Замораживанис епермыв едетст в яечени е 7ми .нПослэ етогс ооломины перенося т с помощью специально й воронк и в пластмассовы е стаканы ,наполненны ежидкима зотом з иакрепленныв е гнезда хщит а замораживающег о устройств .а Затем стаканы с соломинам и быстр о перенося т в подготовленны е канистры и размещаю т и х в биологич-е ских хранилища хХБ-и 5,0л иХБ-2,0-.1 Многиз еарубежныо ерганизаци ип оискусственномо усеменению и большинств о племпредприяти й Беларус и использую т высокотехнологично е оборудовани( еMINITUB ) дл я маркировк и соломи ,н наполн-е ни я и укупорк и и х стеклянным и шарикам и ил и п о метод у Касс ,у дл я автоматическог о контрол я замораживани я и упаковк и замороженны х соломи .нЗамораживанис епермы баран .аРазбавленнуюс перм уохл-а ждают в течени2 е–д ч 3 о+4...2 � С .Прэ итом флаконы( полиэтиленовы е капельницы ) с о спермо й погружаю т в кювет у с тепло й (22...05 � Св )одо йс итавя в тбытово йхолодильни .кПосл еохлаждени я кювет с уфлаконам и погружаю тт вающи йле дд омоментз аамораживанис япермы. Спермз уамораживаю т н а поверхност и сухог о льд а ил и н а охлажденно йд омину с80 � С фторопластово йпластин .еДл яобеспеченит я-а ко й температуры пластин у посл е охлаждени я в жидком азот е поднимаю т и устанавливаю т с помощью штатив а н а уровн е верхнег о кра я широкогорлогс оосуд ав иыдерживаю т4– 6ми .нПослэ етог в олунк и пластины накапываюс тперм уп 2,0 ом .лКат колькс опермз аатвердее ,т пластин у опускаю т ниж е и выдерживаю т на д поверхностью жидког о азот ан арасстояни и3–с 5мт в ечени е5,1– 0,2миз а ,натем погружаю т н а 1 ми н в жидки й азо .т Посл е окончаниз яамораживани я пластин у извлекаю тиа ззот ас иобираюг транулыа в люминиевыт еубы ил им-е шочк иит зонкоа йлюминиево йфольг .иЕмкост идолжны быт ьпромаркированы .Замороженнуюс перм упомещаю тс восу дДъюар ан а карантиннох ераненин е2 ад 8не.й Замораживани е спермы жеребц.а Дл я замораживани я и длительногх оранени в яжидкома зотс епермр уазбавляю тЛХЦЖ-средо й с добавлением глицерин .а Разбавляю т такж е в соотношени и ,3:1 в оди нприем .Разбавленнуюс перм уобъемом н еболе е10 0м лпр ивысотс елос 5,2 ямк в олбв еыдерживаюх в толодильник ч 2 ез иамораживаю тн аповерхностс иухог ольд аила в илюминиевы хпакета в хпара х жидкога озот .аПрз иамораживани в иформ егранус лперм унанося т каплям ип о 2,0м в ллунк ин аповерхностс ьухог ольдв ;аыдерживаю т т вечени е 5ми ,нпосл ечегг оранулыс обираю т иупаковываюа в тлюминиевыт еубы ил ипластмассовыс етаканы и помещаю т н а хранени е вжидкиа йзо .тВк аждоу йпаковкд еолжнб оыт1 ь25–13г 0рануч ,лт о составляео ткол2 о 5мо лттаяннос йпермы . Пр ииспользованиа илюминиевыт ху( бпакетовз в )ависимост ио т ив хеличиныс пермр уасфасовываю тп2 о 5м лил1 и 3м .лВо боис хлу-
чаят холщин апакетс ас опермо йнд еолжн абытб ьольш е4– 5мм .П-е ре д использованием пакеты охлаждаю ,т а посл е заполнени я спермо й осторожн о вытесняю т и з ни х возду х и концы закатываю т дважды . Пакетыс с опермо йпомещаюс в тпециальныд еержател с ипенопластовым и поплавкам и и перенося т в широкогорлы й сосу д Дьюара . Выдерживаю т в течени е 5– 7 ми н в пара х жидког о азот ,а н а расстояни и 10–1 2ммо е тг оповерхност .иПослэ етог опакеты помещаю в тжидки й азон тх аранени .е Прз иамораживанис ипермы г в иранула х в ипакета х водно йдоз е (125–13г 0рануо ,лди нпакео тбъемом 2 5м лил2 и– 3пакет ап1 о 3мл ) должнс оодержатьсо якол о80 0млс .нперматозоидо а ,впосло еттаив-а ни я– 300–40 0млп .нодвижнык хлето.к .3.7Хранени ,еперевозк аио ттаиваниз еамороженнойс пермы Сосудыд лх яраненис япермы. Замороженнуюс перм ухраня в ту-з когорлыс хосуда хДьюар .аТакис еосудыр азличное ймкост и– 2 ,55 ,0 0 и50 0литро .вИзготовляютс яон ии знержавеющес йтал ,идвустенны .е Пространств омеждс утенкамз иаполняетс я порошково йил ипорошково-вакуумнот йермоизоляцие .йНг аорловинс еосуд аподвешиваютс я металлическик еанистры ил имарлевы емешочк идлс япермы .Крышк а сосуд а имее т пенопластовую втулк ,у котора я размещаетс я г ворловин .е Чтобы температур а спермы в о врем я хранени я н е повышалас ,ь в сосуд елюбогт оип адолжн ооставатьс ян емене е30–40% жидкого за о- т( ао т полно й емкости ,) поэтом у сосу д необходим о регулярн( очере з 30–6с 0уп )тополнята ьзотом . Техник а безопасности при работ е с жидким азотом . Жидки й азо т – прозрачна ,я бесцветна я и легк о испаряющуюс я жидкост ,ь удельныв йее ск 8,0 ек ,л/гипип тр итемператур емину1 с96 � С . Азо тнт еоксичео ,нднакр в оезультат еиспарени я инакопление яг о в помещени и содержани е кислород а в воздух е уменьшаетс ,я чт о можев тызыват ь улюдег йоловнуюб олг ,ьоловокружени ед иаж епотерю сознани .яПр ипопадани ин аоткрыты е участкт иел авызывае тобморожени( еожо.)г Помещени ,е в котором находятс я сосуды Дьюар а ил и стационарных еранилищ с ажидкима зотомд ,олжнб оыто ьборудован оприточновытяжно й естественно й ил и принудительно й вентиляцие .й Курени е в таком помещени и категорическ и запрещаетс .я Температур а жидког о азот аподдерживаетс ян апостоянному ровн( е–196 � Ср в )езультате ег о беспрерывног о испарени .я Поэтом у горловин а сосуд а Дьюар а н е должн абыт ьплотнз оакрыт ,аособенн опр иперевозк .еПерсонал ,ур-а ботающем у с азотом , следуе т закрыват ь горловин у сосуд а Дьюар а крышкам ,и предназначенным и тольк о дл я ни .х Есл и плотн о закрыт ь
сосут ,дв оозможее нгв озры .вНд еопускаетсэ яксплуатацис яосудо ,в у которыв херхняч яастг ьорловиныо брастаел тьдом. Пр идлительноэ йксплуатацис иосудо вДьюар априходитс япостоянн о доливат ь жидки й азо ,т в котором имеютс я примес и кислород .а Кислоро д кипи т пр и боле е высоко й температур е – мину с 183 � С . Поэтомк уонцентрацие ягс в оосуд епостепеннв оозрастае т иостающаяс я смес ь газо в становитс я огнеопасно .й Племпредприяти я должны контролироват ь содержани е кислород а в сосуда х и пр и достижени и содержани я ег о 15% перенест и сперм у в друго й сосу ,д а и з контролируемог о– слито ьстатка изотв адало и тпредметоо врганическог опроисхождени я (дерев ,а бумаг ,и тряпо ,к особенн о промасленных ) и н-а полните ьгс овежима зотом .В оизбежанив езрывз аапрещаетсу ядалят ь обогащеннуюк ислородом жидкости ьс зосуд апутемв ыпаривани.я Работат с ьжидкима зотом необходимз в оащитныо хчка хс ивободны х кожаны х рукавица ,х чтобы пр и необходимост и и х можн о был о легк о сбросит .ь Брюк и должны быт ь бе з манже т и прикрыват ь верхнюю част ь обув .и Есл и жидки й азо т попадае т н а незащищенную кож ,у е е следуе т обмыт ь водо .й Особую осторожност ь следуе т соблюдат ьпр иоттаиванис ипермыз ,амороженнос в йоломина .хПр иплохо й герметизаци и и быстром испарени и азот а в перио д нагревани я може т резк о повыситьс я давлени е в соломин ,е чт о приведе т к разрыв у е е оболочк.и Прз иаправкс еосудо вил ибиологически ххранилища зотомг ибки й шлан г опускаю т д о дн а заправляемо й емкост ,и чтобы предупредит ь выброк сонц ашланг аиг зорловиныс осуд а ипопаданиа езот анс атоящир хядомл юдеЗ .йаливата ьзос в тосун дад омедленн.о Есл и пр и испытани и сосуд а Дьюар а обнаруживаетс я нарушени е теплоизоляци и – утрат а вакуум( апокры т вблиз и горловины слоем ине ,)я егз оапрещаетс я оставлят ь н а отогре в в помещениг ,ид е могу т находитьс я люд .и Необходим о посл е слив а азот а поместит ь сосу д н а 3–с 5уто в кизолированном помещени.и Оттаиванис епермыг в ранула.х Дло яттаиванио ядног йранулы необходим оимет 1 ьм9,2 л%-ногр оаствор анатри яцитрат( авыпуск-а етса в ямпулах )в иодянуюб аню илб ииотермостат с температуров йоды 38–40 � С . У основани я шейк и ампулы с натри я цитратом делаю т кругово й надре з пилко й п о стекл .у Надпиленны й участо к протираю т спиртовымт ампоном иотламываю тверхнюю часта ьмпулы .Есл ио-т версти е недостаточн о дл я прохождени я гранулы , т о ег о расширяю т путемо ткалыванис ятерильным пинцетом небольши хучасткос втекл .а Длэ ятог ооднв уетв ьпинцетв аставляюа в тмпул ,упк оруг упродвиг-а ю тпинце т иобламываюс ттекл .оЗатема мпул с уцитратом натриз я-а рываюс ттерильнымв атным шариком ипомещаюв в тодянуюб анюз -а благовременнз( о3 а– 5минд )лп яодогрев .а
