разливают на предметные стекла или стекла большего размера (12х19) и микроскопируют. Этот метод широко применяется в ветеринарных лабораториях для диагностики трематодозов у жвачных животных. Вместе с тем, она трудоемка и по диагностической эффективности значительно уступает специальным флотационным и комбинированным методам гельминтоовоскопии.
Флотационные методы. Все методы флотации (от англ. flotathion – всплывание) основаны на единой физической закономерности, обеспечивающей всплытие яиц гельминтов в насыщенных растворах солей. Для этого рекомендуются растворы различных солей, но предпочтительнее – дешевых и повсеместно доступных. Отдельные методы флотации называются по именам авторов, впервые предложивших ту или иную соль для приготовления флотационной жидкости.
Метод Фюллеборна. Для исследования по этому методу нужен насыщенный раствор поваренной соли, который готовят путем кипячения 400-420 г соли в 1 л воды.
Пробу фекалий весом 3–5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50–100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или один слой марлевой салфетки в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40–60 мин, затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микрокопирования.
Этот метод в отечественной лабораторной практике может применяться для диагностики аскариоза, неоаскариоза, параскариоза, стронгилятозов, стронгилоидозов, мониезиоза, тизанезиоза, авителлиноза жвачных.
Плотность насыщенного раствора поваренной соли составляет 1,18 – 1,20, тогда как удельный вес оплодотворенных яиц аскарисов равен 1,10 – 1,14, у неоплодотворенных – 1,26, а трихоцефал – 1,16–1,22. Поэтому при использовании насыщенного раствора поваренной соли всплывают только часть яиц аскарисов и трихоцефал, по этой причине диагностическая эффективность данной методики невысокая. Кроме того, раствор на предметном стекле быстро кристаллизуется.
Метод Калантарян – это видоизмененный метод Фюллеборна. Вместо насыщенного раствора поваренной соли применяют раствор нитрата натрия (NaNO3) с удельным весом 1,38. Для приготовления раствора 1 кг нитрата натрия растворяют в 1 л кипящей воды. Метод простой, дешевый, а эффективность выше метода Фюллеборна. Нитрат натрия как минеральное удобрение доступен для любого ветеринарного учреждения. Этот метод применяют в основном для диагностики нематодозов, в частности аскаридатозов, трихоцефалезов и др., а также для диагностики цестодозов и некоторых трематодозов (дикроцелиоз).
Метод Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой. Технология этого метода такая же, как и метода Фюллеборна, но в качестве флотационной жидкости применяется нитрат аммония (техническая гранулированная аммиачная селитра), используемый для удобрений. При приготовлении флотационной жидкости в 1 л кипящей воды растворяют 1,5 кг селитры. Плотность раствора – 1,30. Поверхностную пленку можно микроскопировать через 10 мин.
В лабораторной практике эта методика широко применяется для выявления яиц аскарисов, трихоцефалюсов, эзофагостом и метастронгилюсов свиней, неоаскарисов, стронгилят пищеварительного тракта, трихоцефалюсов, авителлинид жвачных, параскарисов и стронгилят лошадей, токсокар и токсаскарисов собак, кошек, песцов, лисиц и других плотоядных, стронгилоидесов животных разных видов, аскарисов и гетеракисов кур.
Недостатком этого метода является то, что флотационная жидкость из аммиачной селитры не способна поднять тяжелые яйца трематод (фасциол, дикроцелиумов, описторхисов и др.), т.к. удельный вес этих яиц больше чем 1,3, Кроме того раствор быстро кристаллизуется.
Метод Котельникова-Хренова с нитратом свинца . Техника проведения этого метода аналогична методу Фюллеборна. В качестве флотационной жидкости при этом используется насыщенный раствор нитрата свинца (Pb(NO3)2) из расчета 0,65 кг на 1 л воды. Плотность этой жидкости достигает 1,5. Применение такого флотационного раствора дает возможность диагностировать широкий круг возбудителей гельминтозов и с его помощью легко выявляются и тяжёлые яйца фасциол (удельный вес 1,31–1,35, парамфистом (1,33–1,38), дикроцелий (1,3) и ещё быстрее яйца с меньшим удельным весом, аскарисов, стронгилят, метастронгилюсов, трихоцефал, стронгилоидесов, аноплоцефал, мониезий), тениат, скребней (макроканторинхусов), а также капсулы тизаниезий.
Недостатком данной методики является дороговизна нитрата свинца. Вместе с тем, при работе c таким раствором петли покрываются белым налетом (нитрат свинца входит в химическую реакцию с металлами), яйца трематод сильно деформируются, что создает определенные трудности при исследовании. Кроме того, используемый препарат является солью тяжелого металла – свинца, который является высокоядовитым веществом, что создает опасность для здоровья исследователей и окружающих, отработанные растворы данного препарата запрещено сливать в канализационные стоки. По совокупности этих причин, указанная методика не нашла широкого применения на практике.
В качестве флотационных жидкостей авторами также были предложены растворы из следующих солей: тиосульфата натрия – 1,75 кг препарата на 1л воды, ρ–1,40 (метод Болховитинова), карбоната калия – 0,6 кг на 1 л воды, ρ–1,41 (метод Вольфа). Однако эти методы по тем или иным причинам также не нашли широкого применения на практике.
Комбинированные методы. Эти методы основаны на комбинации совершенно противоположных приемов обработки проб фекалий, то есть седиментации и флотации. Поэтому их называют седиментационнофлотационными. Несмотря на усложнение приемов обработки проб эти методы являются более эффективными, на исследования расходуются значительно меньше флотационной жидкости, следовательно, они более экономичны.
Благодаря комбинации противоположных приемов достигается обогащение осадка и поверхностной пленки яйцами гельминтов и удаление излишних посторонних частиц взвеси, которые мешают микрокопированию. Применение двойного центрифугирования взвеси вначале с водой, а затем с флотационным раствором способствует в первом случае быстрому осаждению яиц в результате воздействия центростремительной силы, а во втором – всплыванию их за счёт воздействия центробежной силы.
Впервые комбинированный метод гельминтоовоскопии был предложен американским паразитологом Дарлингом (1911). В последующем на основе этого метода были разработаны различные методики и модификации.
Метод Дарлинга. Пробу фекалий весом 3–5 г помещают в химический стаканчик и тщательно размешивают в 18–20 мл воды, процеживают через сито в другой стаканчик, полученную жидкость переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 1–2 мин при 3000 об / мин. Затем надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют флотационную жидкость, состоящую из равных частей глицерина и насыщенного раствора хлорида натрия. Плотность такой жидкости равна 1,205 при температуре 18ºС. Содержимое взбалтывают и вновь центрифугируют в том же режиме. При этом яйца всплывают, их снимают проволочной петлей с поверхностной пленки и исследуют под микроскопом на предметном стекле. Этот метод применяют для диагностики аскаридатозов и других нематодозов у животных. Метод Щербовича . В качестве флотационных жидкостей автором предложены три раствора из насыщенных солей: натрия нитрата, магния сульфата и натрия тиосульфата.
Пробу фекалий величиной с грецкий орех кладут в стакан, добавляют 40 – 60 мл воды и тщательно размешивают до появления равномерной взвеси. При постоянном помешивании взвесь процеживают через металлическое сито или марлю в чистый стакан. После 5 минутного отстаивания надосадочную жидкость сливают. На дне оставляют такое количество взвеси, которое бы вместилось в центрифужную пробирку, и центрифугируют 1-2 мин при 3000 об / мин., после чего, всю жидкость до осадка сливают, а к осадку добавляют необходимый флотационный раствор. Осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют 1–2 мин при 1500 об / мин. После этого металлической
