Таким образом, в последние годы в животноводческой практике разработаны достаточно эффективные методы, направленные на коррекцию иммунобиологической реактивности организма животных, с целью профилактики акушерской патологии и повышения жизнеспособности новорожденных. При этом в разработке методов коррекции иммунобиологической реактивности животных можно выделить два основных направления: либо непосредственное влияние на иммунную систему (при применении иммуностимулирующих препаратов), либо нормализация обмена веществ в организме животных (витаминные, минеральные, гормональные препараты). В связи с этим решение вопросов, связанных с дальнейшим изучением иммунобиологической регуляции в различные периоды воспроизводительной функции коров, разработки иммунологических методов контроля за течением беременности и повышения плодовитости коров имеет большое научное и практическое значение и является одной из актуальных задач сельскохозяйственной биотехнологии, особенно в активизации воспроизводительной функции.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа по научно-экспериментальным исследованиям выполнялась с 1999 по 2003 г. на кафедре акушерства и биотехники репродукции животных Бурятской государственной сельскохозяйственной академии имени В. Р. Филиппова и в условиях молочно-товарной фермы учебно-опытного хозяйства «Байкал» Бурятской государственной сельскохозяйственной академии имени В. Р. Филиппова, на коровах симментальской породы, массой тела 450-500 кг, со среднегодовой молочной продуктивностью 3500-3600 кг.

Исследования проведены в 4 этапа. Первый этап работы преследовал цель изучения и определения зависимости оплодотворяющей способности коров от уровня их иммунобиологической реактивности организма. Для достижения поставленной цели в опыт было включено 18 животных.

Наши исследования были направлены на изучение динамики иммунологических показателей крови коров в период осеменения животных и имплантации зиготы, так как в последнем случае, по мнению многих исследователей, отмечается наиболее высокая эмбриональная смертность, связанная с неадекватным ответом мате-

ринского организма на антигены плода. В ходе исследований проводили ежедневное визуальное наблюдение за животными по выявлению у них проявлений клинических признаков стадии эструса полового цикла.

По мере проявления животными клинических признаков стадии эструса и выявления у них половой охоты проводили искусственное осеменение двукратно с интервалом 12 часов (утром и вечером). Коров осеменяли цервикальным способом с ректальной фиксацией шейки матки рукой. Преимущества искусственного цервикального осеменения вышеназванным способом перед другими заключается в том, что предоставляется возможность установить физиологическое состояние внутренних половых органов: влагалища, шейки, тела и рогов матки и яичников, а иногда и яйцепроводов (в норме они не прощупываются). Кроме того, умеренная ректальная пальпация внутренних половых органов в стадию эструса полового цикла стимулирует и усиливает кровоснабжение и моторику матки, что благоприятно способствует оптимальному продвижению спермиев навстречу яйцеклетки.

Процесс введения дозы спермы в цервикальный канал матки коров является очень важным и ответственным этапом в технологии искусственного осеменения. Доза спермы должна быть введена в наиболее подходящее место полового тракта и в оптимальное время в стадии эструса. Поэтому при проведении искусственного осеменения коров вышеназванным способом нами учитывались следующие физиологические факторы:

• сроки выхода яйцеклетки из фолликула (по отношению к началу или концу половой охоты);

• время, необходимое для приобретения спермиями готовности к оплодотворению (капацитация) и продолжительность жизни их в половых путях самки (оплодотворяющая способность спермиев в половых путях самки сохраняется в течение 24-48 часов).

Оплодотворяемость животных при искусственном осеменении обеспечивается только при использовании высококачественной спермы. Поэтому перед каждым осеменением животных необходимо проводить тщательную проверку качества оттаянной спермы путем микроскопического исследования.

Затем с 10-го по 30-й день за осемененной коровой проводили

визуальное наблюдение, чтобы в случае отсутствия беременности не пропустить начало нового полового цикла. При отсутствии проявления клинических признаков следующего полового цикла у осемененных коров нами проводилось ректальное исследование на стельность, начиная с 60-го дня после искусственного осеменения с целью подтверждения у них положительного диагноза на стельность, либо выявления дисфункции репродуктивной системы.

На 1-3-й и 15-17-й дни после осеменения у них проводилось взятие проб крови для иммунологических исследований. Исследования были проведены в лаборатории клинической иммунологии Республиканской больницы им. Н.А. Семашко (г. Улан-Удэ). Взятие и подготовку проб крови для исследований проводили по нижеприведенным методикам. В сыворотке и цельной крови определяли показатели, характеризующие уровень иммунобиологической реактивности:

1) количество лейкоцитов – методом подсчета в камере Горяева, лейкограмму крови – в мазках, окрашенных по РомановскомуГимзе;

2) фагоцитарную активность лейкоцитов (нейтрофилов) определяли при помощи опсоно-фагоцитарной реакции, описанной Ш.А. Мкртчян (1981), с использованием двухмиллиардной взвеси суточной культуры Staphylococcus aureus (штамм № 209). При микроскопии мазка крови для получения достоверных результатов подсчитывали 100 клеток. Вычисляли фагоцитарную активность (ФА) по формуле: ФА = ВґС/100 %, где

В – число лейкоцитов, участвовавших в фагоцитозе;

С – общее число подсчитанных лейкоцитов (100 клеток);

3) содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови определяли методом осаждения иммунных комплексов в 3,75 % -ном растворе полиэтиленгликоля-6000 (ПЭГ) (производство Германия) по Ю.А. Гриневич и А.Н. Алферовой (1981);

4) относительное и абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов, Т- хелперов, Т-супрессоров определяли по методу постановки непрямой реакции поверхностной иммунофлюоресценции (РИФ).

Анализ результатов исследований проводился по двум группам животных: в первую группу вошли оплодотворившиеся коровы (n=7), вторую группу составили бесплодные коровы (n=11). Беременность и бесплодие диагностировали выявлением повторных половых цик-

лов и ректального исследования через 2 месяца после осеменения.

Одним из перспективных направлений повышения репродуктивной функции является применение иммуномодуляторов, потенциально способных стимулировать общую резистентность организма животных. Учитывая актуальность данной проблемы, мы решили использовать наиболее доступный иммуномодулятор «Полирибонат».

Исследования по разработке методов коррекции иммунобиологической реактивности организма коров были выполнены на втором этапе работы . Для повышения оплодотворяемости и профилактики перинатальной патологии использовали иммуномодулятор «Полирибонат» В соответствии с поставленной целью проведены 3 серии опытов.

В первой серии опытов изучалось влияние иммуномодулятора «Полирибонат» на оплодотворяемость коров. В опыт были включены 55 коров в период осеменения, распределенных по принципу аналогов на четыре группы.

Препарат «Полирибонат» коровам опытных групп вводили внутримышечно в форме раствора, приготовленного с соблюдением стерильности на физиологическом растворе в соотношении 10 мг в 1 мл. Готовый раствор для применения хранили не более суток при температуре +4⁰ С. Препарат «Полирибонат» после разведения в физиологическом растворе применяли в дозе 0,1 мг/кг (табл. 1).

Таблица 1 – Схема применения препарата «полирибонат» подопытным

коровам

Полирибонат – препарат высокополимерной РНК из пекарских дрожжей, содержание РНК – не менее 80%, в нем отсутствуют компоненты клеточных стенок и белки, представляет собой стерильный белый порошок с желтоватым оттенком, хорошо растворим в воде и физиологическом растворе. Полирибонат - порошок для повышения неспецифической резистентности и продуктивности у сель-

скохозяйственных животных и птиц. Препарат изготовлен ООО «Диафарм», ОКПО 44040845, г. Бердск, Новосибирской области, номер серии 01062001, ТУ 9381-018-00479979-01, хранят при температуре от +4°С до +25°С, срок годности 2 года со дня изготовления.

Полирибонат обладает способностью увеличивать количество антителобразующих клеток, содержание Т-лимфоцитов, стимулировать гемопоэз, активизировать функцию макрофагов и нейтрофилов, проявляет иммуноадъювантные свойства при совместном использовании с антибактериальными и противовирусными вакцинами, а также вызывает ростостимулирующие эффекты. Полирибонат вводят внутримышечно в форме раствора, приготовленного с соблюдением стерильности на дистиллированной воде или физиологическом растворе в соотношении 10 мг в 1 мл. Раствор хранят не более суток. Противопоказаний, побочных явлений и осложнений при применении полирибоната не установлено. Продукцию от животных, которым применяли полирибонат, используют без ограничений.

Наставление по применению полирибоната разработано Научно-исследовательским конструкторско-технологическим институтом биологически активных веществ ГНЦ ВБ «Вектор» (г. Бердск, Новосибирской области), Институтом экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН (п. Краснообск, Новосибирской области) и Новосибирским ГАУ (г. Новосибирск).

Осеменение животных проводили искусственно замороженнооттаенной спермой, цервикальным способом с ректальной фиксацией шейки матки рукой (методика описана в первом этапе исследований).

Анализ результатов исследований проводился при установлении беременности или бесплодия через 2 месяца после осеменения путем выявления повторных половых циклов и ректального исследования.

Во второй серии опытов нами на основании результатов первой серии опытов была проведена апробация иммуномодулятора «Полирибонат» на уровень иммунобиологической реактивности и оплодотворяемость коров при его однократном назначении на 1-2-й день после осеменения.

В опыт отобраны 32 коровы, которые были распределены по принципу аналогов на две группы (табл. 2).

Взятие проб крови для иммунологических исследований проводились на 1-2-й и 15-16-й день после осеменения (методика описана в первом этапе исследований). Анализ результатов исследований проводился при установлении беременности или бесплодия через 2 месяца после осеменения путем выявления повторных половых циклов и ректального исследования.

Также в третьей серии опытов определялась эффективность применения полирибоната в период, предшествующий осеменению. При этом в опыт были набраны 27 коров спустя 30-35 дней после отела, распределенные по принципу аналогов на две группы. Коровам подопытной группы однократно инъецировали внутримышечно в область крупа 0,1 мг/кг иммуномодулятора «Полирибонат». Животным контрольной группы инъекции препарата не проводились. При наблюдении за подопытными животными регистрировались сроки прихода коров в половую охоту и плодотворного осеменения.

На сегодняшний день вызывает большую тревогу высокая заболеваемость коров в послеродовой период, как правило, сопровождающаяся развитием иммунодефицитных состояний организма животных, что приводит к снижению их репродуктивной функции, увеличению яловости и времени от отела до осеменения. Учитывая актуальность проблемы, мы решили исследовать эффективность комплексной обработки сухостойных коров Нитамином и Полирибонатом с целью повышения их воспроизводительной функции. Исследования проведены на третьем этапе работы в производственных условиях молочно-товарной фермы учебно-опытного хозяйства «Байкал» Бурятской государственной сельскохозяйственной академии имени В. Р. Филиппова на 24 стельных коровах симментальской породы. Животных разделили на две подопытные и контрольные группы по 12 голов в каждой. Всем животным в течение сухостойного периода с целью повышения общего биологического тонуса и