На красной шкале этого барабана читают показатель оптической мутности. Каждые 0,05 деления шкалы соответствуют концентрации спермиев, определяемой по rpaдуировочной кривой, которую выводят ежемесячно, обязательно отдельно для каждого прибора. Задание 9. Определить концентрацию‘ спермиев в сперме жеребца по стандартам. т
р
Материалы и оборудование: свежеполученная сперма жеребца; стандарты спермы жеребца; стеклянная палочка; марлевые ты для определения концентрации спермы жеребца представляют собой одинакового диаметра запаянные пробнркн с жидкостью, имитирующей неразбавленную сперму в концентрации 10, 50, 100, 200, 300 и 500 млн. спермиев в [| мл.
Ход работы. Сперму наливают в чистую пустую пробирку точно такого диаметра, как и стандарты, и сравнивают с ними. Предварительно стандартные пробирки хорошо встряхивают, чтобы осевшие частицы равномерно распределились. Пробирки просматривают на свет, подбирая стандарт, наиболее близкий к определяемой сперме, который и принимают за ее концентрацию. Концентрация спермы может быть определена и как промежуточная между двумя стандартами, например 75 млн. (среднее между 50 и 100 млн.). При концентрации спермиев более 500 млн. в 1 мл исследуемую сперму можно разбавить глюкозным разбавителем в два раза (1:1), затем установить концентрацию по стандартам, а результат определения удвоить, Задание 10. Определить переживаемость спермиев. Показатель подвижности (активность движения) спермиев очень важен в первоначальной оценке полученной спермы. Сперма, в которой отсутствуют спермии с активным прямолинейно поступательным движением, непригодна для оплодотворения. Тем не менее хорошая подвижность спермиев в только что полученной сперме еще не дает достаточного основания для окончательной оценки оплодотворяющей способности, так как движение спермиев может быстро прекратиться. Продолжительность жизпи спермиев вие организма является важным косвенным показателем в оценке оплодотворяющей способности спермы производителя. Чем дольше спермии в пробирке сохраняют способность двигаться, тем больше вероятность оплодотворения матки такой спермой. Переживаемость спермиев характеризу-
152
ется также их устойчивостью к внешним воздействиям. Эта’ устойчивость зависит от нормального протекания спермиогенеза и степени зрелости спермиев. При плохом кормлении, уходе и содержании самца, чрезмерной половой нагрузке и т. д. переживаемость спермиев ухудшается и самки, осемененные такой спермой, не оплодотворяются. Переживаемость спермиев также снижается при резком охлаждении спермы, при попадании в нее воды, медикаментов, грязи.
Мате риа а бо Deo SENN сперма, разбавитель (синтетическая среда), пробирки емкостью 3—4 мл и емкостью 7— 8 мл или флаконы из-под пенициллина; термос; лед; мешочек из непромокаемой пленки; пипетки На на 1—2 и 510 мл; штативы; стеклянные падонки: a eS стекла; микроскопы; перым статы для микроскопов; 3%-ный раствор лимоннокислого натрия. Ход работы. Сперму быка или барана, разбавленную в 8 и 16 раз глюкозо-желточно-цитратным разбавителем или какой-либо другой синтетической средой, наливают в небольшом количестве (0,5—1 мл) в чистые пробирки емкостью 3—4 мл или в пенициллиновые флаKOHBI. Сперму жеребцов разбавляют в 4 раза (1:3) глюкозным или глюкозо-желточным разбавителем и наливают по 4 мл в пробирки емкостью. 7—8 мл. Сперму хряков и кроликов также разбавляют в 4 раза одним из разбавителей для спермы (см. ниже). Пробирки (флаконы) закрывают пробками (корковыми или ватными) и выдерживают при комнатной температуре: пробирки с разбавленной спермой барана и быка —45—50 минут, а жеребца и хряка — 15—20 минут. Опускать пробирки в холодную воду нельзя. Затем пробирки помещают в специальный круглый штатив, который ставят на дно термоса для постепенного охлаждения спермы до O°. Сперму хряка и быка, если она разбавлена специальными средами, можно хранить прин комнатной темиературе.
Подвижность спермиев быка, барана, хряка и кролика контролируют через каждые 24—48 часов, а спермиев жеребца через каждые 12—24 часа, пока’ окончательно не прекратится движение всех спермиев. Активность движения спермиев из охлажденной спермы оценивают обязательно при температуре 40°, причем нагревают до такой температуры только исследуемую каплю, а не всю пробирку со спермой.
153
_ Для этого из термоса или холодильника вынимают штатив с пробирками и, чтобы пробирки не согрелись, )/ помещают их в холодную воду с плавающими кусочка~ ми льда. Сперму перед взятием пробы размешивают покачиванием пробирки, затем чистой стеклянной палочкой быстро наносят небольшую каплю на предметное стекло, рядом с ней наносят вдвое большую каплю 3% -Horo раствора лимоннокислого натрия. Обе капли накрывают покровным стеклом, предметное стекло помещают Ha столик микроскопа, находящийся в термостате. Для нагревания предметного стекла со спермой можно также применять н обогревательный столик. зу, Припоэтомунагреваниинаблюдениеспермииведутначинают1—2 минуты,двигатьсяпоканеспер-срамин не проявят наибольшую активность. Оценивают подвижность в месте слияния капли спермы с разбавителем. Каплю спермы жеребца или хряка из пробирки просматривают под микроскопом без дополнительного разбавления ее раствором лимоннокислого натрия. Даты, часы просмотра и оценки подвижности в баллах записывают в специальные бланки (табл. 12). На основании этих записей устанавливают продолжительность переживаемости спермиев в часах (или сутках) и показатель (абсолютный) переживаемости. Продолжительность переживаемости спермиев определяется количеством часов от начала наблюдения до момента установления колебательного движения или полной неподвижности всех спермиев за вычетом половины времени между предпоследними и последними наблюдениями. Этот вычет делается потому, что действительное время прекращения поступательного движения спермиев неизвестно.
Для вычисления показателя переживаемости сначала складывают баллы двух смежных оценок и сумму делят пополам (а), чтобы получить средние оценки подвижности спермиев для каждого промежутка между просмотрами. Полученные средние оценки перемножают на часы (1) между просмотрами. Все эти произведения складывают,емости (выживаемости)что и дает показательспермиев, или переживатак называе-мый абсолютный показатель выживаемости (5$). 16 раз,Хорошаядолжнаспермаиметьбаранапоказательи быка,переживаемостиразбавленная нев 8—ни154 -
