эпизоотологического и иммунологического мониторинга РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» согласно «Методическим указаниям по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени сельскохозяйственных животных», утв. ГУВ МСХ и П РБ № 102-5/1112 от 24.05.2008 г. [128]. С этой целью сформировали две группы животных, больных клиническим и субклиническим маститами, которые не подвергались медикаментозным обработкам.
Видовую идентификацию микроорганизмов проводили биохимическим анализатором бактерий Vitek «Biomeriex». Пробы паренхимного молока брали после окончания доения с соблюдением правил асептики. Пробы доставляли в лабораторию в течение 3-4 часов с момента взятия в специальных термоконтейнерах, обеспечивающих температуру не выше +8–+10°С.
Для выделение бактерий группы кишечной палочки проводили на среде Эндо и среде Кода. Посевы ставили в термостат при температуре +37ºС и просматривали через 18-24 ч. Изменение цвета среды Кода из фиолетового на зеленый свидетельствовало о наличии бактерий группы кишечной палочки.
Идентификацию бактерий рода эшерихий проводили путем посева на среду Симмонса (цитратный тест) и пептонную воду (для реакции на индолообразование). На среде Симмонса эшерихии не растут и, следовательно, не изменяют цвета. При определении индолообразования покраснение фильтровальной бумажки, пропитанной реактивом Эрлиха-Бомэ, находящейся в пробирках с посевами на пептонной воде, свидетельствовало о наличии эшерихий. В классической реакции наблюдали образование розового (индольного) кольца на границе двух жидкостей эфирной вытяжки и реактива Эрлиха-Бомэ. Посевом со среды Кода на среду Олькеницкого идентифицировали эшерихии, бактерии рода энтеробактер от сальмонелл и протея. Посев на среду Олькеницкого в пробирках проводили петлей по
поверхности скоса среды и внутрь столбика. Посевы культивировали в термостате при +37°С в течение 24 часов. Изменение цвета (глюкоза +, лактоза +) столбика и скоса среды из красного в желтый при отсутствии почернения внутри столбика свидетельствовало о росте бактерий из рода эшерихии. Изменение скоса среды и столбика в малиновый цвет (мочевина +) и почернение внутри столбика (сероводород +) указывало на рост протея. Изменение цвета среды в красный цвет, столбика – в желтый и почернение внутри него указывало на рост сальмонелл.
Для выделения золотистого стафилококка использовали укоренный метод, который основан на применении элективной, дифференциально-диагностической среды ДНК-новокаиноваго агара. Элективные свойства данной среды обусловлены ингибирующим действием на постороннюю микрофлору новокаина, дифференцирующие – добавлением натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты, которая позволяет идентифицировать золотистый стафилококк по его дезоксирибонуклеазной активности. Для этого засеянные чашки поместили в термостат и инкубировали при температуре +37ºС в течение 24 часов. На ДНК-новокаиновом агаре золотистый стафилококк растет в виде круглых колоний с ровными краями. ДНК- азную активность определяли с помощью 1Н раствора соляной кислоты. Чашки с кислотой выдерживали 2 минуты. После образования просветлений вокруг колоний кислоту слили. После этого чашки просматривали в проходящем свете. Обнаружение зон просветления с ярко выраженными границами указывает на наличие золотистого стафилококка.
Стрептококки выделяли путем посева на среду Карташовой, на которую высевали 1 мл исследуемого молока. Затем посевы помещали в термостат при температуре +37ºС. После 24 часов инкубирования из пробирок с измененным цветом среды готовили мазки и окрашивали по Граму. Дифференциацию стрептококков от стафилококков проводили путем определения каталазной активности. Стрептококки – каталазоотрицательные,
не содержат фермент каталазу. Для определения каталазной активности исследуемую культуру растворили в 10%-ной перекиси водорода и наблюдали за выделением газа, в отличие от стафилококков, у стрептококков он не образуется.
Для определения гемолитических свойств стафилококков использовали кровяной агар.
Патогенные свойства выделенных микроорганизмов определяли путем постановки биологической пробы на 3 белых мышах. Для этого их заражали внутрибрюшинно 1 млрд. суточной культурой в дозе 1,0 см3 , при этом за животными вели наблюдение в течение 3 суток.
Для уточнения диагноза на мастит ставили пробу отстаивания: в пробирки надаивали по 10,0 см3 молока, закрывали пробкой, ставили в холодильник при температуре +4– +6ºС на 16-18 часов и учитывали образование осадка и изменение цвета молока.
Для подсчета количества соматических клеток использовали метод Прескотта-Брида и анализатор вискозиметрический «Соматос-М» согласно инструкции по работе с прибором.
Массовую долю жира и белка в молоке, а также плотность измеряли на анализаторе качества молока «Лактан 1-4» 220/242 согласно инструкции по работе с прибором.
Кислотность молока определяли титрометрическим методом. Для этого в коническую колбу наливали 10 см3 молока, 20 см3 дистиллированной воды и 3 капли 1%-ного спиртового раствора фенолфталеина. Содержимое колбы тщательно перемешивали, из бюретки добавляли в колбу каплями 0,1 Н раствор щелочи до появления слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение минуты. Количество миллилитров потраченной на титрование щёлочи, умноженное на 10, является градусом титруемой кислотности молока.
Исследования по изучению вопросов патогенеза клинического и субклинического маститов проводили в условиях РУСП «ППР Правда» Минского района. С этой целью
