Биотехника размножения сельскохозяйственных животных. Часть 3. Разбавление и хранение спермы. Осеменение самок сельскохозяйственных животных и птиц

Тем .6 аРАЗБАВЛЕНИЕ СПЕРМЫ Цел ь занятий : приобретени е студентам и навыко в приготовлени я синтетическис хре др иазбавленис япермы производителес йельскохозяйственны хживотныу с хчетому слови йс ирокх аранени.я Объекты исследовани ,я материалы и оборудование : самцы животны ,х животные-манекены ил и чучел( адл я бык а и хряк ;)а сперм а свежеполученна яр иазбавленна ;яинструментыо ,борудовани е имат-е риалы дл яполученис япермыт ;ермоста ,тхолодильнив ,кодяна ябан ,я магнитна я мешалк ,а биологически й термоста ;т спектрофотомет р э(лектрически й фотоколориметр ,)микроскопы МБР( МБИ- ,1 МБИ- ,3 МБИ- 4ил иБИОЛАМ с )осветителям ,имикроско пМБИ-1 1ил иБИОЛАМ-М т селевизионно й камерой ; обогревательны е столик ,и предметны е и покровны е стекл ;а посуд а – колбы , мерны е цилиндры и мензурк ,и смесител и дл я спермы ; градуированны е пипетк ,и стеклянны е палочки ; фильтры бумажны е и марлевы ,е мембранны й фильт р 4,0 5мкмс ;пиртовыт еампонык ;омпонентыс рев :дод адистиллированнак ,яуриныя ейцг ,аомогенизированно емолокг( оомогенизированны е сливк и иобра ,)тлактозг ,алюкоз ,афруктозс ,аахарозг ,алициг ,нлиц-е ри ,н натри я цитра ,т KH2P^O 4 , Nа2HPO4^� 12H2O , натри я хлори ,д натри я гидрокарбонак ,талих ялориа ,дммонис яульфа ,тмагнис яульфах ,тел-а ток ,напроновак яислотт ,аокоферо( л25–30%-ны ймасляны йраствор ,) ди-трет-бутил-крезо л (ДТБК ,) декстри ,н гуммиараби ,к трис-буфе ,р лимоннак яислотк ,асилис ,тпермосан- 3илс ипермоса нППК ил иполиге ,н стрептоци ,д пеницилли ,н стрептомици ,н каталазт ,аилозиг ,нентамицил ,нинкомицис ,нпектинамици.н Методически еуказани.я Заняти япроводятс я вклиник е илабор-а тори и кафедры (учебном пункт .)е Сначал а студентам необходим о четк о уяснит ь цел ь и значени е разбавлени я спермы , затем познакомитьсс с яоставом наиболер еаспространенныс хинтетическис хред дл я разбавлени я спермы производителе й и правилам и и х приготовлени .я Особов ениманис еледуео тбратит ьнт аребованик к яомпонентамс ре ,д срок ихраненис яре д посл е приготовлени ,я услови яразбавленит( яемператур а идс ,).ртепенр ьазбавленис япермы с учетомк оличеств аподвижныс хперматозоидоо в вднод йозд ело ясеменени .я Пр и использованиг иотовы х коммерчески х сре д и автоматическо й системы оценк и и разбавлени я спермы студенты должны познакомитьс я с последовательностью и сущностью отдельны х технологич-е скио хпераци.й Послэ етогс отудентыд олжныс амостоятельн оприготовито ьдн уи з синтетически х сре .д Посл е приготовлени я среды( возможн о одновр-е менн о с приготовлением е )е можн о приступит ь к получению спермы о тпроизводител .яПолученнуюс пермо уцениваю тз иатемр азбавляю .т Пере дразбавлением обязательн онеобходим опроверитк ьачеств опри-

готовленно й среды . Разбавленную сперм у оставляю т дл я изучени я выживаемостс иперматозоидо .в

.1.6Состас вре диз начени еразбавленис япермы

Значени е разбавления спермы. Разбавлени е спермы позволяе т увеличит ьобъемэ якулят а иосеменит ьбольшс еамот а ,какжс еохр-а нит ь жизнеспособност ь и оплодотворяющую способност ь сперматозоидов вно ерганизм.а Требовани я к средам дл я разбавлени я спермы. Дл я разбавлени я использую тспециальныс ереды ,биологически ес иинтетически .еОн и должныо твечатс ьледующимт ребованиям: поддерживат ьоптимально еравновеси еминеральны хвещест ,вн-е обходимы хдл яжизнедеятельностс иперматозоидо ,в иимет ьосмотическод еавленир ,еавно( еизотоническоек )ровс иамц;а предохранят ь сперматозоиды о т температурног о шок а и предо-т вращат ьил иослаблятг ьубительнов елияни ен ани хпроцессо ,впрои-с ходящиз в хамораживаемо йило иттаиваемос йперм;е способствоватс ьохранениюп лазматическо ймембраныа и кросомы , препятствовата ьгглютинацис иперматозоидо;в снижат ь активност ь метаболически х процессо в в сперматозоида х прх иранени ипро итносительнв оысокит хемпература( х 4– 20ºС ;) защищатс ьперматозоиды от токсически хпродукто ,вобразующихсп в яроцесс еметаболизм;а предупреждат ь развити е микроорганизмо ,в которы е губительн о действую тнс аперматозоидып и оловот йракс тамо.к Веществ ,аиспользуемы едл яприготовленис яре.д Дл яприготовлени я сре д применяю т компоненты( реактивы ) з ваводско й упаковк :е с втеклянны хбанка с хпритертым ипробкам( иил с икорковым ипробкамз ,иалитымс иверх упарафиномт а ,)акжз в еапаянны хполиэтиленовы хмешочка .хН аупаковк едолжн абытэ ьтикетк с аобозначением н-а звани япрепарат а ипредприятив ,яыпустившегр оеактис ,втепенч ии-с тотыр еактив( аЧДА – чистый дла янализ ,аХЧ – химическич йистый ) и номерк аонтрольнога онализ .аХраняр теактивы в шкафас в хухомт епломп омещени .и Длп яриготовленис яреи дспользуюс тледующив ееществ.а Натри я цитрат (Na3C6H5O7 � 5H2O – трехзамещенны ,й пятиводный .) Белы е прозрачны е кристаллы ил и мелкокристаллически й порошос ,клабощелочногс ,оолоноватог овкус .аОбладае тхелатнымс ивойствам и а(ктивн о связывае т ионы кальци я и тяжелы х металло в и уменьшаес тодержани еис в хред )е ипонижае тнабухани е ипроница-е мост ь мембраны сперматозоидо ,в предохраня я и х о т потер и электрическогз оаряд аа игглютинации ;рассеивае тжировы ешарик в ижелтк е тач ,кт опро иценкр еазбавленнос йпермы по дмикроскопом можн он-а

блюдат ь з а отдельным и сперматозоидами ; вмест е с другим и компонентамс иоздае тнеобходимоо есмотическод еавленир и еНс реды. Натриц яитрат (Na3C6H5O7 � 2H2O – трехзамещенныд йвухводный ,) идентиче нNa3C6H5O7 � 5H2O^. Кали яфосфат (однозамещенны й– KH2P^O 4 .)Больши епрозрачны е кристаллы илк иристаллическип йорошос ,клабокислын йв аку.с Натри я фосфат (Nа2HPO4^� 12H2O – двузамещенны й двенадцативодный .)Белык ерупнык еристаллы. Натри я гидрокарбонат (NaHCO3) . Белы й порошо ,к щелочно й н а вку.с Магнис яульфат (MgSO4^� 7^Н 2О .)Бесцветнык еристаллы. Аммони я сульфат ([NH4⁾ 2S^O 4 .] Бесцветны й кристаллически й порошов ,козможе нлегки йжелтоватыо йттено.к Трило н Б х(елатон-,3 двунатриева я солэ ьтилендиаминтетрауксу-с но й кислоты , C10^H 14^O 8^N 2N^a 2 � 2H2O .) Белы е кристаллы ; сберегаю т в темном мест .е Всэ ет и сол и подобн о натри й цитрат у связываю т ионы кальци я и оказываю т благоприятно е действи е н а состояни е и целостност ь мембра н сперматозоидо ,в создаю т необходимо е осмотическо е давлени е и рНс реды. Натри я хлорид (NaCl .) Мелкокристаллически й порошо к ил и таблетк имассо.г 9,0 й Калих ялорид (KCl .)Белы ймелкокристаллическип йорошо.к Кислотл аимонная (C6H8O7 � H2O .)Белык йристаллически йпорошо ,к хорошр оастворимв в од.е Трис-буфер (2-амино-2-гидроксиметил-3,1-пропандиол .) Мелкокристаллически й белы й порошо .к Устойчив о удерживае т первон-а чальную величин урНс реды ,обладае тосмотическим действием ,хорош опроникае тчерек злеточную мембран .уОс нпособес ноединятьс я сН+ иСО2 иустранятя ьвлени ядыхательнога оцидозк алето к иможе т заменитс в ьредаг хлюкоз ун иатри яцитра.т Глюкоз а (виноградны й сахар , C6H12^O 6^�H 2^O .) Белы й гигроскопичны йпорошос кладкого вкус .а Фруктоз а г(ексоз ,аC6H12^O 6 .)Белып йорошос кладкогв окус .а Сахароза т(ростниковыс йаха ,рC12^H 22^O 11 .)Представляес тобо йб-е лык еристаллыс ,ладки енв аку.с Лактоз а (молочны й саха р – С12^H 22^O 11^�H 2^O .) Белы е кристаллы ил и белы й кристаллически й порошо к без запах ,а с о слабым сладким вкусомр ,астворимыв в од .еХраняб в тытовомх олодильник епрт иемпер-а тур5 е � С . Глици н а(миноуксусна я кислот ,а NH2C^H 2COOH .) Белы й мелкокристаллически йпорошос ,клабогс опецифическогз оапах ас иладковатог о вкус .а