рующим первый домен ВоГ.А-ОВВЗ, что предполагает действие отбора, способствующего генетическому разнообразию молекул. Сравнение полиморфизма локуса DRBу человека и крупного рогатого скота показывает поразительное сходство в расположении полиморфных участков и степени их полиморфности. Повидимому, большая часть полиморфных положений принадлежит сайту узнавания молекул класса II. Кроме этого отмечено 8 совпадающих полиморфных положений в молекуле DRB человека и крупного рогатого скота, лежащих, вероятно, за пределами сайта узнавания.
Нами, совместно с Институтом общей генетики РАН, был проведен анализ полиморфизма b-1 домена DRB и промоторного участка (5 область) гена ООВ у крупного рогатого скота холмогорской, черно-пестрой, герефордской пород и зубров. Применялся метод полимерной цепной реакции (ПЦР) в сочетаниис рестрикционным анализом отдельных фрагментов .
По методу ПЦР было тестировано 18 фрагментов разной длины. Кроме того, часть образцов ДНК не давала амплификации (0-вариант). Каждый из амплифицированных фрагментов характеризует аллельный вариант гена. Наибольшее количество вариантов гена DRB выявлено в холмогорской породе (12 аллелей), причем копии гена представлены фрагментами разной длины, частоты которых варьируют от 0,09 до 1,00 ( табл. 7). У чернопестрой породы выявлено 7 аллелей, которые представлены в данной группе животных с высокой частотой (не менее 0,45) и два из них характерны только для этой группы и, по-видимому, могут служить её породными маркерами. Крайне ограниченное число аллелей у исследованных групп герефордской породы и зубров (3 и 2 аллеля соответственно). У герефордских животных найдены, встречающиеся только у них, два фрагмента (180 и 199 п.н.). Фрагменты, обнаруженные у зубров (220 и 141 п.н.), имеются и у пород молочного скота.
Полученные фрагменты распределяются на несколько типов: присущие только одной породе, общие для всех изученных пород, общие для двух пород и зубров. При этом надо отметить, что выборка не вполне достаточна, т.к. в большинстве случаев колиЧество животных не велико (холмогорских — 60, черно-пестрых —
| Таблица 7. | Основные по | продукты С. С. | Соколовойи | амплификации Г. Е | Сулимовой, | b-1 домена 1993 | гена | DRB |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Размер | порода | Черно-пестрая порода | ская | Гетерофорд- порода | Зубры | |||
| фрагмента | | п | | частота | | п | | частота | | п | | частота | [п | | частота |
| 300TT | 29 | ПОЗЕ | ЗИПОЗ | |||||
| [316-320 278-280 {| | 9 | | 0166 | | 38 | | 0809 | ЗИОЗ | ПОЗ ОЗ| | ПО ~ | |
| [16 | | 0296 | | 38 | [0,809 | | - | | - | | - | | - | |
| рю | [0296 | | | ||||||
| в | ||||||||
| [240 216-220 | | 16 [ | | 0296 02% | TO | 0,809 | | - | | = [ | - | [- |
| [ 9 | [0,166 | [21 | [0,446 | | - | | - | [ШТ | 0,785 | |
| [06 | [0296 | р | ||||||
| р | ра | 02 | || | |||||
| рб | 03 | |. | | - | |||||
| 606Г | 0,296 | [р | ||||||
| в п | oo [0,296 | | - | | - | [р [- | f - | - | fp - | |
| 54 | | 100 | [47 [ | 1,000 | | 18 | [| 10 | | 14 | | 100 | |
| ПЕ | ПЕНИ | ГУС 4 [| | - | ПО tooo | ОРЗ ПОЗ | ПОЗ ПОЗА | ПОЗ ПЕН | ООО ПО |
| 0.487 [| | - | [| - [ | - | f - f | - | y | ||
| ор | ||||||||
| [| | 039 | ooo | ||. | - | ||||
| Г Примечание: | 4^ - | средняя [00| | |[01 аллельная | [09| | частота; (1-4^) | [| - | среднее 0,56 [044 | | | | значение | [0,891 0.109 гетерози- |
готности.
Отдельные амплифицированные фрагменты присутствуют У исследуемых животных одновременно, составляя устойчивые сочетания (варианты), определяющие генотип животных по данному локусу (табл. 8). Максимальное количество продуктов амплификации разной длины, полученных из одного образца ДНК было равно 12-ти, что свидетельствует о возможности присутствия шести копий гена на гаплоидный геном. Среднее значение гетерозиготности у животных черно-пестрой породы оказалось очень низким (0,189), так же как у зубров (0.109). У животных холмогорской породы значение гетерозиготности несколько выше, чем у герефордов (0,631 и 0,484 соответственно). При оценке полу-
ченных результатов сделан вывод, что самый высокий полиморфизм гена ОВВ имеет место у холмогорской породы.
Вариант А (генотип), имеющий только фрагмент в 141 п.н., был подвергнут рестриктному анализу рестриктазами М5р! и Hinfl. Анализ показал наличие полиморфизма, позволившего выделить 6 подвариантов этого варианта (табл. 9).
Полиморфизм гена BoLA-DQB исследованы по 5*нетранслируемой области гена. Изучение полиморфизма регуляторной области гена представляет особый интерес, т.к. в этом случае можно ожидать, что варианты полиморфизма чаще будут значимыми, т.е. разные аллельные варианты могут различаться по уровню активности или специфичности. Определенный интерес представляет также оценка уровня вариабильности этой области гена у разных пород и групп животных.
При амплификации указанного участка гена у черно-пестрой и герефордской пород, а также у зубров был обнаружен фрагмент, размер которого составлял 149 п.н. и частота 1.0, т.е. все исследованные животные данных групп имели один аллельный вариант. Этот вариант обозначен, как L. У холмогорской породы этот вариант имел частоту 0,533, т.е. почти в 2 раза ниже, чем в других группах. (табл. 10). М-вариант имеет размер 156 п.н. и частота его у холмогорских животных довольно высокая (0,266). У отдельных животных обнаружены оба варианта, а их генотип был обозначен, как ГМ. Кроме этого у животных холмогорской породы имели место случаи отсутствия амплификации, обозначенные как 0-вариант. Авторы объясняют отсутствие амплификации или заменами в районе 3'-концевых нуклеотидов, что препятствует амплификации или иными более сложными изменениями нуклеотидной последовательности исследуемого участка. Однако, это не является артефактом, поскольку те же образцы с другими парами праймеров давали эффективную амплификацию. Таким образом, 0-вариант может быть представлен не одним, а несколькими мутантными формами.
При изучении рестриктного полиморфизма 5-нетранслируемого участка гена РОВ выявлено у Г-варианта 5 подвариантов. М-вариант у холмогорского скота не имеет сайтов рестрикции ни по одной из использованных рестриктаз.
