Минской и Гродненской областей: ЧУП «Озерицкий-Агро» (330 голов), РУСП «ППР Правда» (227 голов), ОАО «Щомыслица» (320 голов), ЗАО «Гудевичи» (480 голов) – стойлово-пастбищное содержание и РДУП «Жодино» (726 голов), ОАО «1-я Минская птицефабрика» (300 голов) – круглогодовое стойловобеспривязное.
Диагностику мастита проводили согласно «Методическим указаниям по диагностике, лечению и профилактике маститов у коров» (Минск, 2006), а также использовали быстрый маститный тест с беломастином согласно инструкции по применению [140]. При этом 10%-ный раствор беломастина разводили дистиллированной водой в соотношении 1:3, в углубление пластинки МКП-1 (МКП-2) вносили по 1,0 см3 испытуемого молока, добавляли по 1,0 см3 рабочего раствора диагностикума и перемешивали путем горизонтального вращения в течение 10-20 секунд. Результат оценивали по следующим критериям:
«-» – (отрицательная реакция) жидкая смесь остается однородной;
«±» – (сомнительная реакция) в смеси образуются слизистые нити;
«+» – (положительная реакция) смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка.
Для определения бактериологических, гематологических, биохимических и иммунологических показателей при изучении этиологии и патогенеза мастита у коров брали содержимое молочной железы (молоко) и пробы крови из яремной вены у животных опытной и контрольной групп.
Пробы крови из яремной вены отбирали по общепринятой методике, для гематологических исследований кровь стабилизировали с помощью гепарина.
Отбор проб молока (секрета вымени) и изучение этиологической структуры клинического и субклинического маститов у коров проводили в условиях СПК «Щомыслица» Минского района и в диагностической лаборатории отдела
эпизоотологического и иммунологического мониторинга РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» согласно «Методическим указаниям по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени сельскохозяйственных животных», утв. ГУВ МСХ и П РБ № 102-5/1112 от 24.05.2008 г. [128]. С этой целью сформировали две группы животных, больных клиническим и субклиническим маститами, которые не подвергались медикаментозным обработкам.
Видовую идентификацию микроорганизмов проводили биохимическим анализатором бактерий Vitek «Biomeriex». Пробы паренхимного молока брали после окончания доения с соблюдением правил асептики. Пробы доставляли в лабораторию в течение 3-4 часов с момента взятия в специальных термоконтейнерах, обеспечивающих температуру не выше +8–+10°С.
Для выделение бактерий группы кишечной палочки проводили на среде Эндо и среде Кода. Посевы ставили в термостат при температуре +37ºС и просматривали через 18-24 ч. Изменение цвета среды Кода из фиолетового на зеленый свидетельствовало о наличии бактерий группы кишечной палочки.
Идентификацию бактерий рода эшерихий проводили путем посева на среду Симмонса (цитратный тест) и пептонную воду (для реакции на индолообразование). На среде Симмонса эшерихии не растут и, следовательно, не изменяют цвета. При определении индолообразования покраснение фильтровальной бумажки, пропитанной реактивом Эрлиха-Бомэ, находящейся в пробирках с посевами на пептонной воде, свидетельствовало о наличии эшерихий. В классической реакции наблюдали образование розового (индольного) кольца на границе двух жидкостей эфирной вытяжки и реактива Эрлиха-Бомэ. Посевом со среды Кода на среду Олькеницкого идентифицировали эшерихии, бактерии рода энтеробактер от сальмонелл и протея. Посев на среду Олькеницкого в пробирках проводили петлей по
поверхности скоса среды и внутрь столбика. Посевы культивировали в термостате при +37°С в течение 24 часов. Изменение цвета (глюкоза +, лактоза +) столбика и скоса среды из красного в желтый при отсутствии почернения внутри столбика свидетельствовало о росте бактерий из рода эшерихии. Изменение скоса среды и столбика в малиновый цвет (мочевина +) и почернение внутри столбика (сероводород +) указывало на рост протея. Изменение цвета среды в красный цвет, столбика – в желтый и почернение внутри него указывало на рост сальмонелл.
Для выделения золотистого стафилококка использовали укоренный метод, который основан на применении элективной, дифференциально-диагностической среды ДНК-новокаиноваго агара. Элективные свойства данной среды обусловлены ингибирующим действием на постороннюю микрофлору новокаина, дифференцирующие – добавлением натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты, которая позволяет идентифицировать золотистый стафилококк по его дезоксирибонуклеазной активности. Для этого засеянные чашки поместили в термостат и инкубировали при температуре +37ºС в течение 24 часов. На ДНК-новокаиновом агаре золотистый стафилококк растет в виде круглых колоний с ровными краями. ДНК- азную активность определяли с помощью 1Н раствора соляной кислоты. Чашки с кислотой выдерживали 2 минуты. После образования просветлений вокруг колоний кислоту слили. После этого чашки просматривали в проходящем свете. Обнаружение зон просветления с ярко выраженными границами указывает на наличие золотистого стафилококка.
Стрептококки выделяли путем посева на среду Карташовой, на которую высевали 1 мл исследуемого молока. Затем посевы помещали в термостат при температуре +37ºС. После 24 часов инкубирования из пробирок с измененным цветом среды готовили мазки и окрашивали по Граму. Дифференциацию стрептококков от стафилококков проводили путем определения каталазной активности. Стрептококки – каталазоотрицательные,
