янн о оставатьс я н а термометр е (пр и вставлени и термометр а в центральноо етверстип еробк иможнр оазорватс ьтолбир ктути.) Для тог очтобы определитт ьемпературз уамерзанис яреды дл яра-з бавлени я спермы( и п о не й высчитат ь осмотическо е давлени ,)е необходимс оначал аопределитт ьочкз уамерзани ядистиллированнов йоды п ошкал енастроенногт оермометр .аДлэ ятогв ов онутреннюю пробирк у криоскоп а наливаю т 3 0 м л дистиллированно й воды и помещаю т пробирк у в охладительную смес ;ь охлаждаю т в течени е нескольки х мину т д о 1–3 � С . Температур у контролирую т обычнымт ермометром . Пробирк у извлекаю т и з охладительно й смес ,и высушиваю т снаруж и фильтровально йбумаго йз иакрепляю в тнаружно йпробирк .еСтенк и внутренне йпробирк инд еолжныс оприкасатьсс яс отенкам инаружно й пробирк .и Соединенны е об е пробирк и вставляю т чере з отверсти е в крышк е в сосус( дтакан ) с охладительно й смесью . Затем в о внутреннюю пробиркв уставляю тнастроенныт йермомет с рпробко й ипроволочно ймешалко й иукрепляюе тг с опомощью штатив .аОсновно йр-е зервуар с ртутьют ермометрд аолжеб ныт ьполностью погруже в нди-с тиллированную вод ,у н он екасатьс ядн .аПт оермометр уБекман ан-а блюдаюз т апонижениемт емпературыв оды .Так као кхлажденид еальнейшее е еиде тмедленнв ,оод апереохлаждаетс я инз еамерзае тниж е точк и е е замерзани( я0 � С .) Столби к ртут и медленн о опускаетс .я Дл я равномерног о охлаждени я воды е е постоянн о помешиваю т проволочно й мешалко.й Наступае т момен ,т когд а в переохлажденно й вод е н-а чинаетс я процес с кристаллизаци .и Прэ итом выделяетс я скрытат яеплото атвердевани ,ят иемпературб аыстр оповышаетст( яемпературны й скачек .)Водп уродолжаюп томешиват ьп с иомощьюл упын аблюдаю ,т когд а столби к ртут и полностью остановитс .я Эт о и буде т точко й з-а мерзани я воды( наприме ,р 1,423 .) Последня я цифр а приблизительна .я Дл я получени я точног о результат а определяю т температур у замерз-а нив яодыд ва–трр иаз.а Послэ етог оосторожн оизвлекают термомет рБекман аиз пробирк и ипомещаюе тгс в отака с нохлажденно йд о2–3 � Св одо .йВв онутреннюю пробиркк уриоскопв аместд оистиллированнов йоды наливаю3 т 0 м лохлажденнос йреды дл я разбавленис япермы( бег злицерин )аз и-а тем в нев еставляют термомет рБекман .аПроцедуро ухлажденис яреды дз оамерзани яосуществляют та кжк ,еа кв иоды .Послт еемпературног о скачк а фиксирую т н а шкал е термометр а точк у замерзани я среды (наприме5,3 ,р62.) Разниц а межд у первым числом( 1,423 ) и вторым( 5,362 ) укаже т н а фактическуют очкз уамерзанис яреды – он абуде травн а5,061 � С .Дл я определени яосмотическог одавлени в ямилл иосмомоля хнеобходим о эт очисл оразделит ьн а0,0018 .6В данномс луча еосмотическо едавл-е нис еостави т30 .1Прэ итом принимаетсв яв онимани ,ечт оодн аосмомолс яоответствуед тепрессии 8,16 � С а ,милло исмомол я– 0,00186 � С .
Концентрацию водородны х ионо в (рН ) в сред е определяю т пр и помощр иН-метрос вогласнн оаставлениямп п орименению приборо.в Контрольныв еопросы .1Целр ьазбавленис япермы? .2 Каки е требовани я предъявляю т к средам дл я разбавлени я спермы? .3Рол ьжелтк акуриныя хиг ,цлицеринс ,аахаро ,вразличныс холе й с вредад хлр яазбавленис япермы? .4Чтт оако еизотонически йраство( рбуферк ,)акове аг оролс в ьр-е дд елр яазбавленис япермы ?Наиболеч еасти оспользуемыб еуферы ? .5Длч яегв оключаюс в треды противомикробныв еещества ?Каки е антибиотик ис иульфаниламиды наиболе ечаст оиспользуютск ,яака я концентрации яр в хазбавленнос йперме ? .6Возможнл ов инесениа ентибиотико в внеразбавленнуюс перму ? .7 Каки е недостатк и имее т молочна я среда ? Каков а основ а это й среды ?Какив ееществд аополнительнв оносятсэ в ятс уреду? .8 Како е осмотическо е давлени е в сперматозоиде ? Каков о он о должнб оытс в ьредд елр яазбавленис япермы? .9 Пр и каки х температура х производитьс я начально е разбавлени е спермы ? Почем у и ка к необходим о охлаждат ь сперм у пере д финальнымр азбавлением ? 1 .0Вк акос йтепенр иазбавляюс тперм упроизводителес йельскохозяйственны хживотных ?Ок таки хфактороз вависис ттепен ьразбавл-е ния? 1 .1Какок еоличествс оперматозоидо вдолжнс оодержатьс в яодно й дозд ело ясемененик яоровыо ,вцыс ,виньк ,иобылы ? Тем .7 аХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ Целз ьанятий :изучитс ьпособы храненис япермыс амцос вельскохозяйственны хживотны ,хосвоитт ьехникз уамораживани я иоттаив-а нис япермыб ык.а Материалы и оборудование : разбавленна я сперм а бык( абаран ,а жеребц ,а хряк ;)а термос ,а бытово й холодильни ,к сосуды Дьюар а с канистрам и ил и марлевым и мешочкам ,и пеналыс( таканчики ) дл я соломи ,н металлическа я воронк а дл я сбор а грану ,л лопатк а дл я съем а грану л с пластины , корнцанг и и пинцеты , фторопластовы е пластины ; ле ,д жидки й азо ;т синтетически е соломины( пайеты ) дл я расфасовк и спермыс ,теклянны ешарик идл яукупоркс иоломив ,накуумны йнасо ,с машины дл ямаркировк( иМ6-ММС- 2ил иМ6-ММС-3 ,)наполнени я и укупоркс иоломи( нМ6-АПА ;)прямоугольнат яеплоизолированнае ямкост( ь3 0 � 4 0 � 3с 0м )ил иширокогорлы йцилиндрическо йформыс о- су дДьюар ;абиотермостаты ,микроскопы ,подогревательныс етолики ; 2 2
бюретк а с резиново й трубко ,й зажимом и стеклянным наконечником дл я дозировани я спермы ил и автоматическо е устройств о дл я расф-а совкс ипермып рз иамораживаниг в иранула .х В настоящев еремд ялс яохраненис япермыс амцос вельскохозяйс-т венны х животны х применяю т кратковременно е хранени е ил и долгосрочноз в еамороженномс остояни.и Прк иратковременном храненис иперм убыкос вохраняю тд о7 2 ,ч жеребцо в– д о7 2 ,чбарано в– д о2 4 чпрт иемператур е+...2+4оС .Пр и этоми спользуюх толодильник иил иширокогорлыт еермосыс л оьдом. Сперм у хряко в сохраняю т 3 –1 4 су т пр и температур е +1...7+18оС , используд ялх яраненит и яранспортировкт иермосы-ящик.и Длх яраненис япермыб ыкоб ,варано ,вжеребцо вх ирякот в вечени е длительног о времен и бе з потер и оплодотворяюще й способност и применяюз тамораживание е в ежидкома зотп ер и–196 .С
.1.7Храненис епермы прит емпература хвыш0 е � С
Хранени е спермы хряк а при температур е 17–18 � С . Дл я разбавлени я ихраненис япермы хряк апрт иемператур е17–18 � Ст в ечени е 3 – 1( 0д1 о4с )уто кприменяюс тоответствующис еинтетическис ереды . Разбавляю т сперм у посл е получени я и определени я е е качеств .а Дл я разбавлени як ираткосрочног охранени( яд ос 3у )тиспользуюэ тякуляты с концентрациес йперматозоидо вн емене е10 0мл в .н 1мс лпермы .Длб яолед елительногх оранени янеобходимыэ якулятыв с ысоким содержанием сперматозоидо .в Обычн о эт о наиболе е качественна я част ь второ й фракци ,и собираемо й пр и мануальном получени и спермы .Степенр ьазбавленив яарьируео тд 2:1 т .9:1 оПослр еазбавлени я 1 вмс лпермыд олжнс оодержатьсо якол3 о 0млс .нперматозоидо в а ,в дозд ело ясеменени( я10 0мл )– н еменее 5,2млрп .додвижнык хлето .к Разбавленную сперм у расфасовываю т в полиэтиленовы е флаконы , бутылочк ,и пакеты , флекситюбик ,и в специальны е катетеры дл я ос-е менени я ихранят в темнот епрт иемператур е17–18 � Сс в терильном боксе-термостат е ил и в специальны х термоса х дл я хранени я и тран-с портировк .иВв орем яхраненис яперм уосторожн оперемешиваю тн е менед евур хас в зутк .иПр ихранени ит иранспортировк енеобходим о строгс оледитз ьт аемпературным режимом .Отклоненит еемпературы о топтимально йотрицательн овлияе тн аоплодотворяющуюс пособностс ьпермы . Хранени е спермы при температур е 2–5 � С . Сперм у быка , сохр-а няемую пр и 2–5 � С , фасую т в стерильны е стеклянны е флаконы , одноразовы е полиэтиленовы е ампулы ил и в пайеты . Расфасованную сперм у оставляю т пр и комнатно й температур е (18–25 � С ) н а 20–3 0 ми ,н
