не детектируется. Это связано со слишком большой длиной ампликонов (больше 2,5-3 кб.) ( Zietkiewicz E. et all, 1994; Vijayan Kunjupillai, 2005).
Данный метод оценки генетических связей широко используется для изучения генофондов, определения видов животных и растений, популяций, породных линий, а, в некоторых случаях, индивидуального генотипирования благодаря своей относительно высокой точности и воспроизводимости (Столповский Ю.А. и др., 2010; Pradeep Reddy M. et all, 2002). Определение различий в межвидовых, межпородных, а также внутрипородных генофондах при помощи ISSR-PCR маркеров используется также и в овцеводстве. В настоящий момент происходит вытеснение локальных пород овец под воздействием различных объективных и субъективных причин. Их место занимают более распространенные породы, что приводит потере внутрипородного генетического разнообразия. Для успешного сохранения генетических ресурсов наиболее эффективным являются методы ДНКмаркирования, в частности Inter Simple Sequence Repeats (ISSR-PCR).
По данным Макаровой Н.Н. (2013) и Nesteruk L.V. (2016), сравнивающих генофонды девяти различных пород овец с использованием ISSR-анализа, показано, что романовская порода имеет азиатское происхождение, либо завезена на территорию Тывы, так как образует единую ветвь с тувинской овцой, а также с группой, включающей калмыцкую породу и породу буубэй.
Дальнейшие исследования Нестерук Л.В. (2015, 2016) п оказали, что из 43 фрагментов ДНК у романовской породы овец, подавляющее большинство из них являются полиморфными. Также, в данной работе впервые использован коэффициент генетической оригинальности, в соответствии с которым выборка делилась на пять классов. В зависимости от частоты встречаемости фрагментов были выявлены оригинальные (редкие) генофонды и генофонды, имеющие типичную структуру. Благодаря коэффициенту генетической оригинальности появляется возможность повысить уровень селекционно-племенной работы коренных пород овец.
Анализ связи между хозяйственно-полезными признаками и маркерами доминантного типа наследования у романовской породы овец показал влияние генетической структуры на морфологические и физиологические признаки, а именно, живая масса, настриг шерсти, густота шерсти, средняя плодовитость и другие признаки. На основе ISSR-анализа можно выделить группы особей, отличные по генетическим показателям и имеющие уникальные комбинации аллелей генов, ответственных за количественные признаки (QTL) и оценить взаимосвязь совокупности этих генов и признаков продуктивности. Поэтому такой тип анализа имеет важное значение для оценки хозяйственно-полезных признаков. Редкие аллели являются основой для пополнения банка
генетического разнообразия и уменьшения инбредной депрессии (Нестерук Л.В., 2016).
В связи с относительно широкой изученностью данного вопроса остается актуальным исследование генетической структуры отдельных популяций овец романовской породы, выявление отдельных линий и редких аллелей и формирование на основе полученной информации практических рекомендаций по поддержанию внутрипопуляционного разнообразия и богатства генофонда.
4.1 Характеристика спектров AG- и GA-ISSR фрагментов
При использовании двух олигонуклеотидов (AG)9C и (GA)9C (ISSRпраймеры), комплементарных к микросателлитным локусам (TC)n, (GT)n соответственно, определены специфические спектры фрагментов ДНК в диапазоне от 2500 до 220 п.н.
На рисунке 9 представлена амплификация геномной ДНК с праймером (AG)9C, где видны продукты, которые впоследствии разделены с помощью гель-электрофореза на агарозном геле (2%) в поле электрического тока 120 В в течении 80 минут. В результате получены спектры фрагментов, размеры которых определяли по линейной функции.
На спектрах видны несколько полос (фрагментов) присутствующие у большинства животных и фрагменты, встречающиеся только у отдельных особей. Полученные фрагменты были разделены по 38 размерным группам,
приведенным в таблице 29. На основании полученных спектров отмечали наличие или отсутствие того или иного фрагмента и вычисляли частоты встречаемости каждого и размерных фрагментов.
Используя те же принципы и методики, которые использовались при амплификации (AG)9С-PCR-маркеров, были амплифицированы (GA)9С-PCRмаркеры и получены спектры фрагментов (рис. 10).
Здесь так же можно отметить наиболее часто встречаемые фрагменты характерные для большинства животных. Такие фрагменты могут являться показателями видовой принадлежности. Так же были выявлены дополнительные полосы в спектре, характеризующие генетическое разнообразие.
В целом по двум праймерам выявлено 72 размерных фрагмента ДНК (36 фрагментов по (AG)9С и 36 – по (GA)9C) (таблица 29, рис. 11, 12).
Частоты встречаемости ISSR-фрагментов варьировали в популяции романовских овец.
Наиболее высокую частоту встречаемости AG-ISSR ампликонов были выявлены у шести фрагментов (А13=1060-1000п.н. – 0,335135; А20=680-640п.н. – 0,324324; А21=640-680 п.н. – 0,362162; А24=530-560 п.н. – 0,351351; А25=400-470 п.н. – 0,345946; А27=440-410 п.н.- 0,340541), встречающиеся у особей изученной популяции.
С помощью праймера (GA)9C обнаружены четыре фрагмента, имеющих значительную частоту встречаемости (G3=2000-1800 п.н. – 0,400000; G8=14001300 п.н. – 0,475676; G24=530-500 п.н. – 0,632432; G25= 400-470 п.н. – 0,405405).
