Антимикробные свойства препарата invitro определяли методами серийных разведении препарата в МПБ и жидкой питательной среде Сабуро, в концентрациях от 0,5 мл (542,5 мг)/мл до 0,00000094 мл (0,00103 мг)/мл, а также диффузии в агар. В первом случае в серию стерильных пробирок разливали по 2 мл МПБ, В первую пробирку добавляли 2 мл препарата определенной концентрации, после перемешивания 2 мл смеси переносили в следующую пробирку, продолжая, таким образом, разведение до предпоследней пробирки, из которой удаляли 2 мл содержимого. Последняя, 21-я пробирка, служила контролем роста тест-культуры. В МПБ готовили взвесь суточной культуры испытуемого микроба, 0,2 мл которой с содержанием 1000 микробных тел добавляли во все пробирки и помещали последние в термостат для инкубирования. Результаты учитывали через 6, 12, 24, 48, 72, 96 ч инкубирования.
Бактериостатические и бактерицидные свойства препарата определяли визуально по отсутствию роста культуры в опытных пробирках наибольшее разведение препарата, в котором отсутствовало размножение тест – микробов и не отмечалось помутнение среды в течение 24 ч, принимали за минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК), а в течение 96 ч минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК). Аналогично определяли фунгистатическую и фунгицидную активность препарата. Из опытных пробирок в течение первых суток периодически осуществляли высев на агар с целью установления необходимой экспозиции контакта препарата с тест – микробом для проявления бактерицидного эффекта. При использовании метода диффузии препарата в агар на поверхность МПА (или голодного агара со средой Чапека), разлитого в чашки Петри по 20 мл, наносили испытуемую микробную культуру (1 млрд микробных тел в 1 мл
бактериальной взвеси, 0,1 млрд. микробных тел в 1 мл вывеси грибной культуры), которую равномерно распределяли по поверхности среды. Чашки подсушивали 30–40 мин в термостате. Затем в агаре пробивали луночки диаметром 5 мм, на дно которых вносили 1–2 капли расплавленного МПА, а затем одну каплю препарата. Учет вели через 24 ч и в последующее время после инкубирования в термостате, измеряя диаметр зоны задержки роста (ЗЗР) микробов (до 15 мм – слабая чувствительность микробов к препарату, 15– 25 мм – чувствительны, свыше 25 мм – высокая чувствительность).
Таблица 15 – Антимикробная активность противоэндометритного препарата
| Тест-микробы | МБсК (МФцК) препарата, мл (мг)/мл среды | МБсК (МФцК) препарата, мл (мг)/мл среды | ЗЗР мик- робов мм (диаметр) | Экспозиция бакте- рицидного или фун- гицидного эффекта, (мин) |
|---|---|---|---|---|
| 1. Стафилококки, 5 шт. | 0,0000075 (0,0073) | 0,000022 (0,02481) | 26 | 5–30 |
| 2. Стрептококки, 6 шт. | 0,000018 (0,0073) | 0,00004 (0,02481) | 25 | 15–40 |
| 3. Кишечная па- лочка, 4 шт. | 0,000057 (0,062) | 0,00011 (0,117) | 23 | 20–50 |
| 4. Протеи вуль- гарный, 3 шт. | 0,000028 (0,0303) | 0,000096 (0,1046) | 22 | 20–50 |
| 5. Синегнойная палочка, 3 шт. | 0,000071 (0,0772) | 0,000203 (0,20) | 20 | 25–60 |
| 6. Грибы из рода кандида, 3 шт. | 0,00008 (0,082) | 0,00025 (0,27) | 18 | 60–120 |
Анализ материалов, представленных в таблице 15, указывает на то, что препарат обладает достаточно высокой антимикробной активностью в отношении стафилококков, стрептококков, кишечной палочки, протея, синегнойной палочки и грибов. Перечисленные микробы оказались чувствительными или высокочувствительными к испытуемому препарату (зона задержки роста бактерий варьирует в пределах от 17–18 до 26–28 мм).
Минимальная бактериостатическая концентрация по отношению к стафилококкам, стрептококкам, кишечной палочке, протею, синегнойной палочке в наших опытах колебалась в пределах от 0,0000075 мл (0,0073 мг)/мл среды до 0,000071 мл (0,0772 мг)/мл среды.
Минимальная бактерицидная концентрация препарата к перечисленным выше микроорганизмам выявлена в диапазоне от 0,000022 мл (0,02481 мг)/мл среды до 0,000203 мл (0,20 мг)/мл среды.
В упомянутых минимальных бактерицидных концентрациях губительное действие препарата проявляется при экспозиции 10–60 мин. При более высоких концентрациях препарата (свыше 0,0005 мл, или 0,53 мг/мл среды) бактерицидный эффект проявляется в течении 2–5 мин.
Зона задержки роста бактерий на агаре под влиянием препарата варьирует (по средним показателям) в пределах 20–26 мм.
Мы установили, что в отношении перечисленных выше тест-микробов МБцК препарата варьирует в пределах 0,00032–0,042 мг/мл.
После 20–30 пассажей тест бактерий на МПБ с суббактериостатической концентрацией препарата чувствительность к препарату стафилококков, стрептококков, кишечной палочки, протея, синегнойной палочки не изменялась, что исключает возможность образования устойчивости у бактерий к препарату.
