4.1. Отбор проб
Отбор проб тканей копытец может проводиться прижизненно (биопсия), с помощью специальных инструментов, во время ортопедических расчисток, так как при их проведении предполагается удаление некротизированных тканей, излишне отросшего рога, истончение рога вокруг патологического очага. Поскольку такие манипуляции болезненны для животного, то обязательно проводится местное обезболивание (проводниковая анестезия пальцевых нервов 2% раствором новокаина по 15-20 мл на введение). После введения новокаина необходимо выждать 5-10 минут, убедиться, что чувствительность в области предполагаемого места вмешательства отсутствует. Отбор проб тканей проводится на границе здоровых и пораженных участков (рисунок 4.1.1) с соблюдением правил асептики. Рисунок 4.1.1 - Прижизненный отбор проб тканей пальцевого мякиша на границе здоровых и пораженных участков при язвенном дерматите (язве пальца) Таким же образом с применением скальпеля или ножниц можно проводить отбор здоровой и патологически разросшейся грануляционной ткани, фрагментов, содержащих копытцевый рог, т.к. на границе пораженных и здоровых тканей его необходимо истончать. Если патологический процесс небольшой и довольно глубокий (язва Рустергольца), то можно использовать конический пробоотборник (рисунок 4.1.2).
Отбор проб для микроскопического исследования также можно проводить и после убоя животных (аутопсия). Для этого удобно применять конический пробоотборник (рисунок 4.1.2) или насадку на дрель в виде трубки для высверливания пробок из дерева (рисунки 4.1.2, 4.1.3).
Рисунок 4.1.3 - Отбор проб тканей Рисунок 4.1.2 - Пробоотборники пальца с использованием пробоотборника Обращаем внимание, что для удобства отбора проб тканей на всю толщину копытца (рисунок 4.1.4), пальцы крупного рогатого скота необходимо замораживать для уплотнения мягких тканей копытца и только после этого проводить остальные манипуляции. Заморозка копытец перед отбором проб не повлияет на качество дальнейших исследований, т.к. ткани достаточно плотные и их разрыва от заморозки не произойдет. Без предварительной заморозки при отборе проб в области тех частей копытец, которые имеют подкожный слой (мякиш, кайма, венчик), при проворачивании трубки пробоотборника будет происходить расслоение между дермой и гиподермой, как следствие, проба тканей не будет содержать всех слоев. Рисунок 4.1.4 - Послойная проба тканей пальцев, полученная с использованием пробоотборника
Для гистологических исследований достаточно кусочков ткани толщиной 5 мм. Если предполагается проводить послойное исследование, то величина пробы не должна превышать размер столика (рисунок 4.1.5) для замораживающего микротома или кассеты для заливки в парафин (рисунок 4.1.6). Необходимо учитывать, что сложно сделать срез с пробы тканей, если она слишком велика или если она состоит из тканей, значительно различающихся по плотности (в этом случае срез получится неоднородным по толщине и будет сворачиваться на стекле).
Рисунок 4.1.5 - Столик для замораживающего Рисунок 4.1.6 - Кассеты для заливки в парафин микротома фирмы MICROM Перед началом исследований необходимо четко представлять, какие ткани копытец будут исследоваться и какими методами. От этого будет зависеть как отбор проб, так и фиксация тканей. Необходимо учитывать положение в копытце тканей, которые будут отбираться для исследований. Для этого кусочек нужно вырезать в форме, например, неравнобедренной трапеции (рисунок 4.1.7), основание которой будет направлено к подошве копытца, верхушка - к венчику, а скошенная сторона будет соответствовать передней копытцевой стенке. а - направление роста роговых трубочек; 1 - поперечный срез сосочкового слоя дермы; 2 - продольный срез сосочкового слоя дермы Рисунок 4.1.7 - Сагиттальный распил медиального пальца коровы. Форма проб при отборе тканей разных частей пальца
