В этом отношении представляют интерес иммуномодуляторы – препараты, обладающие иммунотропной активностью, которые в терапевтических дозах восстанавливают функции иммунной системы (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2000). Учитывая актуальность данной проблемы, мы решили использовать иммуномодулятор «Полирибонат», обладающий способностью увеличивать количество антителобразующих клеток, содержание Т-лимфоцитов и активизировать функцию макрофагов.
Исследования проводили в условиях молочно-товарной фермы учебно-опытного хозяйства «Байкал» Бурятской государственной сельскохозяйственной академии имени В. Р. Филиппова и в лаборатории клинической иммунологии Республиканской больницы им. Н.А. Семашко с целью определения эффективности иммуномодулятора полирибонат на оплодотворяющую способность коров. Эффективность препарата изучили на коровах симментальской породы. Коровы находились в одинаковых условиях содержания и кормления.
При выполнении данного раздела научные исследования были проведены в три серии:
В первую серию опыта было включено 55 коров, которые были распределены по принципу аналогов на четыре группы. Коровам первой опытной группы (n=13) с целью стимуляции иммунобиологической реактивности на 1-3-й день после осеменения внутримышечно в область крупа инъецировали 0,1 мг/кг полирибонат, животным второй опытной группы (n=13) инъекцию препарата проводили на 11-13й день после осеменения, коровам третьей опытной группы (n=12) иммуномодулятор инъецировали двукратно – на 1-3-й и 11-13-й день после осеменения. Животным четвертой (контрольной) группы (n=17) препарат не назначали.
67% подопытных коров осеменялись первый раз после отела (продолжительность периода от отела до осеменения (сервис-период) составила 39±3 дня), 25% животных подвергались осеменению вторично (продолжительность периода от отела до учитываемого осеменения составила - 74±5 дней), 7% животных подвергались осеменению третий раз (132±13 дней).
Осеменение животных проводили искусственно замороженнооттаенной спермой быка-производителя Дунай, которая хранилась длительное время в жидком азоте при температуре –196?С в сосуде
Дьюара. При осеменении коров мы использовали ректоцервикальный метод искусственного осеменения, двукратно, с 12-часовым интервалом и только при наличии у них явных клинических признаков проявления половой охоты и течки. Оттаянную сперму перед проведением искусственного осеменения согласно Инструкции по искусственному осеменению коров и телок подвергали исследованию и определяли ее пригодность для осеменения.
Результаты исследования за подопытными животными, представленные в таблице 8, свидетельствуют о том, что использованные схемы применения полирибоната не только не оказывает положительного влияния на воспроизводительную функцию коров, но и ведет к снижению их оплодотворяемости. В частности, после учитываемого осеменения беременность наступила у 64,7% коров контрольной группы, а при применении полирибоната на 1-3-й день после осеменения – у 53,8%, на 11-13-й день – у 46,1% и при двукратном применении полирибоната с 10-дневным интервалом – у 41,6% коров.
Таблица 8 – Влияние иммуномодулятора «Полирибонат»
на оплодотворяемость коров при искусственном осеменении
| Показатели | Группы | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| оп. 1 (n=13) | оп. 2 (n=13) | оп. 3 (n=12) | контр. (n=17) | ||
| В т.ч. осеменяемых коров после отела | 1-й раз | 11 | 8 | 7 | 11 |
| % | 84,6 | 61,5 | 58,3 | 64,7 | |
| 2-й раз | 2 | 4 | 3 | 5 | |
| % | 15,4 | 30,7 | 25,0 | 29,4 | |
| 3-й раз | - | 1 | 2 | 1 | |
| % | - | 7,6 | 16,6 | 5,8 | |
| Стали стельными после учи- тываемого осеменения | коров | 7 | 6 | 5 | 11 |
| % | 53,8 | 46,1 | 41,6 | 64,7 | |
| В т.ч. после осеменения | 1-го | 6 | 4 | 2 | 8 |
| % | 54,5 | 50,0 | 28,5 | 72,7 | |
| 2-го | 1 | 2 | 2 | 2 | |
| % | 50,0 | 50,0 | 66,6 | 40,0 | |
| 3-го | - | - | 1 | 1 | |
| % | - | - | 50,0 | 100,0 | |
| Индекс оплодотворения | 1,76 | 2,30 | 2,30 | 1,70 | |
Таблица 9 – Влияние полирибоната на оплодотворяемость коров в зависимости от времени введения препарата
| Время введения препарата | Показатели | |||
|---|---|---|---|---|
| Кол-во животных | Стали стельны- ми | Оплодотво- ряемость, % | ||
| Подопытная 1 | 13 | 7 | 53,8 | |
| В т.ч. после осеменения | на 1 день | 3 | 2 | 66,6 |
| на 2 день | 3 | 3 | 100,0 | |
| на 3 день | 7 | 2 | 28,5 | |
| Подопытная 2 | 13 | 6 | 46,1 | |
| В т.ч. после осеменения | на 11 день | 4 | 2 | 50,0 |
| на 12 день | 4 | 3 | 75,0 | |
| на 13 день | 5 | 1 | 20,0 | |
| Подопытная 3 | 12 | 5 | 41,6 | |
| В т.ч. после осеменения | на 1 и 11 день | 1 | 1 | 100,0 |
| на 2 и 12 день | 6 | 2 | 33,3 | |
| на 3 и 13 день | 5 | 2 | 40,0 | |
| Контрольная | 17 | 11 | 64,7 | |
Проведение более детального анализа полученных данных по оплодотворяемости коров позволило выявить интересную закономерность. При применении полирибоната на 1-2-й день после осеменения оплодотворяемость коров составила 83,3%, или в 1,28 раз выше, чем в контрольной группе (64,7%). Применение полирибоната в другие сроки после осеменения привело к снижению оплодотворяемости коров, особенно в предимплантационный период – при применении полирибоната на 13-й день после учитываемого осеменения стельными стали всего лишь 30 % коров (табл. 9).
дит к повышению активности иммунной системы материнского организма, что способствует распознаванию антигенов плода и адекватному иммунному ответу на них со стороны матери, приводящих к формированию и развитию беременности. Данное исследование согласуется с результатами иммунологических показателей крови исследуемых в предыдущей главе, когда высокая иммунобиологическая реактивность коров в период осеменения обеспечивает нормальное течение процессов оплодотворения и иммунотрофическое взаимодействие материнского организма с развивающимся зародышем.
Таким образом, стимуляция иммунной системы матери в период имплантации (в который при нормальном развитии беременности свойственно снижение уровня неспецифической резистентности) приводит к усилению иммунного ответа материнского организма на антигены плода и, вследствие этого, к неполноценному течению имплантации и отторжению развивающегося зародыша.
Во второй серии опытов мы более детально исследовали влияние иммуномодулятора «Полирибонат» на уровень иммунобиологической реактивности и оплодотворяемость коров при его однократном назначении на 1-2-й день после осеменения.
В опыт были отобраны 32 коровы в период осеменения, распределенные по принципу аналогов на 2 группы. Животным опытной группы (n=20) однократно внутримышечно в область крупа инъецировали по 0,1 мг/кг полирибоната на 1-2-й день после осеменения. Коровам контрольной группы (n=12) инъекции не проводились. Взятие проб крови для иммунологических исследований проводились на 1-2-й и 15-16-й день после осеменения.
75% подопытных коров осеменялись первый раз после отела (продолжительность периода от отела до осеменения составила 46±4 дня), 25% - второй раз (продолжительность периода от отела до учитываемого осеменения - 92±3 дня).
Результаты иммунологических исследований проб крови от подопытных коров представлены в таблице 10.
Можно предположить, что применение биологически активных препаратов, стимулирующих иммунную систему коров в период осеменения (на 1-2 день после осеменения), по всей видимости, приво-
Таблица 10 – Иммунологические показатели крови оплодотворившихся коров при применении полирибоната
| Показатели | 1-2-й день после осеменения (I) | 15-16-й день после осеменения | |||
|---|---|---|---|---|---|
| полирибонат (II) | Р1< | контроль (III) | Р2< | ||
| Лейкоциты, тыс./мкл | 7,43±0,76 | 7,50 ± 0,98 | - | 7,57±0,54 | - |
| Лимфоциты, % | 56,9±0,51 | 58,5±0,76 | - | 57,8±0,59 | - |
| Т-лимфоциты, % | 43,2±0,75 | 40,9±0,80 | 0,05 | 42,6±1,04 | - |
| Т-хелперы, % | 24,9±0,60 | 22,5±0,73 | 0,05 | 23,1±1,13 | - |
| Т-супрессоры, % | 12,9±0,41 | 15,3±0,75 | 0,01 | 13,3±0,65 | - |
| В-лимфоциты, % | 23,5±0,58 | 30,5±0,73 | 0,001 | 27,3±0,60 | 0,001 |
| Фагоцитоз, % | 51,1±0,59 | 48,1±0,51 | 0,001 | 49,8±0,79 | - |
| ЦИК, усл.ед. | 114,6±0,69 | 112,5±0,90 | - | 113,8±0,54 | - |
Р1<– порог достоверности рассчитан по показателям животных I и II групп
Р2<– порог достоверности рассчитан по показателям животных I и III групп - недостоверно
Анализы полученных результатов показали, что уровень лейкоцитов у животных обеих групп оставался практически без изменений на 15-16-й день после осеменения, по сравнению с 1-2-м днем.
3 1
2
1 – 1-3-й день после осеменения;
2 – 15-17-й день после осеменения (полирибонат);
- 3 – 15-17-й день после осеменения (контроль).
Рис. 18. Динамика содержания лейкоцитов в крови оплодотворившихся
коров
При применении полирибоната отмечено незначительное повышение содержания лимфоцитов на 2,8 % (с 56,9±0,51 до 58,5±0,76%), а в контрольной группе – на 1,6 % (с 56,9±0,51 до 57,8±0,59 %). Незначительный характер изменений лимфоцитов указывает, по-видимому, на развитие иммунобиологической защитной реакции организма на антигены плода.
Одновременно отмечено снижение числа Т-лимфоцитов на 5,6% (Р<0,05) против контроля 1,4 % и уменьшение уровня Т-хелперов на 10,6 % (с 24,9±0,60 % до 22,5±0,73 %, Р<0,05), по сравнению с контролем – на 7,7 % (с 24,9±0,60 % до 23,1±1,13 %), а уровень Т-супрессоров, соответственно, возрастает с 12,9±0,41 % до 15,3±0,75% (15,6%, Р<0,01), в контроле их уровень составил 13,3±0,65 % (рис. 19).
70
1-2 день после осеменения
60 15-16 день после осеменения (полирибонат)
15-16 день после осеменения (контроль)
50
40
30
20
10
0
лимфоциты, % Т-лимфоциты, % Т-хелперы, % Т-супрессоры, %
Рис. 19. Динамика содержания лимфоцитов, Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров в крови оплодотворившихся коров
Наряду с этим происходит изменение активности и В-системы иммунитета. На 15-16-й день идет ее активизация, на что указывает резкое увеличение числа В-лимфоцитов (с 23,5±0,58 % до 30,5±0,73 %, Р<0,001), или на 29,8 %, а в контроле (с 23,5±0,58 % до 27,3±0,60 %, Р<0,001), или на 16,2 % (рис. 20).
Отмечены также колебания в динамике фагоцитарной активности нейтрофилов крови. Происходит снижение на 6,2 % (с 51,1±0,59 % до 48,1±0,51 %, Р<0,001) против контроля 2,6 % (с 51,1±0,59 % до 49,8±0,79 %). (рис. 20).
Концентрация циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК)
