| Т а б л и ц а .1 С | р е д ы д л я р а з б а в л е н и я и х р а н е н и я т е ч е н и е 3 – 1 4 д н е й | с п е р м ы х р я к а в |
|---|---|---|
| К л а с с р а з б а в и т е л я | Н а з в а н и е р а з б а в и т е л я | М а к с и м а л ь н ы й с р о к х р а н е н и ,я д н е й |
| К р а т к о - | B stle elliv T h a w ni g S oitulo ,n B T S | 3 |
| с р о ч н ы й | V . S . P . | 3 |
| М о д и ф и ц и р о в а н н ы й B T S | 3 | |
| М о д и ф и ц и р о в а н н ы й К и е в | 3 – 5 | |
| С р е д н е - | ( Г Х Ц /) S p re m A di | |
| с р о ч н ы й | M o d e n a | 3 – 5 |
| V I T A L ® | 4 – 5 | |
| M cre k III ™ / К и е в / E D T A | 4 – 6 | |
| М о д и ф и ц и р о в а н н ы й M o d e n a | 5 – 7 | |
| Д о л г о - | M R -A | 6 – 7 |
| с р о ч н ы й | A n d r o h e p ® | 6 – 7 |
| A n d r o h e p ® etil ™ | 6 | |
| A n d r o h e p P L U S ™ | 7 | |
| X- C E L L ™ | 7 | |
| A C R O M A X | 7 – 8 | |
| С в е р х - | ||
| с р о ч н ы й | M blu rre y III | 7 – 1 4 |
| Т а б л и ц а .2 С о с т а в р а з б а в и т е л е й | G u le p h и Z o r p v a д | л я с п е р м ы х р я к а |
|---|---|---|
| К о м п о н е н т ы | К р а т к о с р о ч н ы й р а з б а в и т е л ь G u ple h , л/г | С р е д н е с р о ч н ы й р а з б а в и т е л ь Z o r p v a , л/г |
| D г л ю к о з а | 6 0,0 | 1 5,1 0 |
| Н а т р и й л и м о н н о к и с л ы й т р е х з -а м е щ е н н ы й | 7,3 0 | 1 6,1 5 |
| D i - s o uid m E D T A D i - s o uid m E D - T A | 7,3 0 | 3,2 5 |
| Н а т р и й г и д р о к а р б о н а т | 2,1 0 | 7,1 5 |
| П о л и в и н и л о в ы й с п и р т т( и п II ) | – | 0,1 0 |
| Т р и с | – | 5,5 0 |
| Л и м о н н а я к и с л о т а | – | 1,4 0 |
| Ц и с т е и н | – | 0,0 7 |
| П е н и ц и л л и н | 5 0 0 0 0 0 I U | 6 0 0 0 0 0 I U |
| С т р е п т о м и ц и н | 0,5 г | 0,1 г |
Среды дл яразбавленис япермы жеребц.а Дл яразбавлени я и хр-а ненис япермы жеребц апрт иемператур е+2…+4оСт в ечени е4 8 чприменяетс я лактозо-хелато-цитратно-желточная сред( аЛХЦЖ .)
Водд аистиллированна я……………1 ..0 0м ,л Лактоз а………………………………1 . ,г 0,1 Натрид йвууглекислы й…………… ,г 0,8 .. Натрил йимоннокислы й……………8 0,9м ,г Хелато н………………………………1 0 0м ,г Желток куриныя хи ц……………… 6,1 ..м ,л Спермосан- 3……………………2 ..4–3т 0ые .с .д Эт ажс еред ,анд с ообавлением 5,3 мг ллицерин априменяетс ядл я разбавлени яз иамораживанис япермы. .2.6 Приготовленис ере дит ехнологии разбавленис япермы Приготовлени е сре.д Среды готовя т в ден ь разбавлени я спермы . Работ у п о разбавлению спермы проводя т в стерильно й камер е ил и в специально оборудованно йлабораторио ,иблученноб йактерицидным и лампам .и Температур( у18–20 � С ) в лаборатори и поддерживаю т бытовымк иондиционерам.и Среды длк яраткосрочногх ораненис япермы бык а ибарана (ГЦЖ ) готовя т следующим образом . В химическую колб у наливаю т дистиллированную (бидистиллированную ) вод ,у закрываю т колпачком и з пергаментно й бумаг и и стерилизую т кипячением в течени е 5– 7 мин ; затемо хлаждаюд т3 о5 � С . Нт аочныв хесао хтвешиваюг тлюкоз у инатри яцитра тв иысыпаю т ид в хругуюс терильнуюк олб .уСтерильно ймензурко йил ицилиндром отмериваю тнужнок еоличеств опрокипяченнов йоды ,переливаюе т в е колб у с реактивам и и размешиваю т д о полног о и х растворени .я Ра-с тво рфильтрую тчере збумажны йфильт рс итерилизуюв в тодяно йб-а н5 е–1 0ми .нОхлаждаюд т3 о5 � Сд и обавляюс тпермосан- и 3желто .к Свежи( е1– 2дн )якуриныя ейц амоют теплов йодо с йдетергентом , затем промывают тепло й идистиллированнов йодо ,йобеззараживаю т 70%-ным этиловым спиртом и высушиваю .т Стерильным скальпелем яйц о раскалываю т пополам ,и оставля я желто к в одно й половинк е скорлупы , сливаю т в чашк у бело ;к пр и этом следя ,т чтобы оболочк а желтк а н е был а поврежден а острым краем скорлупы . Осторожн о н-а клоняс якорлуп ,уперемещаю тжелто кнс атерильную фильтровальную бумаг .уДл яосвобождени яжелтк ао тоставшейс ячаст ибелкк ара йбумаг и приподнимаю ,т поворачиваю т в разны е стороны и скатываю т медленн ожелтод к кругоме ук ераю .Поддержива яжелто кн анескол-ь к о сжато й бумаг ,е стерильным пинцетом ил и скальпелем разрушаю т ег о оболочк у и выливаю т в подготовленную мензурк у (цилиндр .) Оди н желто к имее т объем 10–2 0 м .л Приготовленна я сред а должн а быт ьиспользовант в аечени3 е– .ч 4Вэ тв ореме я еможнх оранить пр и температур3 е2–35о Ст в ермостати елв иодяноб йан.е
Сред а ЛХЦЖ дл я разбавлени я спермы жеребца . Отвешиваю т согласн орецепт улактоз у ихелато н ивысыпаю тс втерильную колб .уВ эт у колб у добавляю т 2,0 м л 2,4%-ног о стерильног о раствор а натри я гидрокарбонат а и 2,0 5 м л 37,5%-ног о стерильног о раствор а натри я цитрат( аи зрасчет ан акажды е10 0мс лреды ) иприливаю тнеобходимок еоличеств опрокипяченно йохлажденно йдистиллированнов йоды . Содержимо е растворяю ,т фильтрую т чере з стерильны й бумажны й фильтд и робавляю тжелто .к Сред у ГХЦС дл я разбавлени я спермы хряка в форм е сухиз хаготово ,к выпускаемы х лабораториям и научно-исследовательски х институто ,в готовя т согласн о наставлению п о применению "Глюкозо-хелатоцитратно-сульфатно-бикарбонатнос ймесп в иорошке." Сред а ГХЦ дл я разбавлени я спермы хряка такж е выпускаетс я в форм е сухиз хаготово к ил и ж е ег еотовя т в лаборатори и пункт .а Дл я этогс отерильным мерным цилиндром ил имензурко й отмериваю т н-е обходимы й объем прокипяченно й дистиллированно й воды и переливаюе т е вхимическуюс терильную колб .уСюд аж евнося твзвешенны е н а точны х веса х необходимы е компоненты , кром е санирующи х препарато .вПриготовленнуюс ред укипятя в тводяно йбан е5–1 0ми ,н охлаждаю т д о 40–45 � С и добавляю т спермосан- 3 и з расчет а 250–30 0 тые .с .дн а100 0м .лКолбз уакрываюс ттерильно йпергаментно йбум-а го и йфиксируюр тезиновымк ольцом. При использовани иЛЖГ и ЛЖЦГс ред длс япермыб ыка ч вистую стерильнуюк олб уналиваю тнеобходимыо йбъемб идистиллированно й (дистиллированной ) водыз ,акрываю т колпачком и з пергаментно й бумаг ик иипятя1 т0–1 5ми .нВг орячую( 90–95 � Св )одв уносял тактоз у и перемешиваю т д о полног о растворени я порошк ;а добавляюг тлиц-е ри н и содержимо е ещ е ра з тщательн о перемешиваю ,т з аатем охлаждаюд т2 о0–30 � С . В охлажденнуюс ред удобавляю тсанирующи йпрепара ,траствор-я юе тгд ,ообавляю тжелто к и натриц яитра( тс вред уЛГЦЖк в ,оторо й лактозы 1 г 5,0 инатри яцитрат а .)г 2,0Колб уплавн опокачиваю тд о полног орастворени я иразмешиванив ясек хомпоненто .вПосл еприготовленич яастс ьреды( 20% ,)предназначеннуюд л япервичногр оазбавлени я спермы , помещаю т в термоста т пр и 27 � 1 � С . Другую част ь о-с тавляю т пр и комнатно й температур е (18–20 � С ) и использую т дл я окончательног о разбавлени .я Приготовленна я сред а должн а быт ь и-с пользовант в аечени3 е–.ч 4 Пр и использовани и желточно-цитрато-глицериновой среды сн-а чалг аотовя т цитратны й буфе .р Н а аналитически х ил и другит хочны х весао хтвешиваю2 т г 9натри яцитрат( аNa3C 6H 5O 7� 2H 2O )ХЧ ил иЧДА . Навескв унося в тмернуюк олбв уместимостью1 00 0д иобавляю5 т00– 60 0м лдистиллированно йводы .С помощью магнитно ймешалк ира-с
