сохранялась в основном в пределах исходного уровня, а в освещенном месте незначительно снижалась. По истечении 1,5–2 лет хранения препарата его антимикробная активность снизилась: при температурном режиме 0…5 °С без доступа света – на 3 %, в освещенном месте – на 6 %; б) при температурном режиме 10…20 °С без доступа света – на 6 %, в освещенном месте – на 10 %; в) при температурном режиме 22…30 °С без доступа света – на 19 %, в освещенном месте и на 13 %. После трехлетнего хранения препарата его антимикробная активность в сравнении с исходным уровнем уменьшилась: а) при температурном режиме 0…5 °С без доступа света – на 6 %, в освещенном месте – на 12 %, б) при температуре 10…20 °С без доступа света – на 9 %, в освещенном месте – на 15 %; в) при температуре 22…30 °С без доступа света – на 16 %, в освещенном месте на 16 %.

На основании изложенного можно сделать заключение о том, что при температуре 10…20 °С без доступа света препарат наиболее долго сохраняет свои исходные качества максимально выраженные в течение года. Это оптимальный режим хранения. И хотя в последующие 2 года снижение этих качеств не столь значительное, но учитывая возможные в условиях практики нарушения режима хранения, гарантированным может быть годичный срок хранения.

4.3 Экспериментальная оценка нового противоэндометритного препарата

В соответствии с требованиями Ветфармбиосовета РФ, экспериментальная оценка противоэндометритного препарата включала исследования, характеризующие как его специфическую активность, так и безвредность.

Биологическое действие препарата оценивали по комплексу тестов: антимикробной активности, противовоспалительным и антиаллергическим свойствам, влиянию на регенеративные процессы и местный иммунитет.

Антимикробные свойства препарата invitro определяли методами серийных разведении препарата в МПБ и жидкой питательной среде Сабуро, в концентрациях от 0,5 мл (542,5 мг)/мл до 0,00000094 мл (0,00103 мг)/мл, а также диффузии в агар. В первом случае в серию стерильных пробирок разливали по 2 мл МПБ, В первую пробирку добавляли 2 мл препарата определенной концентрации, после перемешивания 2 мл смеси переносили в следующую пробирку, продолжая, таким образом, разведение до предпоследней пробирки, из которой удаляли 2 мл содержимого. Последняя, 21-я пробирка, служила контролем роста тест-культуры. В МПБ готовили взвесь суточной культуры испытуемого микроба, 0,2 мл которой с содержанием 1000 микробных тел добавляли во все пробирки и помещали последние в термостат для инкубирования. Результаты учитывали через 6, 12, 24, 48, 72, 96 ч инкубирования.

Бактериостатические и бактерицидные свойства препарата определяли визуально по отсутствию роста культуры в опытных пробирках наибольшее разведение препарата, в котором отсутствовало размножение тест – микробов и не отмечалось помутнение среды в течение 24 ч, принимали за минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК), а в течение 96 ч минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК). Аналогично определяли фунгистатическую и фунгицидную активность препарата. Из опытных пробирок в течение первых суток периодически осуществляли высев на агар с целью установления необходимой экспозиции контакта препарата с тест – микробом для проявления бактерицидного эффекта. При использовании метода диффузии препарата в агар на поверхность МПА (или голодного агара со средой Чапека), разлитого в чашки Петри по 20 мл, наносили испытуемую микробную культуру (1 млрд микробных тел в 1 мл

бактериальной взвеси, 0,1 млрд. микробных тел в 1 мл вывеси грибной культуры), которую равномерно распределяли по поверхности среды. Чашки подсушивали 30–40 мин в термостате. Затем в агаре пробивали луночки диаметром 5 мм, на дно которых вносили 1–2 капли расплавленного МПА, а затем одну каплю препарата. Учет вели через 24 ч и в последующее время после инкубирования в термостате, измеряя диаметр зоны задержки роста (ЗЗР) микробов (до 15 мм – слабая чувствительность микробов к препарату, 15– 25 мм – чувствительны, свыше 25 мм – высокая чувствительность).

Таблица 15 – Антимикробная активность противоэндометритного препарата