОВ более значимым, чем Ъ1домена гена DRB.
В целом следует надеяться, что исследования генетической структуры ВоГА в перспективе дадут основание для раннего тестирования животных устойчивых или восприимчивых к болезням.
