Объекты исследований , материалы и оборудование : натри я хлори( дNaC ,)lнатриг яидрокарбона( тNa2HCO3 ,)натри йлимонноки-с лый трехзамещенны й двухводны й (Na3C 6H 5O 7� 2H 2O ;) спиртректифика ,т фурацили ,н кали й двухромовокислы ,й серна я кислот ,а дистиллированна я вод ;а стеклянна я посуд а (флаконы емкостью 10 0 м ,лмерны ецилиндры н1 а02 ,05 05 и0 0м ,лмернык еолбы н2 а55 ,00 0 1 и00 0м ,лколбыс теклянны ен5 а1 ,002 ,055 ,00 01 и00 0млт ;)ампонницы с притертым и крышкам ,и баночк и н а 10 0 м л с притертым и пробкамс ,итеклянныв еоронкс ,итеклянны епалочки ;марлг ,яигроскопическа яват ,абумаг афильтровальна я ипергаментна ;яножницы прямыв ;еесы аналитически еилл иабораторныв ,еесыа птечныр с еазнов-е сомс ,пиртометры ;магнитна ямешалка ;автокла ,вмембранны ефиль-т ры4,0 5мкмг ;азоваи ялэ илектрическа яплит.а Методически е указания . Заняти я проводятс я в лаборатори и к-а федры ил и учебном пункт е искусственног о осеменени .я Сначал а студенты знакомятс я с правилам и приготовлени я растворо ,в тампоно ,в марлевы х салфетоз ,катем самостоятельнг оотовя т оди н и з растворо в илс иалфеткт ,иампоны ,фильтры .Целесообразнс отудентамр аботат ь парам .и Приготовлени ефизиологическог ораствор .а Нужно еколичеств о дистиллированно( йочищенной ) воды отмериваю т цилиндром и пер-е ливаю в тконическую колб .уНв аеса хотвешиваю тхимическ ичисты й натри йхлори ди зрасчет а г 9,0н а10 0мв лоды ипомещаю в тколб с у водо .йЕсл инатри яхлори драсфасоват в наблетка хпт ,г 9,0 о онк аажды1 е0 0мв лодыб еруо тднт уаблетк .уКолбз уакрываю тпергаментно й бумаго ,йпомешиваю тд ополног орастворени янавеск и иподогреваю т дк оипени .яВместд оистиллированнов йоды можни оспользоватв ьод у очищенную , приготовленную путем фильтровани я вбытовы хочистителяв ходопроводнов йоды .Готовяр таствое ржедневн.о Применяю тфизиологически йраство рдл япромывани явнутренне й поверхност и инструмент а дл я осеменени ,я обеззараженног о 70%-ным спиртомс( теклянны е шприцы-катетеры и микрошприцы ,) резиновог о катетер а дл я осеменени я кобы л посл е стерилизаци и кипячением , увлажнени явлагалищногз оеркал а илс итеклянног орасширителт а ,яакжп еро иценкк еачествс апермы. Приготовлени е 70%-ног о спирт.а Дл я приготовлени я 10 0 м л 70%-ног оспирт в амерны йцилинд рналиваюд тистиллированнов йоды 7 3 м л и добавляю т д о метк и (2 7 мл ) 96%-ног о спирт а этиловог о с(пирта-ректификат .)а Расче т дл я приготовлени я спирт а проводя т п о формуле
96% – 10 07 0· 100
70% – х х = ----------------- =7 8,2
9 6
Крепост ьприготовленногс опиртк аонтролируюс тпиртомером .Дл я этог о размешиваю т стеклянно й палочко й спир т с водо й и медленн о опускаю в тцилиндс рпиртоме .рПослс етабилизаци иположени яприбор ап ошкале ег оопределяю ткрепостс ьпирт .аХраняс тпир т вб-а ночк е с притерто й пробко .й Использую т дл я обеззараживани я вну-т ренне й поверхност и стеклянног о инструмент а (шприцы-катетеры , микрошприцы ,) а такж е трубо к и з полимерны х материало ,в используемы х пр и извлечениз иародыше .й Посл е обеззараживани я остатк и спирт а удаляю т тщательным промыванием инструмент а 9,0%-ным раствором NaCи lлс иредо йДюльбекк.о Приготовлени е9,2%-ног ораствор анатри яцитрат а с(м .приготовлени ежелточно-цитрато-глицериновос йреды.) Применяюр таство р дл яоттаиванис япермыз ,амороженног в йранула ,хпр иоценк екачес-т в а свежеполученно й и сохраняемо й спермы и в качеств е компонент а желточно-цитратнос йредыд лр яазбавленис япермыб ык.а Приготовлени е раствор а фурацилин .а Готовя т 0,02%-ны й ра-с тво р фурацилин а н а физраствор .е Дистиллированную (очищенную ) вод уподогреваю тдк оипениз ,яатем помещаю тнавеск унатри яхлорид( ан1 а0 0мв лодыс г 9,0 оли ) ифурацилин аир засчет г 2,0 ан( л 1 а2 0 м г н а кажды е 10 0 мл .) Тщательн о размешиваю т и переливаю т в ст-е рильнуюб утыл ьит земногс отекл .аХранят в теченид евух–тред хне в й затемненном мест .еПрименяю траство рдл яобработк иискусственны х вагин посл е использовани ,я подмывани я препуци я у производителе й пере д получением спермы и наружны х половы х органо в у коро в и свинеп йерео дсеменением. Приготовлени е 1%-ног о раствор а гидрокарбонат а натри.я В коническуюк олб ун а50 0м лналиваю тдистиллированную вод ус ит-е рилизуют в течени е5,0– 1ми нкипячением .Охлаждаю тпроточнов йодо й ил и даю т остыт ь пр и комнатно й температур е д о 40–45°С . Затем отвешиваю тнеобходимок еоличествг оидрокарбонат анатри яир засч-е т а г 1 н а 10 0 м л воды . Навеск у помещаю т в стерильную стеклянную колб .уОтмериваюс ттерильным цилиндром( мензуркой )необходимо е количеств о простерилизованно й дистиллированно й воды и перелив-а юе т в еколб с унавеско .йКолбз уакрываюс ттерильно йпергаментно й бумаго .йПомешиванием добиваютс ярастворени янатриг яидрокарбонат .аНельз янагреват ьраствос рвыш е60°Ст ,ак ка кнатриг яидрокарбона тразлагаетс яс итановитст яоксичным длс яперматозоидо .вГотовяр таствое ржедневн.о Использую т пр и оценк е качеств а спермы , длу явлажненив ялагалищногз оеркал а ипромывани яинструменто ,абработанног7 о0%-нымс пиртом . Приготовлени е фосфатно-солевог о буферс( ареды Дюльбекко.) ФСБг отовя т путем смешивани я тре х различны х стерильны х растворо.в
Раство рФСБ-А. В мернуюк олбн у л 2 аналиваюб л 5,1 тидистиллированнов йоды п иомещаю в тне енавески :натрих ялорид2 ак ,г 0-а лих ялоридк ,г 5,0 аали яфосфорнокислого однозамещенног и г 5,0 о натри яфосфорнокислогд овузамещенног1 о2-водногв ,оысушенногд оп оостоянно ймассы – 8,2 .г 8Помешиваниемр астворд аобиваютс я растворенив янесенныс холеЗ .йатемд обавляюв тодыд ометк ит ищ-а тельнп оеремешиваюп с томощью магнитно ймешалк .иБуфер разливаюп т4 о0 0мб в лутыло ибъемом5 0 0м .лДлс ятерилизациа ивтокл-а вируюп трд иавлениа 1 итмт в .ечени1 е 5ми .нХраня тпрк иомнатно й температур.е Раство рФСБ-Б . В мернуюк олбн у2 а5 0мв лнося тнавескк уальцих ялоридб аезводногв ,оысушенногд оп оостоянно ймассы – 2,0 г 5 д иобавляюд т ометкб иидистиллированнов йодып рп иостоянномп о- мешивани .иПриготовленныр йаствор разливаюп т5 о 0мв л офлаконы илк иолбыс оответствующее ймкостз ,иакрываю тпергаментноб йум-а гос и йтерилизуюа твтоклавированием прд иавлениа 1 итмт в .ечени е 1 5ми нХраня тпрк иомнатнот йемператур.е Раство рФСБ-В . В мернуюк олбн у2 а5 0мв лнося тнавеск ума-г них ялорид6 а-водногв ,оысушенныд йп оостоянно ймассы – 2,0 и г 5 добавляюд т ометкб иидистиллированнов йодып р ипостоянномп о- мешивани .иПриготовленныр йаствор разливаюп т5 о 0мв л офлаконы илк иолбыс оответствующее ймкостз ,иакрываю тпергаментноб йум-а гос и йтерилизуюа твтоклавированием при давлениа 1 итмт в .ечени е 1 5ми .нХраняп трк иомнатнот йемператур.е Дл яполучени яполног оФСБс мешиваю4 т0 0м лФСБ-А5 с 0м л ФСБ-Б и 5 0 м л ФСБ-В .Вт аком вид е буфе р можн о хранит ь пр и 4°С дд овун хедел.ь Использую т фосфатно-солево й буфе р в качеств е среды дл я промывани яматкп ир иизвлечениз иародышек у йоров-доноро.в Приготовлених еромовойс меси. Вк оническуюк олбо утмериваю т 1 лдистиллированно йводы ирастворяю т вне й6 г 0кали ядвухромовокислог ,о а затем осторожн о добавляю т малым и порциям и 10 0 м л концентрированно й серно й кислоты . Приготовленно й хромово й см-е сью обрабатываю т сильн о загрязненную стеклянную посуд .у Посл е тщательн о промываю т проточно й водо ,й споласкиваю т дистиллированнов йодо йв иысушиваю.т Приготовлени ераствор аперекиси водород .а Дл яприготовлени я 1 0 л раствор а в стеклянную бутыл ,ь в кастрюлю ил и ведр о наливаю т 875 0м лпитьево йводы ,добавляю т120 0м лперигидрол и и5 г 0моющег о средствт аип" аПрогресс" ,"Сульфанол " ил и д .р Раствог ротовя т непосредственн о пере д употреблением. Норм а расход а дезинфицирующег о раствор а 70–10 0 м л н а 1м2 . Использую т раство р дл я мыть я поло ,в сте н и мебел и в бокса х дл я работы з сародышам .и Можн о и-с пользоватэ ьто т раство р и пр и уборк е манеж а и чуче л дл я получени я
