рования гистопрепаратов. То есть на столике для резки отобранная проба будет располагаться с учетом желаемого продольного (рисунок 4.1.9) или поперечного (рисунок 4.1.10) среза тканей или роговых трубочек. 1 - роговой слой; 2 - сосочковый слой дермы; 3 - сетчатый слой дермы Рисунок 4.1.9 - Микрофото. Эпидермис и дерма (продольный срез) стенки копытца с отросшим рогом. Окраска по Маллори. Х-125 Рисунок 4.1.10 - Микрофото. Поперечный срез сосочков дермы копытца с отросшим рогом. Окраска гематоксилин-эозином. Х-250
4.2. Методы фиксации тканей
Фиксация - метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры. Сущность фиксации заключается в том, чтобы сохранить взятые кусочки тканей от гниения и процессов аутолиза, изменяющих их структуру. Недостаточно зафиксированный или излишне обезвоженный препарат, как правило, не
пригоден для дальнейших исследований. Поэтому необходимо соблюдать общие
правила фиксации, контролировать качество реагентов для фиксирующих раство
ров. Кроме того, нужно заранее знать предполагаемые методы исследования и вид
ткани, т.к. от этого будет зависеть выбор фиксирующей жидкости и продолжи
тельность фиксации.
Фиксируемые ткани претерпевают ряд физико-химических изменений.
Наиболее существенными из них являются: быстрое свертывание белков и ча
стично липидов и переход их в такое состояние, при котором ткани не изменяются
от длительного хранения и во время последующих обработок.
• возможно выпадение формалиновых осадков, которые образуются в
результате взаимодействия формальдегида с гемоглобином.
Фиксация кальций-формолом по Бейкеру. Данный раствор используется
для фиксации липидов при подготовке к исследованию жировой ткани [4].
Приготовление раствора:
А. 10 мл 40% формалина + 90 мл дистиллированной воды.
Б. 1 г хлорида кальция.
Растворы А и Б смешивают.
Продолжительность фиксации - 24-48 ч. при комнатной температуре.
Можно сначала делать гистосрезы из нефиксированных проб тканей, а затем помещать их в фиксирующую жидкость, т.к. без обезвоживания не получится провести окраску срезов.
Если планируется готовить гистосрезы только из рогового чехла копытца или проба тканей содержит роговой слой, то фиксацию проводить не следует, т.к. структура рогового башмака становится еще плотнее и это значительно затрудняет или делает невозможным приготовление гистопрепаратов. Копытцевый рог или пробы тканей, содержащие его, сразу погружаются в специальный раствор для декальцинации, который, как правило, уже содержит формалин, и в свою очередь, препятствует аутолизу мягких тканей.
После фиксации и уплотнения ткани тем или иным способом готовят гистосрезы. Для получения тонких срезов одинаковой толщины, пригодных для микроскопического исследования, пользуются аппаратами - микротомами.
-
Замораживание ткани. При изготовлении гистологических препаратов на кри-
-
отоме применяют жидкую среду: специальный криогель или воду. Этот метод имеет ряд преимуществ:
-
✓ позволяет быстро изготовить гистологические препараты; ✓ различная толщина (от 1 до 150 мкм) гистосрезов;
