поверхности скоса среды и внутрь столбика. Посевы культивировали в термостате при +37°С в течение 24 часов. Изменение цвета (глюкоза +, лактоза +) столбика и скоса среды из красного в желтый при отсутствии почернения внутри столбика свидетельствовало о росте бактерий из рода эшерихии. Изменение скоса среды и столбика в малиновый цвет (мочевина +) и почернение внутри столбика (сероводород +) указывало на рост протея. Изменение цвета среды в красный цвет, столбика – в желтый и почернение внутри него указывало на рост сальмонелл.
Для выделения золотистого стафилококка использовали укоренный метод, который основан на применении элективной, дифференциально-диагностической среды ДНК-новокаиноваго агара. Элективные свойства данной среды обусловлены ингибирующим действием на постороннюю микрофлору новокаина, дифференцирующие – добавлением натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты, которая позволяет идентифицировать золотистый стафилококк по его дезоксирибонуклеазной активности. Для этого засеянные чашки поместили в термостат и инкубировали при температуре +37ºС в течение 24 часов. На ДНК-новокаиновом агаре золотистый стафилококк растет в виде круглых колоний с ровными краями. ДНК- азную активность определяли с помощью 1Н раствора соляной кислоты. Чашки с кислотой выдерживали 2 минуты. После образования просветлений вокруг колоний кислоту слили. После этого чашки просматривали в проходящем свете. Обнаружение зон просветления с ярко выраженными границами указывает на наличие золотистого стафилококка.
Стрептококки выделяли путем посева на среду Карташовой, на которую высевали 1 мл исследуемого молока. Затем посевы помещали в термостат при температуре +37ºС. После 24 часов инкубирования из пробирок с измененным цветом среды готовили мазки и окрашивали по Граму. Дифференциацию стрептококков от стафилококков проводили путем определения каталазной активности. Стрептококки – каталазоотрицательные,
не содержат фермент каталазу. Для определения каталазной активности исследуемую культуру растворили в 10%-ной перекиси водорода и наблюдали за выделением газа, в отличие от стафилококков, у стрептококков он не образуется.
Для определения гемолитических свойств стафилококков использовали кровяной агар.
Патогенные свойства выделенных микроорганизмов определяли путем постановки биологической пробы на 3 белых мышах. Для этого их заражали внутрибрюшинно 1 млрд. суточной культурой в дозе 1,0 см3 , при этом за животными вели наблюдение в течение 3 суток.
Для уточнения диагноза на мастит ставили пробу отстаивания: в пробирки надаивали по 10,0 см3 молока, закрывали пробкой, ставили в холодильник при температуре +4– +6ºС на 16-18 часов и учитывали образование осадка и изменение цвета молока.
Для подсчета количества соматических клеток использовали метод Прескотта-Брида и анализатор вискозиметрический «Соматос-М» согласно инструкции по работе с прибором.
Массовую долю жира и белка в молоке, а также плотность измеряли на анализаторе качества молока «Лактан 1-4» 220/242 согласно инструкции по работе с прибором.
Кислотность молока определяли титрометрическим методом. Для этого в коническую колбу наливали 10 см3 молока, 20 см3 дистиллированной воды и 3 капли 1%-ного спиртового раствора фенолфталеина. Содержимое колбы тщательно перемешивали, из бюретки добавляли в колбу каплями 0,1 Н раствор щелочи до появления слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение минуты. Количество миллилитров потраченной на титрование щёлочи, умноженное на 10, является градусом титруемой кислотности молока.
Исследования по изучению вопросов патогенеза клинического и субклинического маститов проводили в условиях РУСП «ППР Правда» Минского района. С этой целью
по принципу парных аналогов были сформированы три группы коров: две опытные – с клиническим и субклиническим маститами и одна контрольная – клинически здоровые коровы. В ходе опыта у этих животных отбирали кровь для гематологических, биохимических и иммунологических исследований.
Гематологические и биохимические показатели крови определяли с помощью анализаторов Medonic CA 620 и Dialab Autolyser 20010 D с использованием диагностического набора реактивов фирмы CORMAY (Poland).
Количество общего белка определяли методом постановки биуретовой реакции. Он основан на образовании в щелочной среде окрашенного в фиолетовый цвет комплекса пептидных связей с ионами двухвалентной меди. Интенсивность образовавшейся окраски прямо пропорциональна количеству пептидных связей, и тем самым, концентрации белка. Оптическую плотность измеряли при длине волны 540 нм. Содержание белка в исследуемом растворе рассчитывали по калибровочному графику.
Концентрацию альбумина в сыворотке крови определяли по реакции с бромкрезоловым зеленым, который в слабокислой среде в присутствии детергента образует с альбумином окрашенный комплекс синего цвета. Интенсивность окраски измеряли при длине волны 690 нм.
Для контроля естественной резистентности подопытных животных исследовали концентрацию иммуноглобулинов A, G, M в сыворотке крови турбидиметрическим методом с использованием диагностического набора «Dialab». Бактерицидную активность сыворотки крови исследовали методом, предложенным Мюнселем и Трефенсом в модификации О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1975) с кишечной палочкой [174].
Лизоцимную активность сыворотки крови определяли методом, описанным А.Г. Дорофейчиком (1968). В качестве тест-культуры использовали Micrococcus lysodeiticus [174].
