нос ймесьюс ,остоящеи й змелкр оаздробленногл оьди алс инегс и аол и в весовом отношени и .1:5 Температур а охладительно й смес и должн а поддерживатьс я н а 3–5°С ниж е температуры замерзани я синтетич-е скос йреды путемд обавлени яльд аилс инег .аПричемс месл ььдс( ан-е г )а и сол и периодическ и перемешиваетс я проволочно й мешалко ,й которав яставляетсч яереб зоковоо етверстик в ерышкс еосуд.а Термомет рБекман аимее тдв арезервуар артути :основно йнижни й и дополнительны й в верхне й части ; об а резервуар а соединены межд у собо й капилляром ; пр и необходимост и можн о ртут ь перемещат ь и з одногд в оруго .йВозможност ьперераспределенир ятутр в иезервуара х позволяе т настроит ь термомет р та ,к чтобы температур а замерзани я растворител( яводыл )ежалв в аерхнеч йаст ишкалы. Основна яшкалт аермометрд алинна я– окол2 ос 5м иразделен ан а 5–6 � С ,ценд аелени я– 0,01 � .Н ашкал с епомощьюл упы можнд оелат ь отсчет с точностьюд 0,0 о01–0,002 � С . Пере д работо й необходим о настроит ь термомет ,р .т .е установит ь измеряемую температур у замерзани я дистиллированно й воды таким образом , чтобы пр и 0 � С ртут ь находилас ь в верхне й част и шкалы , примерн о межд у делением 3 и .5 Д о начал а настройк и следуе т уб-е дитьс ят вом ,чт онижни йрезервуа рпр икомнатнот йемператур еполностьюз аполнер нтутью . В стака н емкостью 200–25 0 м л наливаю т 150–20 0 м л дистиллированно й воды ,и добавля я кусочк и льд ,а охлаждаю т д о 2–3 � С ; контролирую т температур у обычным термометром . В термометр е Бекман а нагреваю т руко й ртут ь в нижнем резервуар е и следя ,т чтобы онз а-а полнил а д о верх у капилля ,р посл е чег о термомет р переворачиваю т ввер х нижним резервуаром . Продолжа я нагреват ь резервуа ,р добив-а ютсс яоединенис ятолбикр атутр с итутьюв ерхнегр оезервуар .аПосл е этог оосторожн о иплавн ,очтобы н еразорватс ьтолби кртутк в иапилляр ,епридают термометр уобычно евертикально еположени е ипогружаю т нижни й резервуа р в подготовленную охлажденную вод .у Выдерживаю т 3– 5 ми ,н постоянн о помешива я термометром( резерву-а ром ) в вод е кусочк и льд .а Затем осторожн о вынимаю т термомет р и резк о опускаю т нижним резервуаром н а ладон ь рук .и Столби к ртут и долже н оборватьс я межд у значениям и шкалы 3 и .4 Есл и столби к оборвалсв яышт ,е оподогреваниемр езервуарр аукос ймещаюс ттолби к ртутз и аизги бкапиллярв к аерхнем урезервуар у ипытаютс яоборват ь столби к внебольшом расширени икапиллярв аерхнег орезервуар .аЗ-а тем быстр о помещают термомет р в охлажденную вод .у Прт иемпер-а тур е2–5,2 � Сс толби кртут идолже ннаходитьс ямежд у делением шк-а лы5 и 5,4 � С( пр0 и � С – межд5,4 и 3 у � С .)Посл енастройкт иермомет р закрепляю с тпомощью штативв в аертикальном положенис в итакан е о схлажденнов йодо .йПробк с апроволочно ймешалкод йолжн апосто-
янн о оставатьс я н а термометр е (пр и вставлени и термометр а в центральноо етверстип еробк иможнр оазорватс ьтолбир ктути.) Для тог очтобы определитт ьемпературз уамерзанис яреды дл яра-з бавлени я спермы( и п о не й высчитат ь осмотическо е давлени ,)е необходимс оначал аопределитт ьочкз уамерзани ядистиллированнов йоды п ошкал енастроенногт оермометр .аДлэ ятогв ов онутреннюю пробирк у криоскоп а наливаю т 3 0 м л дистиллированно й воды и помещаю т пробирк у в охладительную смес ;ь охлаждаю т в течени е нескольки х мину т д о 1–3 � С . Температур у контролирую т обычнымт ермометром . Пробирк у извлекаю т и з охладительно й смес ,и высушиваю т снаруж и фильтровально йбумаго йз иакрепляю в тнаружно йпробирк .еСтенк и внутренне йпробирк инд еолжныс оприкасатьсс яс отенкам инаружно й пробирк .и Соединенны е об е пробирк и вставляю т чере з отверсти е в крышк е в сосус( дтакан ) с охладительно й смесью . Затем в о внутреннюю пробиркв уставляю тнастроенныт йермомет с рпробко й ипроволочно ймешалко й иукрепляюе тг с опомощью штатив .аОсновно йр-е зервуар с ртутьют ермометрд аолжеб ныт ьполностью погруже в нди-с тиллированную вод ,у н он екасатьс ядн .аПт оермометр уБекман ан-а блюдаюз т апонижениемт емпературыв оды .Так као кхлажденид еальнейшее е еиде тмедленнв ,оод апереохлаждаетс я инз еамерзае тниж е точк и е е замерзани( я0 � С .) Столби к ртут и медленн о опускаетс .я Дл я равномерног о охлаждени я воды е е постоянн о помешиваю т проволочно й мешалко.й Наступае т момен ,т когд а в переохлажденно й вод е н-а чинаетс я процес с кристаллизаци .и Прэ итом выделяетс я скрытат яеплото атвердевани ,ят иемпературб аыстр оповышаетст( яемпературны й скачек .)Водп уродолжаюп томешиват ьп с иомощьюл упын аблюдаю ,т когд а столби к ртут и полностью остановитс .я Эт о и буде т точко й з-а мерзани я воды( наприме ,р 1,423 .) Последня я цифр а приблизительна .я Дл я получени я точног о результат а определяю т температур у замерз-а нив яодыд ва–трр иаз.а Послэ етог оосторожн оизвлекают термомет рБекман аиз пробирк и ипомещаюе тгс в отака с нохлажденно йд о2–3 � Св одо .йВв онутреннюю пробиркк уриоскопв аместд оистиллированнов йоды наливаю3 т 0 м лохлажденнос йреды дл я разбавленис япермы( бег злицерин )аз и-а тем в нев еставляют термомет рБекман .аПроцедуро ухлажденис яреды дз оамерзани яосуществляют та кжк ,еа кв иоды .Послт еемпературног о скачк а фиксирую т н а шкал е термометр а точк у замерзани я среды (наприме5,3 ,р62.) Разниц а межд у первым числом( 1,423 ) и вторым( 5,362 ) укаже т н а фактическуют очкз уамерзанис яреды – он абуде травн а5,061 � С .Дл я определени яосмотическог одавлени в ямилл иосмомоля хнеобходим о эт очисл оразделит ьн а0,0018 .6В данномс луча еосмотическо едавл-е нис еостави т30 .1Прэ итом принимаетсв яв онимани ,ечт оодн аосмомолс яоответствуед тепрессии 8,16 � С а ,милло исмомол я– 0,00186 � С .
Концентрацию водородны х ионо в (рН ) в сред е определяю т пр и помощр иН-метрос вогласнн оаставлениямп п орименению приборо.в Контрольныв еопросы .1Целр ьазбавленис япермы? .2 Каки е требовани я предъявляю т к средам дл я разбавлени я спермы? .3Рол ьжелтк акуриныя хиг ,цлицеринс ,аахаро ,вразличныс холе й с вредад хлр яазбавленис япермы? .4Чтт оако еизотонически йраство( рбуферк ,)акове аг оролс в ьр-е дд елр яазбавленис япермы ?Наиболеч еасти оспользуемыб еуферы ? .5Длч яегв оключаюс в треды противомикробныв еещества ?Каки е антибиотик ис иульфаниламиды наиболе ечаст оиспользуютск ,яака я концентрации яр в хазбавленнос йперме ? .6Возможнл ов инесениа ентибиотико в внеразбавленнуюс перму ? .7 Каки е недостатк и имее т молочна я среда ? Каков а основ а это й среды ?Какив ееществд аополнительнв оносятсэ в ятс уреду? .8 Како е осмотическо е давлени е в сперматозоиде ? Каков о он о должнб оытс в ьредд елр яазбавленис япермы? .9 Пр и каки х температура х производитьс я начально е разбавлени е спермы ? Почем у и ка к необходим о охлаждат ь сперм у пере д финальнымр азбавлением ? 1 .0Вк акос йтепенр иазбавляюс тперм упроизводителес йельскохозяйственны хживотных ?Ок таки хфактороз вависис ттепен ьразбавл-е ния? 1 .1Какок еоличествс оперматозоидо вдолжнс оодержатьс в яодно й дозд ело ясемененик яоровыо ,вцыс ,виньк ,иобылы ? Тем .7 аХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ Целз ьанятий :изучитс ьпособы храненис япермыс амцос вельскохозяйственны хживотны ,хосвоитт ьехникз уамораживани я иоттаив-а нис япермыб ык.а Материалы и оборудование : разбавленна я сперм а бык( абаран ,а жеребц ,а хряк ;)а термос ,а бытово й холодильни ,к сосуды Дьюар а с канистрам и ил и марлевым и мешочкам ,и пеналыс( таканчики ) дл я соломи ,н металлическа я воронк а дл я сбор а грану ,л лопатк а дл я съем а грану л с пластины , корнцанг и и пинцеты , фторопластовы е пластины ; ле ,д жидки й азо ;т синтетически е соломины( пайеты ) дл я расфасовк и спермыс ,теклянны ешарик идл яукупоркс иоломив ,накуумны йнасо ,с машины дл ямаркировк( иМ6-ММС- 2ил иМ6-ММС-3 ,)наполнени я и укупоркс иоломи( нМ6-АПА ;)прямоугольнат яеплоизолированнае ямкост( ь3 0 � 4 0 � 3с 0м )ил иширокогорлы йцилиндрическо йформыс о- су дДьюар ;абиотермостаты ,микроскопы ,подогревательныс етолики ; 2 2
