Окраска нейтральных жиров жировым красным (OIL RED) по Лилли. Фиксирование тканей проводить только в кальций-формоле, гистосрезы готовить на замораживающем микротоме. Преимущество перед окрашиванием суданом///: жир из вакуолей не вымывается, окрашиваются даже самые мелкие капельки липидов.
Приготовление красителя: внести примерно 0,5 г жирового красного (OIL RED) в 100 мл 98% изопропанола (исходный раствор). Для окраски развести 6 мл исходного раствора в 4 мл воды, оставить на 24 часа. Затем раствор фильтруют через бумагу и применяют немедленно. Полученный фильтрат использовать как основной краситель. Порядок проведения окраски: 1. Промыть замороженные срезы в воде и в 60% изопропаноле. Затем окрасить их свежим раствором жирового красного в течение 10 минут. 2. Быстро дифференцировать в 60% изопропаноле (раствор хранить в плотно закрытой посуде или каждый раз готовить свежий). 3. Промыть в воде. 4. Окрасить в гематоксилин-эозине (от 5-10 секунд до 10 минут). 5. Промыть в проточной воде (10 минут). 6. Заключить в гумми-сироп (среда очень густая, ее необходимо предварительно разогреть в термостате; долго сохнет). Результат окрашивания: липиды окрашиваются в красный (оранжевый) цвет, ядра - в синий. Пример окрашивания: Рисунок 4.4.3 - Микрофото. Крупные жировые вакуоли пальцевого мякиша анатомически правильных копытец. Окраска жировым красным (OIL RED) по Лилли. Х-250
Окрашивание волокон соединительной ткани
Окраска по методу Ван — Гизона. Окраска соединительной и мышечной тканей гематоксилин-пикрофуксиномпо методу Ван - Г изона широко используется в гистологической практике как для получения обзорных препаратов, так и для некоторых специальных целей. При этом волокна соединительной ткани за счет фуксинофилии контрастно будут выделяться на фоне других тканевых элементов, окрашенных в ярко-желтый цвет пикриновой кислотой. В качестве ядерной окраски применяется железный гематоксилин Вейгерта, который готовят непосредственно перед окрашиванием, смешивая равные объемы основных растворов Вейгерта (первого и второго), которые хранят отдельно. Первый раствор Вейгерта: в 100 мл 96% спирта растворяют 1 г гематоксилина.
-
Быстро обезводить в двух порциях 96%-ного этанола, одной порции абсолютного этанола (или карбол-ксилола), просветлить в двух порциях ортоксилола. Время пребывания срезов в каждой порции - 1-2 минуты.
-
Заключить в полистирол или другую синтетическую среду.
Результат окрашивания: ядра клеток приобретают черный цвет, коллагеновые волокна - красный; цитоплазма, кератин, эластические волокна и другие тканевые элементы - желтые.
Пример окрашивания:
-
Рисунок 4.4.4 - Микрофото. Г иподерма пальцевого мякиша
-
анатомически правильного копытца. Окраска по Ван-Г изону. Х-250 Для более контрастной и полихромной картины с выявлением форменных
-
элементов крови, фибрина можно использовать трехцветный метод Маллори. Приготовление красителя Маллори (реагенты): 100 мл 0,5% водного рас- твора кислого фуксина, 0,5 г анилинового синего водорастворимого, 2 г оранжа G, 1 г фосфорно-вольфрамовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды. Последовательность растворения: в 100 мл дистиллированной воды растворяется 0,5 г кислого фуксина. Отдельно при комнатной температуре растворяется фосфорновольфрамовая кислота в воде, добавляется анилиновый синий и оранж G. После растворения красителей жидкость фильтруется. Порядок проведения окраски: 1. Срезы обрабатываются в 3% растворе бихромата калия - 20 минут. 2. Промыть в дистиллированной воде (1 -2 минуты). 3. Окрасить в растворе кислого фуксина (5 минут). 4. Быстро ополоснуть срезы в дистиллированной воде. 5. Перенести в окрашивающий раствор Маллори (анилиновый синий и
-
оранж G на 1%-ной фосфорно-вольфрамовой кислоте) на 2 минуты (можно увеличить время для более контрастного окрашивания).
- Быстро ополоснуть срезы в дистиллированной воде.
-
Дифференцировать окраску (до контрастной синей окраски коллагеновых волокон) в нескольких порциях 96% спирта.
-
Ксилол.
-
Заключить в полистирол или другую синтетическую среду.
-
