3) по 10 штаммов данного вида бактерий должно быть выделено не менее чем от двух животных;
4) культуры данного вида бактерий должны присутствовать в рубце животных различных географических зон;
5) конечные продукты обмена веществ полученных культур микроорганизмов должны быть типичными рубцовыми метаболитами. В 1 мл рубцового содержимого присутствует 109 —1010 бактерий. Реактив: 0,85%-ный раствор NaCl.
Оборудование: микроскоп; микропипетки.
Ход определения. Содержимое рубца разводят стерильным изотоническим раствором натрия хлорида в соотношении 1:1000. Микропипеткой отбирают 0,01 мл этого разведения и профламбированной петлей размазывают его на предметном стекле на площади 1 см2 . Как правило, делают 3-4 мазка. Мазок высушивают над пламенем спиртовки и красят по Грамму. Готовый мазок исследуют под иммерсией. Подсчитывают бактерии в определенном количестве типичных полей зрения. В связи с тем что мазок не всегда получается равномерным, поля зрения для подсчета необходимо брать по всему мазку, а лучше по диагонали. В каждом мазке подсчитывают не менее 10 полей зрения и выводят среднее значение для одного поля.
Чтобы определить общее количество бактерий всего мазка, уточняют площадь поля зрения микроскопа. Так как площадь круга составляет %г, то необходимо измерить диаметр поля (в мм) с помощью объект-микрометра. Площадь мазка 100 мм2 , деленная на площадь поля зрения под микроскопом, равна количеству полей зрения в мазке. Поскольку мазок приготовлен из 0,01 мл жидкости, то количество полей зрения в мазке, умноженное на 100, дает количество полей зрения в 1 мл рубцовой жидкости, разведенной до 103 (1:1000). Все эти арифметические подсчеты можно объединить формулой 10000 : 3,1417 * г2 , где 3,1417 — коэффициент, на который следует умножить среднее количество клеток в поле зрения микроскопа.
Таким образом, подсчитав необходимое количество полей зрения (по 10 в трех мазках), суммируют общее количество бактерий и вычисляют среднее количество бактерий в одном поле зрения. Полученное число умножают на коэффициент и степень разведения. Коэффициент остается постоянным до тех пор, пока объектив, положение тубуса и окуляр микроскопа не меняются.
Пример. Определяем коэффициент. Диаметр поля зрения микроскопа 0,132 мм, соответственно его радиус — 0,066 мм, а г составляет 0,004356:
Подсчитав 30 полей зрения (по 10 в трех мазках), определили, что в поле зрения в среднем находится 15 микробных клеток.
Соответственно 15 * 10000 / 0,0137 * 1000 = 10,9 млрд = 1,09 * 1010 микробных клеток в 1 мл рубцовой жидкости.
4.2 Влияние количества структурных углеводов на обменные процессы в пищеварительном тракте животных
В комплексе мероприятий по достижению высокой продуктивности животных важную роль играет полноценное кормление, обеспечивающее комплекс питательных веществ и правильное соотношение их для поддержания нормального течения обменных и синтетических процессов в организме. Большая роль при этом наряду с протеином отводится легкопереваримым углеводам и сахара-протеиновому соотношению рационов. В последние годы накоплен значительный экспериментальный материал о положительном влиянии легкопереваримых углеводов и сахаропротеинового соотношения на течение микробиальных процессов в рубце, переваримость и усвоение питательных веществ кормов. Установлено также, что степень влияния кормов на молочную продуктивность коров и приросты откармливаемого молодняка зависит от состава входящих в них углеводов. Так, корма, содержащие растворимые сахара, оказывают более заметное влияние на образование жира, молока, чем корма, богатые крахмалом. Неодинаковое влияние крахмала и сахара на сложный процесс лактации коров подтвердил и М. И. Книга. В его опытах было отмечено, что при замене в рационе коров сахарной свеклы картофелем удой снижались на 2-3 %. При этом коровы, получавшие в рационе картофель, больше прибавляли в массе, чем животные, которым скармливали сахарную или кормовую свеклу.
Различия в характере влияния на секрецию и состав молока кормов, богатых крахмалом или сахаром, обусловлены скоростью сбраживания этих углеводов в рубце коров и конечными продуктами их ферментации. Рационы жвачных животных всегда содержат определенное количество легкопереваримых углеводов, однако в зависимости от набора кормов количество сахара или крахмала в них
различно. Так, при наличии в рационе большого количества корнеплодов, кормовой патоки; хорошего злакового сена уровень содержания сахара будет высоким, тогда как преобладание в рационе зерновых концентратов или картофеля всегда будет вести к увеличению крахмала.
Доминирование в рационе растворимых сахаров обусловливает быстрое их сбраживание в рубце до низкомолекулярных жирных кислот с образованием молочной кислоты, которая способствует снижению рН в рубце до 5-5,5. Эти условия являются благоприятными для развития маслянокислой и пропионовой флоры. В рубце образуется много масляной и пропионовой кислот. Притом, если пропионовая кислота является предшественником глюкозы в организме, то из масляной кислоты синтезируется оксимасляная кислота - один из важных предшественников жира молока. В связи с увеличением рубце при ферментации Сахаров масляной и пропионовой кислот количество уксусной кислоты несколько снижается.
Сравнительная характеристика бродильных процессов в рубце у валухов при скармливании им сахарной свеклы или картофеля была получена в большом эксперименте, проведенном А. С. Сапуном, Л. Д. Халеневой и П. Ф. Перетягиным. Авторы установили, что при добавке сахарной свеклы по сравнению с добавкой картофеля заметно повышалось общее количество ЛЖК. Такое влияние сахарной свеклы сохранялось и при замене 50 % свеклы картофелем. Кроме того, при добавке сахарной свеклы частично снижалось содержание уксусной кислоты при одновременном увеличении пропионовой. Влияние сахарной свеклы и картофеля на рубцовые процессы авторами было изучено при разных вариантах кормления.
Заслуживают большого внимания исследования Э. Г. Даниленко и Н. И. Шупарской по изучению влияния уровня и соотношения в рационах сахара и крахмала на рубцовый метаболизм, переваримость и использование питательных веществ, а также на молочную продуктивность коров. Отмечено, что при использовании лактирующим коровам рационов, богатых крахмалистыми или сахаристыми кормами, заметно увеличивалось содержание ЛЖК в рубце. Наблюдалось значительное повышение доли пропионовой кислоты за счет снижения уксусной и масляной кислот. Оптимальным содержанием сахара и крахмала в рационе авторы считают 130-140 г на 1 корм. ед. При этом среднесуточные удои поддерживаются на
