Рабочее разведение 2-меркаптоэтанола готовили путем добавления к 0,7 мл меркаптоэтанола 92,3 мл физиологического раствора. На 1,8 мл сыворотки (в разведении 1:12,5) добавляли | мл рабочего раствора 2-меркаптоэталона, смешивали, закрывали плотно резиновой пробкой и инкубировали в водяной бане при 37°С в течении 2 часов. Затем делали последовательные удвоения разведения сыворотки в физиологическом растворе и добавляли равное количество антигена в рабочем разведении с физиологическим раствором. Далее реакцию ставили как обычно. Стандартный тест РА выявляет общие агглютинины, а с меркаптоэтанолом — агглютинины IgG. Агглютинины IgM определяли по разнице титров двух проб — стандартной РАи реакции с меркаптоэтанолом.
Уровень неспецифической резистентности определяли в сыворотке крови общепринятыми методами по следующим показателям: бактерицидная активность, В-лизин, лизоцим. Специфический иммунный ответ на вакцинацию во всех опытах отличался большой индивидуальной изменчивостью как по интенсивности, так и по срокам образования антител. В качестве примера приведем динамику показателей иммунного ответа у 146 телок в первом опыте (табл. 12).
Розбенгал проба у большинства подопытных телок была выражена уже через 15 дней после вакцинации. У 25,6% животных РПБ сохранялась до 45 дней включительно, ау 3,5% в течение трех месяцев. У 18,4% телок наблюдалась замедленная реактивность и достаточно высокие значения РБП у них была выявлена только через 45 дней после вакцинации. У 2% подопытных животных РБП сохранялась до 6 месяцев. У 21,8% телок роз.бентал проба в течение всего периода исследований была отрицательна.
Уровень комплементсвязывающих антител, выявленных в реакции связывания комплемента, был наиболее высоким через 45 дней после вакцинации. Из 58 телок в сыворотке крови которых Уже через 15 дней после вакцинации, получена положительная РСК, 43,1% сохранили ее в течение 3 месяцев, 37,9% — только 45 дней, и 19% реагировали положительно только при первом обследовании после вакцинации. Из 49 животных, впервые давших положительную РСК только через 45 дней после вакцинации,
67,4% сохранили эту реакцию до последующего обследования (3 мес. после вакцинации), а 32,6% реагировали в этот период отрицательно. Через 6 и 9 месяцев ряд животных положительно реагировали в РДСК (через 6 месяцев - 12 телок, через 9 мес. — 1 телка). У 26,7% животных показатели РСК во все сроки исследования были очень низкие (не выше разведение 1:5).
Таблица 12. Показатели специфического иммунного ответа у телок
после вакцинации
| Реакция | Показатели | |||
|---|---|---|---|---|
| интенсивности ре- акции | дней | через 45 дней | | через 3 меся- ца | |
| Розбенгал проба | 0 | 29,0 | 21,8 | 63,8 |
| (оценка в крестах) | + | 19,3 | 16,5 | 18,1 |
| ++ | 2,7 | 14,3 | 4,3 | |
| +++ | 7,6 | 16,6 | 10,2 | |
| ++++ : | 41,4 | 30,8 | 3,6 | |
| Реакция связывания | |0 | 64,6 | 28,4 | 50,8 |
| комплемента (разве- | |1:5 | 20,8 | 20,9 | 25,8 |
| дение сыворотки) | 1:10 | 13,1 | 23,6 | 18,0 |
| 1:20 | 1,5 | 18,9 | 4,6 | |
| 1:40 | - | 8,2 | 0,8 | |
| Реакция агглютина- | |0 | 0,7 | 18,2 | 46,5 |
| ции (м.е./мл) | до 100 | 20,1 | 74,2 | 51,2 |
| от 101 до 200 | 29,2 | 7,6 | 2,3 | |
| от 201 до 400 | 29,2 | - | - | |
| от 401 до 800 | 20,8 | - | : | |
| Уровень иммуногло- | |0 | 11,9 | 33,3 | 77,0 |
| булинов KnaccalgM_ | | go 100 | 55,2 | 63,0 | 20,6 |
| (м.с./мл) | от 101 до 200 | 23,8 | 3,7 | 2,4 |
| от 201 до 400 | 91 | - | - | |
| от 401 до 800 | : | - | - | |
| Уровень иммуногло- | |0 | 15,5 | 47,8 | 55,8 |
| булинов класса 126 | |до 100 | 31,0 | 48,7 | 43,3 |
| (м.с./мл) | от 101 до 200 | 20,4 | 3,5 | 0,9 |
| от 201 до 400 | 19,0 | - | - | |
| от 401 до 800 | 14,1 | - | : |
Наиболее выраженной оказалась реакция агглютинации. У 18,2% животных реакция агглютинации была слабой и ее отмечали только при исследовании через 15 дней после вакцинации. У 28,3% телок агглютинирующие антитела присутствовали в сыворотке крови до 45 дней после вакцинации, ау 53,% - в течении 3
месяцев. И только у одного животного РА не была выявлена при исследовании через 15 дней после вакцинации.
Первичный иммунный ответ, который характеризуется образованием специфических антител класса IgM, был наиболее интенсивен через 15 дней после вакцинации. Только у 7% животных антитела класса IgM отсутствовали в течение всего периода наблюдения, ау 21% эти антитела исчезли из крови раньше, чем антитела класса IgG.
Анализ содержания в сыворотке крови IgG показал весьма сходную картину. Только у трех животных иммуноглобулины этого класса отсутствовали в крови в течение всего опыта. У 8,1% животных IgG отсутствовали через 15 дней после вакцинации и были выявлены только при последующем исследовании (через 45 дней). У 42,7% телок IgG — раньше, чем IgM. В целом необхоAMMO отметить, что динамика IgG не дала ожидаемой картины в данном опыте.
В последующих опытах все реакции были более интенсивны, быстро нарастали и быстро исчезали. Более четкими были и соотношения обоих классов иммуноглобулинов. На наш взгляд, это объясняется тем, что только в первом опыте телки не были ранее вакцинированы против других болезней и обновление иммунной системы у них проходило медленнее. В первом и втором опытах не применялись иммуномодуляторы, поэтому до 30-35% животных, на наш взгляд, страдали иммунодефицитами в той или иной степени. У животных, обработанных иммуномодуляторами, количество животных с низким иммунным ответом резко снижалось. Поэтому основные иммуногенетические исследования были проведены на животных первых двух подопытных групп.
Изучение динамики показателей специфического иммунитета было важно для того, чтобы разделить животных по силе иммунного ответа на сильно- и слабоотвечающих. Такое разделение животных было проведено комиссионно, с учетом как результатов вакцинации, так и ревакцинации (табл. 13). Надо сразу отметить, что деление животных на группы по силе иммунного ответа является субъективным, несмотря на попытки беспристрастно относиться к результатам исследования каждого животного.
