.2.7Храненис епермы в жидкома зот( епри – 196 � С )
Замораживани е спермы бык а в гранула.х Разбавленную сперм у выдерживаю в тхолодильник епрт иемператур е+...2+4оСт в ечени е4– 5 .ч Затем в теплоизолированную емкост ь ил и широкогорлы й сосу д Дьюар аналиваю тн а2/3 жидкиа йзо .тФторопластовую пластин уобтираюс тпиртовымт ампоном ,опускаю т вжидкиа йзо т вширокогорломс осуд еДьюар а иохлаждают в течени енескольких мину тд опр-е кращеник яипениа язот .аЗатем пластин уподнимаюв к терхнемк ураю сосуд а ипосл еиспарениа язот апротираюе тс еухимс терильнымв а-т нымт ампоном с и помощью бюретк ,ишприц а ил иразливочно йм-а шины разливаю т сперм у в лунк и пластины . Пластин а в эт о врем я должн а имет ь температур у мину с 161...070 � С . Посл е тог о ка к в последне йлункс епермз аатвердее ,тпластин уопускаю тближ е кжидкома узот ув иыдерживаю тнр аасстояни5 и–1с 0мо тповерхноста изот ат вечени е1– 2ми .нДале епластин упогружаю тн а 1ми н вжидки й азог ,тд епроисходид тальнейшео ехлаждениг ерануо и лтделени еио х т пластины . Затем пластин у поднимаю т и з жидког о азот а д о верхнег о уровнс яосудс ,агребаюг транулы вохлажденны й контейне р и пер-е носяс в тосу дДьюарн ад алительнох еранени.е Это т спосо б расфасовк и хранени я спермы в настояще е врем я и-с пользуетск ярайнр еедк .о Замораживани е спермы бык а в полипропиленовы х соломинка х (пайетах.) Посл е финальног о разбавлени я спермы ЛГЖ-средо й пр и температур е 18–20 � С сперм у расфасовываю т в стерильны е полипропиленовыс еоломиныв нутренним диаметром 2мме ,мкостью 2,0 5м .л Соломины должны быт ь промаркированы . Эт о делаетс я н а машин е М6-ММС- 2 (ил и други ,х боле е современны х машинах ) с помощью сменяемогк олиш ,еизготовляемогд олк яаждогб оык ,аил иМ6-ММС- 3 кодово й надписью набираемы хциф .рНс аоломин е печатаетс я наим-е новани еплемпредприяти( япервы 3 ецифры ,)породб аык( адв епосл-е дующи ецифры ,)номе рбык( апят ьцифрз а ,)атем последовательн оп о дв е цифрыг о ,д меся ц и ден ь получени я спермы . Маркированны е соломинык в оробка хпомещаю в тнастольную бактерицидную камер у и стерилизуют в теченид евуч хасо.в Дла явтоматическог онаполненис яоломи нразбавленнос йпермо й ииз хакупорк иимеетсс япециальна ямашин аМ6-АПА( илд иругис еовременныа еппараты .)В коробк умашины помещаетс я70с 0оломи а ,н е в ебункероче к– 600с 0теклянны хшарико .вД оиспользованис ятеклянны е шарик и выдерживаю т сутк и в раствор е соляно й кислоты( 1 0 м лконцентрированно й кислоты н а 1 лдистиллированно йводы ,) промываю т проточно й водо ,й затем 3– 4 раза дистиллированно й водо й и засыпаю тнс аит с оотверстиям и 7,1 х 0,2мм ,чтобы удалит ьобломк .и
Высушенны ешарик ипомещаю тс втеклянную банк ус итерилизую т в сушильном шкаф упрт иемператур1 е80 � Ст в ечени.ч 5,1 е Перер даботок йорпу смашины протираю тмарлевос йалфеткойд ;-е талн ,иепосредственнс ооприкасающиесс с яоломинам ис итеклянным и шарикам( ибункер а дл я шарико в и соломи ,н укупориватели ,) обраб-а тываюс тпиртовымт ампоном .Наконечник ис иопл ,амедицински еполивинилхлоридныт ерубк иу иплотнителс итерилизуюк типячением. Коробк у с маркированным и стерильным и соломинам и фиксирую т рычагом у механизм а подач и и х н а бараба ,н подсоединяю т поливинилхлоридную трубк у с соплом дл я подач и спермы , коне ц трубк и с надетым наконечником погружаюе в тмкост с ьразбавленнос йпермой . Посл е включени я машины сперм а нагнетаетс я в соломинк у с обеи х сторо н з иакупориваетс я двум я стерильным и цветным и стеклянным и шарикам .и В процесс е работы следя ,т чтобы столби к воздушног о пузырьк а бы л длино й 5–1 2 мм , а стеклянны е шарик и заталкивалис ь н а глубин5,1 у– 2мм . Наполненны е спермо й соломины беру т в рук у воздушным и пузырькамв ини зв истряхиваю тнесколькр оад злт яогч ,отобы пузырьк и переместилис ьнс аередин .у Есл и используютс я пайеты Касст ,у о спермз ааполняетс я с одног о свободног оконц адс омачивани япробочк ии зполивиниловогс опирт а и бумаг ,и а второ й коне ц запаиваетс я ультразвуком . В ни х пузыре к воздух а отсутствуе .т Пайеты этог о тип а могу т имет ь различны й цве т (всег о 1 8 цветов ,) чт о позволяе т легч е идентифицироват ь пород у и клас с производител,я удобне е и быстре е извлекат ь нужны й образе ц спермыд л яиспользовани .я Послз еаполнени я соломины раскладываю т п о 14 3 ш .т в металлически ерамк ис иверх уприжимаю тдержателем .Рамк икладу тодн ан а другую п 5 ошту ,кпомещаюк в торобк ус итавя в тхолодильни кХЖС30к в ,0отором поддерживаетст яемпературо акол4 о � С .Вх олодильникс еперм апостепенн о иравномерн оохлаждаетс ядт оемпературы 4 � С т вечени ечасс( ас окоростью 3,0–5,0 � С вмин .)Выдерживаюс тперм у прт иакот йемператур ет вечени е3– 4 ч ипотомз амораживаю т вбиологически х хранилища х н а замораживающем устройств е – медном щит ,екоторыз йакрепляю тн арасстояни и6–с 8м о тповерхност ижидкога озот .а Дл я поддержани я стабильно й температуры н а щит е (мину с 131...050 � С ) послз еагрузк и рамо к с соломинам и и обеспечени я оптимально й скоростз иамораживани я спермы необходим о по д давлением 2,0– 3,0 атм . подават ь газообразны й азо т с вентил я газосброс а тран-с портно йцистерны .Коне цшлангд аолжел нежат ьнд анб еиологическог о хранилищ .а Есл и замораживани е производитс я бе з обдува , тогд а щиз тамораживающег оустройств адолже нкасатьс яповерхност ижидкога озот.а
Замораживанис епермыв едетст в яечени е 7ми .нПослэ етогс ооломины перенося т с помощью специально й воронк и в пластмассовы е стаканы ,наполненны ежидкима зотом з иакрепленныв е гнезда хщит а замораживающег о устройств .а Затем стаканы с соломинам и быстр о перенося т в подготовленны е канистры и размещаю т и х в биологич-е ских хранилища хХБ-и 5,0л иХБ-2,0-.1 Многиз еарубежныо ерганизаци ип оискусственномо усеменению и большинств о племпредприяти й Беларус и использую т высокотехнологично е оборудовани( еMINITUB ) дл я маркировк и соломи ,н наполн-е ни я и укупорк и и х стеклянным и шарикам и ил и п о метод у Касс ,у дл я автоматическог о контрол я замораживани я и упаковк и замороженны х соломи .нЗамораживанис епермы баран .аРазбавленнуюс перм уохл-а ждают в течени2 е–д ч 3 о+4...2 � С .Прэ итом флаконы( полиэтиленовы е капельницы ) с о спермо й погружаю т в кювет у с тепло й (22...05 � Св )одо йс итавя в тбытово йхолодильни .кПосл еохлаждени я кювет с уфлаконам и погружаю тт вающи йле дд омоментз аамораживанис япермы. Спермз уамораживаю т н а поверхност и сухог о льд а ил и н а охлажденно йд омину с80 � С фторопластово йпластин .еДл яобеспеченит я-а ко й температуры пластин у посл е охлаждени я в жидком азот е поднимаю т и устанавливаю т с помощью штатив а н а уровн е верхнег о кра я широкогорлогс оосуд ав иыдерживаю т4– 6ми .нПослэ етог в олунк и пластины накапываюс тперм уп 2,0 ом .лКат колькс опермз аатвердее ,т пластин у опускаю т ниж е и выдерживаю т на д поверхностью жидког о азот ан арасстояни и3–с 5мт в ечени е5,1– 0,2миз а ,натем погружаю т н а 1 ми н в жидки й азо .т Посл е окончаниз яамораживани я пластин у извлекаю тиа ззот ас иобираюг транулыа в люминиевыт еубы ил им-е шочк иит зонкоа йлюминиево йфольг .иЕмкост идолжны быт ьпромаркированы .Замороженнуюс перм упомещаю тс восу дДъюар ан а карантиннох ераненин е2 ад 8не.й Замораживани е спермы жеребц.а Дл я замораживани я и длительногх оранени в яжидкома зотс епермр уазбавляю тЛХЦЖ-средо й с добавлением глицерин .а Разбавляю т такж е в соотношени и ,3:1 в оди нприем .Разбавленнуюс перм уобъемом н еболе е10 0м лпр ивысотс елос 5,2 ямк в олбв еыдерживаюх в толодильник ч 2 ез иамораживаю тн аповерхностс иухог ольд аила в илюминиевы хпакета в хпара х жидкога озот .аПрз иамораживани в иформ егранус лперм унанося т каплям ип о 2,0м в ллунк ин аповерхностс ьухог ольдв ;аыдерживаю т т вечени е 5ми ,нпосл ечегг оранулыс обираю т иупаковываюа в тлюминиевыт еубы ил ипластмассовыс етаканы и помещаю т н а хранени е вжидкиа йзо .тВк аждоу йпаковкд еолжнб оыт1 ь25–13г 0рануч ,лт о составляео ткол2 о 5мо лттаяннос йпермы . Пр ииспользованиа илюминиевыт ху( бпакетовз в )ависимост ио т ив хеличиныс пермр уасфасовываю тп2 о 5м лил1 и 3м .лВо боис хлу-
