Фагоцитарную активность лейкоцитов крови определяли по методике Е.А. Кост и М.И. Стенко (1975) [174].
Компоненты для конструирования противомаститного препарата подбирали с учетом их физической, химической и фармакологической совместимости [233].
Чувствительность выделенной от коров, больных маститом, микрофлоры к разработанному препарату «Белмаст» определяли лунко-диффузным методом. В стерильные бактериологические чашки (чашки Петри) наливали по 20 см3 расплавленной агаровой среды. На поверхность застывшей среды наносили 1 см3 бактериальной взвеси испытуемой культуры (предварительно стандартизированной до концентрации 1:100000 по стандарту мутности). В некоторых случаях засевали непосредственно молоком (секретом) из пораженной четверти вымени. Далее чашку ставили в термостат (+37ºС) на 30 минут. После этого на поверхности засеянной среды делали металлическим лункорезом луночки, в которые вносили разработанный препарат. Чашки выдерживали 2-3 часа при комнатной температуре и в течение 16-18 часов в термостате при температуре +37ºС. Оценку результатов проводили с помощью линейки, которой определяли диаметр зоны задержки роста микроорганизмов вокруг лунки.
Исследования по определению антибактериальной активности разрабатываемого препарата «Белмаст» в процессе хранения проводили по модифицированной методике. В чашки Петри заливали 15 см3 4%-ного МПА, оставляли для застывания агара на 30-40 мин; затем на поверхность застывшего агара заливали 10 см3 1,2-1,6% (мягкого) мясопептонного агара, содержащего бактериальную взвесь патогенного микроорганизма (тест-штамма). После нанесения 1,2%-ного агара с тест-организмом на плотный агар чашки на 30 мин оставляли для застывания, затем стерильным металлическим пробойником делали луночки в агаре на расстоянии 2 см от края чашки (по 4 лунки в каждой чашке), после чего в лунки вносили испытуемый препарат в количестве 0,1 см3 . В таком виде чашки
выдерживали в течение 2 часов при комнатной температуре, затем помещали в термостат при +37ºС. Результат учитывали через 24 часа.
Изучение раздражающих и токсикологических свойств разрабатываемого препарата проведено согласно «Методическим указаниям по токсикологической оценке химических веществ и фармакологических препаратов, применяемых в ветеринарии» [42].
Для определения острой токсичности препарата «Белмаст» провели опыт на 20 белых крысах живой массой 195,0±5,0 г. В предварительном опыте на 6 животных определяли предельно переносимую дозу препарата. Для этого по принципу аналогов сформировали 2 группы (опытная и контрольная) животных по три головы в каждой. Животным опытной группы вводили препарат «Белмаст» в максимальной дозе (5,0 см3 ) внутрижелудочно при помощи шприца с металлическим зондом. Поение и кормление проводили не ранее, чем через 3 часа после дачи препарата. Крысы контрольной группы получали изотонический раствор натрия хлорида в дозе 5,0 см3 . Наблюдение за животными вели в течение 14 дней, учитывая общее состояние, поведение, прием корма и воды, регистрируя сроки их гибели. В ходе предварительного опыта установлено, что при однократном внутрижелудочном введении белым крысам препарата в максимально возможной дозе (5,0 см3 ) падежа не отмечено. Животные не имели отклонений в клиническом состоянии, адекватно реагировали на внешние раздражители, охотно принимали корм и воду. Изменений со стороны кожного, волосяного покрова и цвета слизистых оболочек у животных не отмечено. Исходя из этого, основной опыт по определению острой токсичности проводили методом «тест накопления», т.е. препарат вводили в дозе 5,0 см3 трехкратно с интервалом 2 часа. По принципу аналогов сформировали 2 группы (опытная и контрольная) белых крыс по 7 голов в каждой. Препарат вводили животным опытной группы внутрижелудочно при помощи шприца с металлическим
зондом. Поение и кормление проводили не ранее, чем через 3 часа после дачи препарата. Крысы второй группы служили контролем и получали изотонический раствор натрия хлорида в дозе 5,0 см3 . Наблюдение за животными вели в течение 14 дней, учитывая общее состояние, поведение, прием корма и воды, регистрируя сроки их гибели.
Изучение отдаленных последствий противомаститного препарата «Белмаст» (эмбриотоксическое и тератогенное действие) проводили в опытах на 40 самках крыс, 40 самках белых мышей и 5 крольчихах. Для этого вечером в клетку с самками помещали самцов, а утром на следующий день исследовали мазок из влагалища. День обнаружения спермиев в мазке крыс (или влагалищной пробки у мышей) считали началом беременности.
В опыте по определению токсичности для эмбрионов крыс и мышей препарат вводили самкам (n=9) внутрижелудочно в дозе 0,5 мл/кг на протяжении всего срока беременности, а контрольным (n=9) – дистиллированную воду в той же дозе. Для выявления поражающего действия препарата провели убой трех самок на 5-й день беременности (период имплантации) и подсчитали количество желтых тел, плодов, расположение их в рогах матки. Учитывали эмбриональную смертность, резорбцию плодов. Трех самкок в группах усыпляли на 10-й день беременности (период органогенеза) и отмечали развитие эмбрионов по тем же критериям. Оставшихся животных усыпляли на 19-20-й день беременности и учитывали количество желтых тел, аномалии развития эмбрионов, плодов, равномерность расположения плодов в матке.
Определение раздражающего действия препарата на молочную железу проведено в РУСП «ППР Правда» Минского района на 10 здоровых коровах, которые дали отрицательную реакцию на скрытый мастит при постановке беломастиновой пробы и метода отстаивания, в сравнении с базовым препаратом (1%-ный раствор диоксидина согласно инструкции). Опытным коровам (5 голов) интерцистернально вводили
