выдерживали в течение 2 часов при комнатной температуре, затем помещали в термостат при +37ºС. Результат учитывали через 24 часа.
Изучение раздражающих и токсикологических свойств разрабатываемого препарата проведено согласно «Методическим указаниям по токсикологической оценке химических веществ и фармакологических препаратов, применяемых в ветеринарии» [42].
Для определения острой токсичности препарата «Белмаст» провели опыт на 20 белых крысах живой массой 195,0±5,0 г. В предварительном опыте на 6 животных определяли предельно переносимую дозу препарата. Для этого по принципу аналогов сформировали 2 группы (опытная и контрольная) животных по три головы в каждой. Животным опытной группы вводили препарат «Белмаст» в максимальной дозе (5,0 см3 ) внутрижелудочно при помощи шприца с металлическим зондом. Поение и кормление проводили не ранее, чем через 3 часа после дачи препарата. Крысы контрольной группы получали изотонический раствор натрия хлорида в дозе 5,0 см3 . Наблюдение за животными вели в течение 14 дней, учитывая общее состояние, поведение, прием корма и воды, регистрируя сроки их гибели. В ходе предварительного опыта установлено, что при однократном внутрижелудочном введении белым крысам препарата в максимально возможной дозе (5,0 см3 ) падежа не отмечено. Животные не имели отклонений в клиническом состоянии, адекватно реагировали на внешние раздражители, охотно принимали корм и воду. Изменений со стороны кожного, волосяного покрова и цвета слизистых оболочек у животных не отмечено. Исходя из этого, основной опыт по определению острой токсичности проводили методом «тест накопления», т.е. препарат вводили в дозе 5,0 см3 трехкратно с интервалом 2 часа. По принципу аналогов сформировали 2 группы (опытная и контрольная) белых крыс по 7 голов в каждой. Препарат вводили животным опытной группы внутрижелудочно при помощи шприца с металлическим
зондом. Поение и кормление проводили не ранее, чем через 3 часа после дачи препарата. Крысы второй группы служили контролем и получали изотонический раствор натрия хлорида в дозе 5,0 см3 . Наблюдение за животными вели в течение 14 дней, учитывая общее состояние, поведение, прием корма и воды, регистрируя сроки их гибели.
Изучение отдаленных последствий противомаститного препарата «Белмаст» (эмбриотоксическое и тератогенное действие) проводили в опытах на 40 самках крыс, 40 самках белых мышей и 5 крольчихах. Для этого вечером в клетку с самками помещали самцов, а утром на следующий день исследовали мазок из влагалища. День обнаружения спермиев в мазке крыс (или влагалищной пробки у мышей) считали началом беременности.
В опыте по определению токсичности для эмбрионов крыс и мышей препарат вводили самкам (n=9) внутрижелудочно в дозе 0,5 мл/кг на протяжении всего срока беременности, а контрольным (n=9) – дистиллированную воду в той же дозе. Для выявления поражающего действия препарата провели убой трех самок на 5-й день беременности (период имплантации) и подсчитали количество желтых тел, плодов, расположение их в рогах матки. Учитывали эмбриональную смертность, резорбцию плодов. Трех самкок в группах усыпляли на 10-й день беременности (период органогенеза) и отмечали развитие эмбрионов по тем же критериям. Оставшихся животных усыпляли на 19-20-й день беременности и учитывали количество желтых тел, аномалии развития эмбрионов, плодов, равномерность расположения плодов в матке.
Определение раздражающего действия препарата на молочную железу проведено в РУСП «ППР Правда» Минского района на 10 здоровых коровах, которые дали отрицательную реакцию на скрытый мастит при постановке беломастиновой пробы и метода отстаивания, в сравнении с базовым препаратом (1%-ный раствор диоксидина согласно инструкции). Опытным коровам (5 голов) интерцистернально вводили
«Белмаст» в дозе 15 см3 четырехкратно с интервалом 24 часа, а контрольным (5 голов) – 1%-ный раствор диоксидина.
Для определения стабильности использовали препарат трех серий. Все образцы были расфасованы в стеклянные флаконы емкостью 100,0 см3 , закатаны алюминиевыми колпачками и хранились при температуре +2 – +180 С. Физико-химические характеристики препарата проверялись согласно проекту ТУ BY600049853.227–2013 сразу после приготовления, через 6, 9, 12 и 18 месяцев.
Для производства препарата использованы субстанции, срок годности которых составил не менее 2 лет. Определение подлинности диоксидина, хлоргексидина биглюконата и преднизолона осуществляли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). На хроматограммах время выхода пиков раствора препарата совпадали со временами выхода пиков рабочих стандартных растворов диоксидина, хлоргексидина биглюконата и преднизолона соответственно. Отличие указанных величин не превышало 3%.
Диоксидин и хлоргексидин биглюконат в биологических жидкостях определяли путем измерения оптической плотности на спектрофотометре UV/VIS SP 800 (Meterech) с использованием кювет толщиной слоя 10 мм при длине волны света для диоксидина – 375 нм и хлоргексидина биглюконата – 253 нм, используя в качестве раствора сравнения сыворотку молока или водный экстракт мяса без применения препарата [130].
Биологическую ценность и безвредность молока и мяса после применения препарата «Белмаст» исследовали согласно «Методическим указаниям по токсико-биологической оценке мяса, мясных продуктов и молока с использованием инфузорий Тетрахимена пириформис», утвержденной ГУВ МСХП РБ, 1997 г. [129].
Ингибирующие вещества в молоке коров определяли с помощью индикатора резазурина согласно ГОСТ 23454-79 [130]. Сущность метода заключается в том, что происходит
