4.5. Микроскопия гистопрепаратов 4.5.1. Обзорные исследования
Для обзорных исследований удобно делать срезы, включающие послойно все ткани копытец. Но можно готовить срезы каждого слоя в отдельности, что несколько облегчает изготовление гистопрепаратов, т.к. ткани копытец отличаются по плотности. Обзорные исследования имеют диагностическое значение для выявления патологий копытец, позволяют оценить общую картину состояния тканей, выявить патоморфологические изменения в тканях копытец при отрастании и деформациях копытцевого рога, изучить патогенез ортопедических болезней. Данные исследования включают изучение топографии и строения тканей, их клеточного состава, взаимоотношения структурных компонентов, морфологии заживления патологического очага. В наших исследованиях мы оценивалиформу волокон соединительной ткани (волнистые или распрямленные),структуру и вид слоевэпидермиса (рисунок 4.5.1.1); наличие, количество и вид кровеносных сосудов; количество и форму жировых вакуолей; форму сосочков дермы (правильные и деформированные). 1 - распрямление коллагеновых волокон; 2 - сосочки дермы; 3 - частичное отсутствие базального слоя эпидермиса; 4 - выкрошенный роговой слой эпидермиса Рисунок 4.5.1.1 - Микрофото. Патология дермы и эпидермиса копытец с отросшим рогом. Окраска по Маллори. Х-500 Иногда, при работе с толстыми гистологическими препаратами, не получается изучить структуры на всю глубину тканей из-за невозможности сфокусировать изображение. Мы делали несколько фотографий на разной глубине среза и использовали программу HeliconFocus, которая создает из нескольких частично сфокусированных изображений (рисунок 4.5.1.2), комбинируя сфокусированные области, одно полностью сфокусированное (рисунок 4.5.1.3). Программа создана для макрофотографий и для обработки изображений, полученных с помощью оптических микроскопов, а также решает проблему малой глубины резкости.
4.5.2. Микроморфометрия
Морфометрия - исследования, направленные на измерение параметров (размер, углы, концентрация и т.п.) морфологических структур органов и тканей. Микроморфометрию полученных изображений рекомендуем проводить на ПК с использованием специальных программ (cell Sens Standart, Image Scope M и т.п.).
Программа cell Sens может быть использована для работы как с «живым» изображением без захвата (фотографирования и сохранения), так и с сохраненным или загруженным фотоматериалом, Image Scope M - работает только с сохраненным изображением. Чрезвычайно важно перед проведением измерений на изображении провести калибровку объективов (первично) (рисунок 4.5.2.1) и назначить соответствующий откалиброванный объектив (Измерения ^ калибровка размеров) (рисунок 4.5.2.2), то есть убедиться в соответствии увеличения объектива, на котором была сделана фотография, со стандартизированной шкалой расстояний, данные которой внесены в память программы. Это необходимо для точности морфометрии, в противном случае цифровые данные будут различаться в разы. Р Рисунок 4.5.2.1 - Эталонная шкала для калибровки. Калибровка объектива Х60
