агента, антигена или нуклеиновой кислоты; 2) обнаружение специфических антител к данному возбудителю.
К диагностическим тестам предъявляются определенные требования. Они должны обладать высокой специфичностью, чувствительностью, быть воспроизводимыми, и результаты давать в короткие сроки. В лабораториях используют ряд диагностических методов, среди них серологические реакции: реакцию агглютинации (РА), реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА, РНГА), реакцию торможения гемагглютининов (РТГА), реакцию коагуляции (РКА), реакцию преципитации – кольцепреципитации (РКП), диффузной преципитации (РДП), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию длительного связывания комплемента (РДСК), реакцию прямого связывания комплемента или подавления связывания комплемента (РНСК, РПСК), метод флюоресцирующих антител (МФА), иммуноферментный анализ (ИФА); используют молекулярногенетические методы обнаружения и идентификации микроорганизмов, обнаружение бактерий в исследуемом материале методом ДНК-зодов, полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и др.
Разрабатываются новые тест-системы, так как старые не всегда удовлетворяют современные требования (низкая чувствительность, большие затраты времени, к тому же имеется определенная субъективность в учете результатов). Новые методы направлены на возможность стандартизации используемых компонентов и автоматизацию учета результатов. Для диагностики бактериальных и вирусных заболеваний животных используются стандартизированные диагностические наборы.
О порядке взятия и пересылки в лабораторию патологического материала имеются соответствующие правила и инструкции, утвержденные государственными ветеринарными органами страны. Излагаем лишь общие требования при взятии и пересылке патологического материала для лабораторных исследований на инфекционные болезни.
По согласованию с лабораторией можно послать труп теленка целиком в непроницаемой таре с нарочным. Однако чаще направляют отдельные органы или их кусочки и другой материал в соответствии с требованиями инструкций.
Патологический материал для отправки на бактериологическое исследование лучше не консервировать. Если нет возможности доставить материал в лабораторию в течение суток, то его можно консервировать в 30-50%-м водном растворе химически чистого
глицерина. Количество консервирующей жидкости должно быть в 4-5 раз больше объема патологического материала.
Для вирусологических исследований материал направляют в замороженном виде или его консервируют 30-50%-м раствором химически чистого глицерина на физиологическом растворе. Отбирают материал от трупов не позднее 2-х часов после падежа животного.
Для патогистологического исследования от свежих трупов павших или вынужденно убитых животных из разных участков патологически измененных органов и тканей вырезают тонкие кусочки длинной и шириной 1-2 см, толщиной не более 1см, помещают их в стеклянные банки с 10%-м водным раствором формалина (10 мл продажного формалина и 90 мл воды). Объем раствора берут в 10 раз больше, чем объем взятого материала.
Некоторые примеры. Для исследования на стрептококковую инфекцию животных в лабораторию направляют кровь сердца, части печени, селезенку, головной мозг, трубчатую кость. При пневмониях – кусочки легкого на границе здоровой и пораженной ткани, средостенные лимфатические узлы, при артритах – синовиальную жидкость.
Материал необходимо доставлять не позднее 6 часов после гибели или убоя животного, при условии транспортировки его в термосе со льдом (4-60 С). При более высокой температуре срок доставки материала не должен превышать 2-3 часа.
При жизни от больных животных при многих болезнях в лабораторию направляют сыворотку крови, истечения, слизь и смывы из носа, глаз, пробы фекалий. Фекалии (2-5г) берут из прямой кишки в стерильные пробирки с помощью прокипяченного катетера (резиновый) не менее чем от 5 животных, не подвергавшихся лечению (антибиотики, сульфаниламидные препараты).
Определение сероконверсии (прироста специфических антител) у реконвалесцентов проводят методом парных сывороток крови. Это проводят так: пробы крови (не менее 5 мл) отбирают у животных из яремной вены в первые три дня болезни, а следующие пробы через три недели у них же (в стерильные пробирки с соблюдением правил асептики и антисептики.)
Отбор материала в лабораторию для полимеразой цепной реакции (ПЦР) должен проводиться согласно соответствующих инструкций. Например, для диагностики хламидиоза используют
паренхиматозные органы павших или вынужденно убитых животных: перевязанный лигатурой с двух сторон сычуг (абортированных плодов), замороженную сперму или пробы эякулята, мочу от производителей (подозрительных по заболеванию), соскобы слизистых оболочек конъюнктивы и урогенитального тракта. Материал доставляют в день взятия или на следующий день (сохраняя при температуре 40 С).
Лабораторная диагностика паразитарных болезней
По существу в пособии приведены только гельминтозы, и поэтому в краткой информации об этом и будет идти речь. Как и при заболевании инфекционными болезнями, различают прижизненную и посмертную диагностику гельминтозов, которая основана на обнаружении в объекте целых гельминтов или фрагментов, яиц или личинок паразитов.
Прижизненную диагностику на гельминтозы проводят по тем же правилам, как и при других заболеваниях: обнаружение и идентификация возбудителей, выяснение клинических признаков и эпизоотологической обстановки.
Известно, что яйца или личинки гельминтов большинства видов выходят во внешнюю среду через желудочно-кишечный тракт, поэтому основными методами прижизненной диагностики являются различные способы анализа фекалий. Для диагностики отдельных гельминтозов существуют методы исследований других продуктов экскреции организма, патологического материала.
Как и при диагностике инфекционных заболеваний животных, не подменяя отдельные наставления и инструкции по лабораторной диагностике, приведем лишь некоторые общие требования и правила взятия и отправки материала на исследование.
В зависимости от вида возбудителя копроскопические исследования могут быть направлены на выявление в исследуемых фекалиях яиц гельминтов (гельминтоовоскопия), личинок (гельминтолярвоскопия), самих гельминтов или их фрагментов (гельминтоскопия).
Пробы фекалий у телят берут из прямой кишки двумя пальцами руки – средним и указательным (на руках должны быть тонкие
