Подсчет удобно вести с помощью счетчика для лейкоцитов. крови. При просмотре первого большого квадpata камеры, т. е. 16 малых квадратиков, нажимают пальцем на первый клавиш счетчика столько раз, сколько там спермиев. При просмотре второго большого квадрата нажимают на второй клавиш, третьего— на ‘третий клавиш и т. д. Вверху против каждого клавиша будет сумма подсчитаиных спермиев. * По окончании подсчета суммируют число спермиев во всех пяти больших квадратах. Например, в первом большом квадрате (16 маленьких) насчитано 45 спермиев, во втором — 48, в третьем— 52, в четвертом— 56, в пятом— 53, а всего в пяти больших квадратах 244 спермия. Эзу цифру делят на 100 и получают 2,44 млрд. спермиев в 1 мл спермы. Если сиерму набирали в смеситель до отметки 1,0, то полученную сумму спермиев делят на 200. Если разбавление производи| лось в лейкоцитном смесителе и сперму набирали до отметки 0,5, то сумму спермиев делят na 1000. Например, при подсчете спермяев в сперме хряка, разбавленной в 20 раз в лейкоцитном смесителе, число спермиев в пяти больших квадратах оказалось 240; эту цифру оделятс на 1000 и получают концентрациюиспермиев в | мл, равную || р a au aan у - | =, Е Tecate ck peoonntemice ey Да P Hie | п — число спермиев, подсчитанных в 80 малых квадратах; Д— степень разбавления спермы в меланжере; № — число малых квадратов, в которых произведен подсчет; 400На — число малых каквадратовDE EIна площади в 1 мм?.
Высчитанное по этой формуле число обозначает количество спермнев в I MM‘, Для определения числа спермиев в 1 мл полученное число умножают на 1000.
Таблица 11
Количество спермиев животных разных видов в 1 мл (в млрд.)
| a спермиев | животных разных | видов в 1 мл a | (в млрд.) |
|---|---|---|---|
| ih ic | LL а | р м | |
| оБараны | И | ||
| Быки Хряки Жеребцы 7 | 2 1 0,2 0,2 „= , | 05—1 1—2 0,11—0,2 01—02 АЕ: , , | 05 1 Ol Ol , , |
Для точности подсчет спермиев в камере проводят два раза. После работы смесители, камеры, предметные и покровные стекла тщательно моют сначала простой, а затем дистиллированной водой и спиртом. или Чтобыбарана,определитьумножают общееустановленноеколичествов | спермиевмл количествов эякулятеспермиевбыкана объем эякулята, а у жеребца и хряка — на объем спермы после фильтровання, т, е, удаления густых секретов придаточных желез, Пример: объем профильтрованного эякулята хряка 220 мл, концентрация спермиев 0,16 млрд. в | мл.
0,16Х220=35,2i мир. в спермеЗаданиебыка8. Определитьпри помощи концентрациюфотоэлектроколориметраспермиев ФЭК-М Матер иалы и оборудование: фотоэлектроколориметр ФЭК М; 3.5%-ный раствор лимоннокислого натрия; воронка с бу мажным фильтром; пенициллиновые флаконы; пипетка измерительная, градуированная на 10 мл; MukponunerKa; сперма быка. основанХод наработы.том, что черезПринципкюветуработы(сосуд)этогосо прибораспермой пропускают пучок световых лучей определенной силы, который затем попадает на селеновый фотоэлемент, соединенный с гальванометром. Через гальванометр проходит электрический ток, величина которого обратно пропорциональна мутности спермы, т. е. концентрации спермиев. Для проведения исследования приготовляют 3,5% -ный раствор лимоннокислого натрия на дистиллированной воде, фильтруют его через бумажный фильтр и разливаютв хорошо вымытые и просушенные флаконы из-под пенициллина по 9,9 мл в каждый флакон.
150
Микропипеткой5 набирают точно 0,1 мл исследуемой= спермы и смешивают с раствором лимоннокислого натрия в es из флаконов, разбавляя таким образом ау Te Past) итетку несколько зразипромывают раствором из этого флакона, чтобы в ней не остались спермии. Разбавленную сперму вливают в кювету фотоэлект; роколориметра с рабочей длиной 10 мм, перемешивают ть 4 ee = . в неи сперму еще раз стеклянной палочкой и ставят в правое гнездо прибора на расстоянии, наиболее удаленном от фотоэлемента. В левое гнездо прибора ставят такую же кювету, наполненную раствором лимоннокислого натрия без добавки спермы. Затем шкалу отсчета оптической плотности левого барабана устанавливают на нуль и, вращая фотометрические клинья, переводят па нуль стрелку гальванометра вначале грубой настройкой (рис. 43) (регулятором № 1), а затем точной настройкой (регулятором № 2). После этого вынимают кювету со спермой из правого гнезда и ставят вместо нее кювету с раствором лимоннокислого натрия. Стрелка гальванометра при этом отклоняется, и ее ставят на нуль, поворачивая левый барабан.
15]
