Окрашивание волокон соединительной ткани
Окраска по методу Ван — Гизона. Окраска соединительной и мышечной тканей гематоксилин-пикрофуксиномпо методу Ван - Г изона широко используется в гистологической практике как для получения обзорных препаратов, так и для некоторых специальных целей. При этом волокна соединительной ткани за счет фуксинофилии контрастно будут выделяться на фоне других тканевых элементов, окрашенных в ярко-желтый цвет пикриновой кислотой. В качестве ядерной окраски применяется железный гематоксилин Вейгерта, который готовят непосредственно перед окрашиванием, смешивая равные объемы основных растворов Вейгерта (первого и второго), которые хранят отдельно. Первый раствор Вейгерта: в 100 мл 96% спирта растворяют 1 г гематоксилина.
-
Быстро обезводить в двух порциях 96%-ного этанола, одной порции абсолютного этанола (или карбол-ксилола), просветлить в двух порциях ортоксилола. Время пребывания срезов в каждой порции - 1-2 минуты.
-
Заключить в полистирол или другую синтетическую среду.
Результат окрашивания: ядра клеток приобретают черный цвет, коллагеновые волокна - красный; цитоплазма, кератин, эластические волокна и другие тканевые элементы - желтые.
Пример окрашивания:
-
Рисунок 4.4.4 - Микрофото. Г иподерма пальцевого мякиша
-
анатомически правильного копытца. Окраска по Ван-Г изону. Х-250 Для более контрастной и полихромной картины с выявлением форменных
-
элементов крови, фибрина можно использовать трехцветный метод Маллори. Приготовление красителя Маллори (реагенты): 100 мл 0,5% водного рас- твора кислого фуксина, 0,5 г анилинового синего водорастворимого, 2 г оранжа G, 1 г фосфорно-вольфрамовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды. Последовательность растворения: в 100 мл дистиллированной воды растворяется 0,5 г кислого фуксина. Отдельно при комнатной температуре растворяется фосфорновольфрамовая кислота в воде, добавляется анилиновый синий и оранж G. После растворения красителей жидкость фильтруется. Порядок проведения окраски: 1. Срезы обрабатываются в 3% растворе бихромата калия - 20 минут. 2. Промыть в дистиллированной воде (1 -2 минуты). 3. Окрасить в растворе кислого фуксина (5 минут). 4. Быстро ополоснуть срезы в дистиллированной воде. 5. Перенести в окрашивающий раствор Маллори (анилиновый синий и
-
оранж G на 1%-ной фосфорно-вольфрамовой кислоте) на 2 минуты (можно увеличить время для более контрастного окрашивания).
- Быстро ополоснуть срезы в дистиллированной воде.
-
Дифференцировать окраску (до контрастной синей окраски коллагеновых волокон) в нескольких порциях 96% спирта.
-
Ксилол.
-
Заключить в полистирол или другую синтетическую среду.
-
Результат окрашивания: ядра, коллагеновые волокна - красные, краснооранжевые, оранжевые, эластические волокна - интенсивно синие, слизь синяя, эритроциты красно-оранжевые, мышечные волокна ярко-оранжевые.
Пример окрашивания:
- Провести срезы через 3 смены 100% спирта, ксилол, заключить в бальзам.
Результат окрашивания: ядра черные или коричневые, коллагеновые и ретикулярные волокна розовые, мышцы и цитоплазма клеток, эритроциты, кератин красные или оранжевые, фибрин красный, слизь, амилоид, гиалин - разные оттенки синего цвета, эластические волокна синие.
