не содержат фермент каталазу. Для определения каталазной активности исследуемую культуру растворили в 10%-ной перекиси водорода и наблюдали за выделением газа, в отличие от стафилококков, у стрептококков он не образуется.
Для определения гемолитических свойств стафилококков использовали кровяной агар.
Патогенные свойства выделенных микроорганизмов определяли путем постановки биологической пробы на 3 белых мышах. Для этого их заражали внутрибрюшинно 1 млрд. суточной культурой в дозе 1,0 см3 , при этом за животными вели наблюдение в течение 3 суток.
Для уточнения диагноза на мастит ставили пробу отстаивания: в пробирки надаивали по 10,0 см3 молока, закрывали пробкой, ставили в холодильник при температуре +4– +6ºС на 16-18 часов и учитывали образование осадка и изменение цвета молока.
Для подсчета количества соматических клеток использовали метод Прескотта-Брида и анализатор вискозиметрический «Соматос-М» согласно инструкции по работе с прибором.
Массовую долю жира и белка в молоке, а также плотность измеряли на анализаторе качества молока «Лактан 1-4» 220/242 согласно инструкции по работе с прибором.
Кислотность молока определяли титрометрическим методом. Для этого в коническую колбу наливали 10 см3 молока, 20 см3 дистиллированной воды и 3 капли 1%-ного спиртового раствора фенолфталеина. Содержимое колбы тщательно перемешивали, из бюретки добавляли в колбу каплями 0,1 Н раствор щелочи до появления слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение минуты. Количество миллилитров потраченной на титрование щёлочи, умноженное на 10, является градусом титруемой кислотности молока.
Исследования по изучению вопросов патогенеза клинического и субклинического маститов проводили в условиях РУСП «ППР Правда» Минского района. С этой целью
по принципу парных аналогов были сформированы три группы коров: две опытные – с клиническим и субклиническим маститами и одна контрольная – клинически здоровые коровы. В ходе опыта у этих животных отбирали кровь для гематологических, биохимических и иммунологических исследований.
Гематологические и биохимические показатели крови определяли с помощью анализаторов Medonic CA 620 и Dialab Autolyser 20010 D с использованием диагностического набора реактивов фирмы CORMAY (Poland).
Количество общего белка определяли методом постановки биуретовой реакции. Он основан на образовании в щелочной среде окрашенного в фиолетовый цвет комплекса пептидных связей с ионами двухвалентной меди. Интенсивность образовавшейся окраски прямо пропорциональна количеству пептидных связей, и тем самым, концентрации белка. Оптическую плотность измеряли при длине волны 540 нм. Содержание белка в исследуемом растворе рассчитывали по калибровочному графику.
Концентрацию альбумина в сыворотке крови определяли по реакции с бромкрезоловым зеленым, который в слабокислой среде в присутствии детергента образует с альбумином окрашенный комплекс синего цвета. Интенсивность окраски измеряли при длине волны 690 нм.
Для контроля естественной резистентности подопытных животных исследовали концентрацию иммуноглобулинов A, G, M в сыворотке крови турбидиметрическим методом с использованием диагностического набора «Dialab». Бактерицидную активность сыворотки крови исследовали методом, предложенным Мюнселем и Трефенсом в модификации О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1975) с кишечной палочкой [174].
Лизоцимную активность сыворотки крови определяли методом, описанным А.Г. Дорофейчиком (1968). В качестве тест-культуры использовали Micrococcus lysodeiticus [174].
Фагоцитарную активность лейкоцитов крови определяли по методике Е.А. Кост и М.И. Стенко (1975) [174].
Компоненты для конструирования противомаститного препарата подбирали с учетом их физической, химической и фармакологической совместимости [233].
Чувствительность выделенной от коров, больных маститом, микрофлоры к разработанному препарату «Белмаст» определяли лунко-диффузным методом. В стерильные бактериологические чашки (чашки Петри) наливали по 20 см3 расплавленной агаровой среды. На поверхность застывшей среды наносили 1 см3 бактериальной взвеси испытуемой культуры (предварительно стандартизированной до концентрации 1:100000 по стандарту мутности). В некоторых случаях засевали непосредственно молоком (секретом) из пораженной четверти вымени. Далее чашку ставили в термостат (+37ºС) на 30 минут. После этого на поверхности засеянной среды делали металлическим лункорезом луночки, в которые вносили разработанный препарат. Чашки выдерживали 2-3 часа при комнатной температуре и в течение 16-18 часов в термостате при температуре +37ºС. Оценку результатов проводили с помощью линейки, которой определяли диаметр зоны задержки роста микроорганизмов вокруг лунки.
Исследования по определению антибактериальной активности разрабатываемого препарата «Белмаст» в процессе хранения проводили по модифицированной методике. В чашки Петри заливали 15 см3 4%-ного МПА, оставляли для застывания агара на 30-40 мин; затем на поверхность застывшего агара заливали 10 см3 1,2-1,6% (мягкого) мясопептонного агара, содержащего бактериальную взвесь патогенного микроорганизма (тест-штамма). После нанесения 1,2%-ного агара с тест-организмом на плотный агар чашки на 30 мин оставляли для застывания, затем стерильным металлическим пробойником делали луночки в агаре на расстоянии 2 см от края чашки (по 4 лунки в каждой чашке), после чего в лунки вносили испытуемый препарат в количестве 0,1 см3 . В таком виде чашки
