ГЛАВА 5
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена в течение 2011-2018 гг. в отделе патологии размножения РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» и на кафедре фармакологии и физиологии УО «Гродненский государственный аграрный университет». Клинические опыты по изучению терапевтической эффективности разработанного препарата проводили в животноводческих хозяйствах Минской области: СПК «Щомыслица», РУСП «ППР «Правда», КУСХП «Совхозагрофирма «Рассвет»; Гродненской: ГП «Племзавод-Рось», СПК «Ханчицы» ОАО «Гродненская табачная фабрика «Неман»; Брестской – ОАО «Экспериментальная база «Белоусовщина».
Объектом исследований служили коровы черно-пестрой породы, 2-4-й лактаций, клинически здоровые и больные клиническим и субклиническим маститами, лабораторные животные (мыши, белые крысы, морские свинки и кролики). Фармакологические, токсикологические, аллергенные, раздражающие, эмбриотоксические и тератогенные свойства препарата изучены на 72 белых мышах, 60 белых крысах, 10 морских свинках, 11 кроликах. Лечебная эффективность испытуемых средств определена на 335 животных.
Предметом исследований являлись кровь и сыворотка крови, секрет из вымени коров, больных клиническим и субклиническим маститами, и закономерности клинических изменений в организме животных при возникновении патологии и в процессе восстановления. Выполнено 240 гематологических, 720 биохимических, 420 иммунологических, 270 бактериологических и 3073 диагностических исследований.
Распространение мастита у коров при различных способах содержания оценивали по данным зооветеринарной отчетности и собственных исследований при проведении акушерскогинекологической диспансеризации коров в шести хозяйствах
Минской и Гродненской областей: ЧУП «Озерицкий-Агро» (330 голов), РУСП «ППР Правда» (227 голов), ОАО «Щомыслица» (320 голов), ЗАО «Гудевичи» (480 голов) – стойлово-пастбищное содержание и РДУП «Жодино» (726 голов), ОАО «1-я Минская птицефабрика» (300 голов) – круглогодовое стойловобеспривязное.
Диагностику мастита проводили согласно «Методическим указаниям по диагностике, лечению и профилактике маститов у коров» (Минск, 2006), а также использовали быстрый маститный тест с беломастином согласно инструкции по применению [140]. При этом 10%-ный раствор беломастина разводили дистиллированной водой в соотношении 1:3, в углубление пластинки МКП-1 (МКП-2) вносили по 1,0 см3 испытуемого молока, добавляли по 1,0 см3 рабочего раствора диагностикума и перемешивали путем горизонтального вращения в течение 10-20 секунд. Результат оценивали по следующим критериям:
«-» – (отрицательная реакция) жидкая смесь остается однородной;
«±» – (сомнительная реакция) в смеси образуются слизистые нити;
«+» – (положительная реакция) смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка.
Для определения бактериологических, гематологических, биохимических и иммунологических показателей при изучении этиологии и патогенеза мастита у коров брали содержимое молочной железы (молоко) и пробы крови из яремной вены у животных опытной и контрольной групп.
Пробы крови из яремной вены отбирали по общепринятой методике, для гематологических исследований кровь стабилизировали с помощью гепарина.
Отбор проб молока (секрета вымени) и изучение этиологической структуры клинического и субклинического маститов у коров проводили в условиях СПК «Щомыслица» Минского района и в диагностической лаборатории отдела
эпизоотологического и иммунологического мониторинга РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» согласно «Методическим указаниям по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени сельскохозяйственных животных», утв. ГУВ МСХ и П РБ № 102-5/1112 от 24.05.2008 г. [128]. С этой целью сформировали две группы животных, больных клиническим и субклиническим маститами, которые не подвергались медикаментозным обработкам.
Видовую идентификацию микроорганизмов проводили биохимическим анализатором бактерий Vitek «Biomeriex». Пробы паренхимного молока брали после окончания доения с соблюдением правил асептики. Пробы доставляли в лабораторию в течение 3-4 часов с момента взятия в специальных термоконтейнерах, обеспечивающих температуру не выше +8–+10°С.
Для выделение бактерий группы кишечной палочки проводили на среде Эндо и среде Кода. Посевы ставили в термостат при температуре +37ºС и просматривали через 18-24 ч. Изменение цвета среды Кода из фиолетового на зеленый свидетельствовало о наличии бактерий группы кишечной палочки.
Идентификацию бактерий рода эшерихий проводили путем посева на среду Симмонса (цитратный тест) и пептонную воду (для реакции на индолообразование). На среде Симмонса эшерихии не растут и, следовательно, не изменяют цвета. При определении индолообразования покраснение фильтровальной бумажки, пропитанной реактивом Эрлиха-Бомэ, находящейся в пробирках с посевами на пептонной воде, свидетельствовало о наличии эшерихий. В классической реакции наблюдали образование розового (индольного) кольца на границе двух жидкостей эфирной вытяжки и реактива Эрлиха-Бомэ. Посевом со среды Кода на среду Олькеницкого идентифицировали эшерихии, бактерии рода энтеробактер от сальмонелл и протея. Посев на среду Олькеницкого в пробирках проводили петлей по
