гд еР – количествр оазбавителд ял 1 ямс лпермы; С – концентрацис яперматозоидос в вперм ,емлр .дм;л А – подвижностс ьперматозоидоп вослр еазмораживани( яб 4алл;)а V – объемд озыс пермы ,м.л 0,01 0– подвижны хсперматозоидод в воз ,емлр.д 1 0– перевоб далло( в4к в )оличествп оодвижныс хперматозоидо.в Разбавленис епермыб аранк и аозла . Посл е получени я сперм у постепенн оохлаждаю тд о25–30 � С .В момен тразбавленис яперм ас ир-е д а должны имет ь одинаковую температур .у Разбавляю т сперм у в спермоприемник .е Н а 1 м л спермы добавляю т 1– 2 м л среды . Охлаждаю тразбавленнуюс перм упостепенн од о2–4 � Ст в ечени е2– 3 .чЖ-е лательн офлаконыс с опермо йпоместит в ьхимическис йтакав с нодо й температуры2 5–30 � Сп и оместитх в ьолодильни кнч 2 аас.а Пр и использовани и сре д длз яамораживани я и длительног о хран-е ни япосл еполученис яперм увыдерживаю тн еболе е1 5ми .нСредо й ВИКА разбавляю в тоди нприемс в оотношени и 2:1прк ионцентраци и сперматозоидо в 5,2– 3,3 млр .д в м л и 3:1 пр и концентраци и и х выш е 3,3 млр .д в м .л Средт( уемпературы 30 � С ) добавляю т в сперм у осторожнп ос отенкамс пермоприемник.а Пр и использовани и ЛЖГТЦГ-среды сперм у разбавляю т в дв а прием :а сначал а ЛЖ-средо й в соотношени и 5,0:1 пр и температур е 28 � 2 � Сз а ,атем добавляю тоди нобъем ЛЖГТЦГ-среды прт иемп-е ратур2 е0 � 2 � С . ГЖУК- трис-буфернос йредос йвежеполученнуюс перм уразбавляю в тоди нприемс в оотношени и 3:1прк ионцентрацис иперматозоидо3 в– 4млр в .дмп 4:1 и лрк ионцентрации ис хвыш 4 емлр в .дм.л Спермк уозла разбавляю5 в т–2р 0а .зИо здногэ оякулят аможн ополучит ьд4 од 0о в а ,знеделюо о тдногс оамцв ав орем яполовогс оезон а– д3 о0д 0о.з Разбавленис епермых ряка .Посл еполученис япермв уыдерживаю т т вечени2 е0–3 0ми нпрк иомнатнот йемператур ер иазбавляю т2 в–1 0 ра .зВ неразбавленнос йперм едолжнс оодержатьс ян е мене е10 0мл .н сперматозоидо ,вподвижност ь– н ениж е 7балло .вВ одно йдоз еобъемом1 0 0мд лолжнб оыт 5,2 ьмлрп .додвижныс хперматозоидо.в Приме ррасчетк аоличеств адо зк иоличеств аразбавител .яПроцен т сперматозоидо в с нормально й подвижностью – 70%( 7,0 ,) концентр-а ци я– 13 4миллион 1 в ам ,лмассэ аякулят а– 23 .г 3 Количествд оо з– 231,0 · 33 5,2 : 7,0 · 4=д 8 о .з 1 · 80 0– 23 3=5 6 7мр лазбавител.я Разбавленис епермы жеребца .Разбавляю тсперме ,услк ионцентр-а цис яперматозоидо вн емене е15 0мл в .нм л иподвижност ьн ениж е 6 балло .в Степен ь разбавлени я – 2:1 – .3:1 Сред у приливаю т к сперм е
небольшим ипорциям и иосторожнс омешиваю тпосл едобавлени як-а ждо йпорцис иреды .
Разбавленис епермы птиц .Оплодотворяющас япособностс ьвеж-е полученно й спермы пти ц сохраняетс я недолг .о Сперм у петухо в и индюко вможн оиспользоватт в ьечени3 е 0мич а ,.нтобыо беспечитс ьт-а бильн о высоки е результаты выводимост и цыпля т и индюша ,т е е и-с пользуют в течени1 е5–2 0ми .нПослр еазбавленис яперм уможнх ор-а нит ь д о 2– 3 .ч Дл я разбавлени я использую т нескольк о срет( даб .л 3 .) Разбавляюс тперм 1:1 у– .3:1
| Т а б л и ц а .3 С о с т а в с р е д д | л я р а з б а в л е н | и я с п е р м ы | п т и ц |
|---|---|---|---|
| Н а и м е н о в а н и е р е а к т и в а | В И Р Г Ж -2 | Л е й к а | Т и р о д е |
| Н а т р и я х л о р и д | – | – | 8,0 |
| К а л и я х л о р и д | – | – | 0,0 2 |
| К а л ь ц и я х л о р и д | – | – | 0,0 2 |
| М а г н и я х л о р и д | – | 0,0 6 7 6 | 0,0 1 |
| Н а т р и я а ц е т а т | – | 6,0 1 3 | 1,0 |
| Н а т р и й д в у з а м е щ е н н ы й ф о -с | |||
| ф о р н о к и с л ы й | – | – | 0,0 0 5 |
| К а л и я ц и т р а т | – | 1,0 2 8 | – |
| Н а т р и й г л у т а м и н о в о к и с л ы й | 8,2 | 9,1 2 | – |
| Ф р у к т о з а | – | 0,1 | 0,1 |
| Г л ю к о з а | 8,1 | – | – |
| Д и с т и л л и р о в а н н а я в о д а | 1 0 0 м л | 1 0 0 м л | 1 0 0 м л |
.3.6Контроло ьсмотическогд оавлени яи рНс ред дл яразбавленис япермы
Осмотическо е давлени е определяю т методом криоскопи ,и рНпотенциометрическим методом с помощьюс оответствующег оприбор .а
Криоско п имеев тнутреннюю пробирк( уцилинд рн а10 0м лбе зо-с новани ,я с плоским дном ,) в которую вставляетс я резинова я пробк .а Пробк а имее т центрально е отверсти е дл я термометр а Бекман а и н-е большо е отверсти е в боково й част и с металлическо й втулко ,й чере з которую проходи т проволочна я мешалк ;а в процесс е работы втулк у смазываю ткапелько ймашинног омасл .аВнутрення япробиркт с аермометром Бекман а имешалков йставляетс в яболе еширокую пробирк( уцилинд рн2 а5 0мб лео зсновани с ,яплоскимд ном )у икрепляетс в я не й посредством широког о (4– 5 см ) толстог о резиновог о манжет .а Широка япробиркс алужи твоздушно йрубашко йдл явнутренне йпробирк .иСобранны йприбо рпогружаю тчере зотверсти е вкрышк с ер-е зиново йвтулко йт волстостенныс йтака( нвысот а20 0мм ,внутренни й диамет р 115–12 0 мм .) Предварительн о стаказ наполняю т охладитель-
нос ймесьюс ,остоящеи й змелкр оаздробленногл оьди алс инегс и аол и в весовом отношени и .1:5 Температур а охладительно й смес и должн а поддерживатьс я н а 3–5°С ниж е температуры замерзани я синтетич-е скос йреды путемд обавлени яльд аилс инег .аПричемс месл ььдс( ан-е г )а и сол и периодическ и перемешиваетс я проволочно й мешалко ,й которав яставляетсч яереб зоковоо етверстик в ерышкс еосуд.а Термомет рБекман аимее тдв арезервуар артути :основно йнижни й и дополнительны й в верхне й части ; об а резервуар а соединены межд у собо й капилляром ; пр и необходимост и можн о ртут ь перемещат ь и з одногд в оруго .йВозможност ьперераспределенир ятутр в иезервуара х позволяе т настроит ь термомет р та ,к чтобы температур а замерзани я растворител( яводыл )ежалв в аерхнеч йаст ишкалы. Основна яшкалт аермометрд алинна я– окол2 ос 5м иразделен ан а 5–6 � С ,ценд аелени я– 0,01 � .Н ашкал с епомощьюл упы можнд оелат ь отсчет с точностьюд 0,0 о01–0,002 � С . Пере д работо й необходим о настроит ь термомет ,р .т .е установит ь измеряемую температур у замерзани я дистиллированно й воды таким образом , чтобы пр и 0 � С ртут ь находилас ь в верхне й част и шкалы , примерн о межд у делением 3 и .5 Д о начал а настройк и следуе т уб-е дитьс ят вом ,чт онижни йрезервуа рпр икомнатнот йемператур еполностьюз аполнер нтутью . В стака н емкостью 200–25 0 м л наливаю т 150–20 0 м л дистиллированно й воды ,и добавля я кусочк и льд ,а охлаждаю т д о 2–3 � С ; контролирую т температур у обычным термометром . В термометр е Бекман а нагреваю т руко й ртут ь в нижнем резервуар е и следя ,т чтобы онз а-а полнил а д о верх у капилля ,р посл е чег о термомет р переворачиваю т ввер х нижним резервуаром . Продолжа я нагреват ь резервуа ,р добив-а ютсс яоединенис ятолбикр атутр с итутьюв ерхнегр оезервуар .аПосл е этог оосторожн о иплавн ,очтобы н еразорватс ьтолби кртутк в иапилляр ,епридают термометр уобычно евертикально еположени е ипогружаю т нижни й резервуа р в подготовленную охлажденную вод .у Выдерживаю т 3– 5 ми ,н постоянн о помешива я термометром( резерву-а ром ) в вод е кусочк и льд .а Затем осторожн о вынимаю т термомет р и резк о опускаю т нижним резервуаром н а ладон ь рук .и Столби к ртут и долже н оборватьс я межд у значениям и шкалы 3 и .4 Есл и столби к оборвалсв яышт ,е оподогреваниемр езервуарр аукос ймещаюс ттолби к ртутз и аизги бкапиллярв к аерхнем урезервуар у ипытаютс яоборват ь столби к внебольшом расширени икапиллярв аерхнег орезервуар .аЗ-а тем быстр о помещают термомет р в охлажденную вод .у Прт иемпер-а тур е2–5,2 � Сс толби кртут идолже ннаходитьс ямежд у делением шк-а лы5 и 5,4 � С( пр0 и � С – межд5,4 и 3 у � С .)Посл енастройкт иермомет р закрепляю с тпомощью штативв в аертикальном положенис в итакан е о схлажденнов йодо .йПробк с апроволочно ймешалкод йолжн апосто-
