Биотехника размножения сельскохозяйственных животных. Часть 3. Разбавление и хранение спермы. Осеменение самок сельскохозяйственных животных и птиц

Водд аистиллированна я……………1 ..0 0м ,л Лактоз а………………………………1 . ,г 0,1 Натрид йвууглекислы й…………… ,г 0,8 .. Натрил йимоннокислы й……………8 0,9м ,г Хелато н………………………………1 0 0м ,г Желток куриныя хи ц……………… 6,1 ..м ,л Спермосан- 3……………………2 ..4–3т 0ые .с .д Эт ажс еред ,анд с ообавлением 5,3 мг ллицерин априменяетс ядл я разбавлени яз иамораживанис япермы. .2.6 Приготовленис ере дит ехнологии разбавленис япермы Приготовлени е сре.д Среды готовя т в ден ь разбавлени я спермы . Работ у п о разбавлению спермы проводя т в стерильно й камер е ил и в специально оборудованно йлабораторио ,иблученноб йактерицидным и лампам .и Температур( у18–20 � С ) в лаборатори и поддерживаю т бытовымк иондиционерам.и Среды длк яраткосрочногх ораненис япермы бык а ибарана (ГЦЖ ) готовя т следующим образом . В химическую колб у наливаю т дистиллированную (бидистиллированную ) вод ,у закрываю т колпачком и з пергаментно й бумаг и и стерилизую т кипячением в течени е 5– 7 мин ; затемо хлаждаюд т3 о5 � С . Нт аочныв хесао хтвешиваюг тлюкоз у инатри яцитра тв иысыпаю т ид в хругуюс терильнуюк олб .уСтерильно ймензурко йил ицилиндром отмериваю тнужнок еоличеств опрокипяченнов йоды ,переливаюе т в е колб у с реактивам и и размешиваю т д о полног о и х растворени .я Ра-с тво рфильтрую тчере збумажны йфильт рс итерилизуюв в тодяно йб-а н5 е–1 0ми .нОхлаждаюд т3 о5 � Сд и обавляюс тпермосан- и 3желто .к Свежи( е1– 2дн )якуриныя ейц амоют теплов йодо с йдетергентом , затем промывают тепло й идистиллированнов йодо ,йобеззараживаю т 70%-ным этиловым спиртом и высушиваю .т Стерильным скальпелем яйц о раскалываю т пополам ,и оставля я желто к в одно й половинк е скорлупы , сливаю т в чашк у бело ;к пр и этом следя ,т чтобы оболочк а желтк а н е был а поврежден а острым краем скорлупы . Осторожн о н-а клоняс якорлуп ,уперемещаю тжелто кнс атерильную фильтровальную бумаг .уДл яосвобождени яжелтк ао тоставшейс ячаст ибелкк ара йбумаг и приподнимаю ,т поворачиваю т в разны е стороны и скатываю т медленн ожелтод к кругоме ук ераю .Поддержива яжелто кн анескол-ь к о сжато й бумаг ,е стерильным пинцетом ил и скальпелем разрушаю т ег о оболочк у и выливаю т в подготовленную мензурк у (цилиндр .) Оди н желто к имее т объем 10–2 0 м .л Приготовленна я сред а должн а быт ьиспользовант в аечени3 е– .ч 4Вэ тв ореме я еможнх оранить пр и температур3 е2–35^о Ст в ермостати елв иодяноб йан.е

Сред а ЛХЦЖ дл я разбавлени я спермы жеребца . Отвешиваю т согласн орецепт улактоз у ихелато н ивысыпаю тс втерильную колб .уВ эт у колб у добавляю т 2,0 м л 2,4%-ног о стерильног о раствор а натри я гидрокарбонат а и 2,0 5 м л 37,5%-ног о стерильног о раствор а натри я цитрат( аи зрасчет ан акажды е10 0мс лреды ) иприливаю тнеобходимок еоличеств опрокипяченно йохлажденно йдистиллированнов йоды . Содержимо е растворяю ,т фильтрую т чере з стерильны й бумажны й фильтд и робавляю тжелто .к Сред у ГХЦС дл я разбавлени я спермы хряка в форм е сухиз хаготово ,к выпускаемы х лабораториям и научно-исследовательски х институто ,в готовя т согласн о наставлению п о применению "Глюкозо-хелатоцитратно-сульфатно-бикарбонатнос ймесп в иорошке." Сред а ГХЦ дл я разбавлени я спермы хряка такж е выпускаетс я в форм е сухиз хаготово к ил и ж е ег еотовя т в лаборатори и пункт .а Дл я этогс отерильным мерным цилиндром ил имензурко й отмериваю т н-е обходимы й объем прокипяченно й дистиллированно й воды и переливаюе т е вхимическуюс терильную колб .уСюд аж евнося твзвешенны е н а точны х веса х необходимы е компоненты , кром е санирующи х препарато .вПриготовленнуюс ред укипятя в тводяно йбан е5–1 0ми ,н охлаждаю т д о 40–45 � С и добавляю т спермосан- 3 и з расчет а 250–30 0 тые .с .дн а100 0м .лКолбз уакрываюс ттерильно йпергаментно йбум-а го и йфиксируюр тезиновымк ольцом. При использовани иЛЖГ и ЛЖЦГс ред длс япермыб ыка ч вистую стерильнуюк олб уналиваю тнеобходимыо йбъемб идистиллированно й (дистиллированной ) водыз ,акрываю т колпачком и з пергаментно й бумаг ик иипятя1 т0–1 5ми .нВг орячую( 90–95 � Св )одв уносял тактоз у и перемешиваю т д о полног о растворени я порошк ;а добавляюг тлиц-е ри н и содержимо е ещ е ра з тщательн о перемешиваю ,т з аатем охлаждаюд т2 о0–30 � С . В охлажденнуюс ред удобавляю тсанирующи йпрепара ,траствор-я юе тгд ,ообавляю тжелто к и натриц яитра( тс вред уЛГЦЖк в ,оторо й лактозы 1 г 5,0 инатри яцитрат а .)г 2,0Колб уплавн опокачиваю тд о полног орастворени я иразмешиванив ясек хомпоненто .вПосл еприготовленич яастс ьреды( 20% ,)предназначеннуюд л япервичногр оазбавлени я спермы , помещаю т в термоста т пр и 27 � 1 � С . Другую част ь о-с тавляю т пр и комнатно й температур е (18–20 � С ) и использую т дл я окончательног о разбавлени .я Приготовленна я сред а должн а быт ь и-с пользовант в аечени3 е–.ч 4 Пр и использовани и желточно-цитрато-глицериновой среды сн-а чалг аотовя т цитратны й буфе .р Н а аналитически х ил и другит хочны х весао хтвешиваю2 т г 9натри яцитрат( аNa3^C 6^H 5^O 7^� 2^H 2O )ХЧ ил иЧДА . Навескв унося в тмернуюк олбв уместимостью1 00 0д иобавляю5 т00– 60 0м лдистиллированно йводы .С помощью магнитно ймешалк ира-с

творяю тнавескз ,уатем добавляюв тоды д ометк .иРаство рперелив-а юк в толбд улс ятерилизаци .иКолбз уакрываю тпергаментноб йумаго й ипомещаюа в твтокла .вВыдерживаюа в твтоклавт в еечени е3 0ми н пр и давлени и 2,0 атм . Допускаетс я стерилизаци я в кипяще й водяно й бант в еечени1 е 0ми .н Можн о стерилизоват ь буфе р и путем филь-т рацие иг очере змембранны йфильт с рвеличино йпо р4,0 5мкм с вт-е рильную посуд .у Посл е стерилизаци и раство р долже н имет ь осмотическо е давлени е 285–30 0 mOsm s и рН 8,6– .9,6 Храня т в течени е 1– 2 неделп ьр5 и � Сд и оспользовани.я Дл яприготовлени я молочнос йреды используюс твеже еил ипаст-е ризованно ,е гомогенизированно е цельно е молок о жирностью окол о 5,3%( илг иомогенизированны е сливк и + обра т и з расчет а получени я смес ,ижирностью5,3 % .)Тако емолокс оодержив тредныд елс яперм-а тозоидоэ внзимы , н о пр и нагревани и ег о т вечени е 1 0 мину т пр и 92– 95 � Со нр иазрушаютс .яПрогреваю тмолокз в оакрытомд войномс теклянном бойлер еил и вводяно йбан ;езатем охлаждаю тд о комнатно й температуры . Переливаю т охлажденно е молок о в стерильную колб ,у оставля я пен у в бойлер е ил и пр и необходимост и фильтрую т чере з стерильны й фильт .р Разделяю т н а дв е фракци .и Пр и использовани и гомогенизированны х сливо к и обрат а посл е стерилизаци и и охлажд-е нис ямес к ине йприливаюс ттерильныр йаство рфруктозы д иистиллированную водз а ,уатем разделяю т н адв ефракци .иВ фракцию А молочныс хре ддобавляюа тнтибиотик ,и вфракцию Б – глицери .нПервую фракцию оставляю тпрт иемператур е323...5 � С а ,фракцию Б охлаждаюд тт оемпературы4 � С . Пр и приготовлени и среды ВИКА дл я спермы барана токоферо л може т быт ь замене н 0,0 5 г ди-трет-бутил-крезолом( ДТБК .) Раство р сахарозы и натрий-кальциевую сол ь ЭДТА стерилизую т в водяно й бан е в течени е 1 5 ми .н Желто к эмульгирую т с токоферолом в ст-е рильном мерномс такан в еводяно йбан епрт иемператур е37 � С т в-е чени е 5– 7 ми ,н постоянн о помешива я стеклянно й палочко( йудобне е пользоватьс ямагнитно ймешалкойЗ .)атемэ в тос ттакав ннося тпосл-е довательнс отерильныр йаствос рахарозыс с олью ЭДТАс ,пермосан- 3 г илицери .нТехник априготовлени яЛЖГТЦГ-среды болес еложна ,я чт о обусловлен о требованиям и длительно й стерилизаци и в водяно й бан( е3 0 ми н дл я ЛЖ-среды и 6 0 мину т дл я ЛЖГТЦГ-среды ) все х компоненто ,вкром ежелтк ас ипермосан ,аконтрол яиспаренив яоды в процесс е стерилизаци и путем взвешивани я колбы с содержимым и восполненив яоды прз иначительные хп еотеря.х Технологи яразбавленис япермы зависи тос твойст вс иоставс ар-е ды . Пр и использовани и однофракционны х сред признанную годно й посл е предварительно й оценк и сперм у бык а вначал е разбавляю т 1:1 непосредственнс в опермоприемник ;епере дразбавлениемт емперату-