В зависимости от цели гельминтокопроскопическую диагностику проводят для установления экстенсивности и интенсивности инвазии, а также для дифференциации самих паразитов. Однако необходимо помнить о том, что яйца и личинки в пробах фекалий можно обнаруживать только в том случае, если гельминты достигли половозрелой стадии.
Копроскопическую диагностику гельминтозов необходимо применять с учетом эпизоотологических данных, возрастных особенностей и с учетом сезона года. Например, крупный и мелкий рогатый скот в средней полосе России заражаются адолескариями фасциол в основном в августе и сентябре. Половозрелыми эти гельминты становятся в организме животных через 3-4 месяца, следовательно, их яйца начинают выделяться в ноябре и декабре.
Гельминтоскопию применяют для обнаружения в исследуемом материале половозрелых и юных гельминтов или их фрагментов. Гельминты нередко отходят сами. А у многих видов цестод систематически отторгаются членики (проглоттиды) и фрагменты, стробилы с яйцами и выделяются наружу. Исследуя фекалии животных невооруженным глазом можно заметить гельминтов или их фрагменты и членики, а иногда приходится использовать специальные методы исследования.
Особое значение гельминтоскопия имеет при цестодозах, а также при диагностической дегельминтизации. С целью обнаружения члеников имагинальных цестод осматривают свежие фекалии. У овец, северных оленей, телят, лошадей члеников цестод нетрудно заметить при обычном осмотре. В фекалиях ягнят и овец рано утром или после дневного отдыха находят членики мониезий, тизаниезий, аветеллин и стилезий. У плотоядных животных членики цестод из подотряда тениата способны активно передвигаться во внешней среде. Поэтому необходимо осматривать свежие фекалии.
Весьма характерны по форме членики огуречного цепня ( Dipylidium caninum ), паразитирующего у собак, лисиц, песцов, енотовидных собак, кошек и других плотоядных, а также у человека. Членики этого паразита внешне напоминают огуречные семена, их легко заметить в фекалиях, выделенных инвазированными животными.
Из специальных методов гельминтоскопии наиболее простыми и приемлемыми являются методы последовательного промывания и отсеивания.
Метод последовательного промывания. При проведении этого метода собирают свежие порции фекалий от животных, помещают в сосуд, заливают водой в соотношении 1:5 или 1:10 и тщательно перемешивают. Взвесь оставляют на 5 мин для осаждения. Затем верхний слой сливают до осадка, после чего снова заливают водой и повторяют эти операции до тех пор, пока жидкость над осадком не будет прозрачной. После надосадочную жидкость сливают последний раз, а осадок помещают в
кювету или чашку Петри для исследований под лупой. Так как одни гельминты хорошо видны на белом фоне, а другие на черном, то для более полной выборки гельминтов чашку Петри ставят то на белую, то на черную бумагу. Гельминтов выбирают препаровальной иглой или кисточкой, а затем микроскопируют для установления вида.
Метод отсеивания . При этом методе используют набор из 2–4 металлических сит с отверстиями убывающего диаметра. Струей воды промывают фекалий, при этом частицы фекалии уносятся водой, а гельминты в зависимости от величины задерживаются на разных ситах. Затем гельминтов выбирают и исследуют. Этим методом можно собирать гельминтов разной величины.
Гельминтоовоскопия (от латинского ovum – яйцо, греческого skopeo – смотрю) объединяет группу методов исследования, с помощью которых выявляют яйца возбудителей гельминтозов.
Предложено много методов овоскопии, но не все они заслуживают практического применения. Одни методы сложны по технике выполнения, при исследовании другими требуется значительное время, третьи – малоэффективны. В данном пособии мы приведем только наиболее эффективные методы гельминтоовоскопии.
Удельный вес яиц тяжелее обычной воды, вследствие этого яйца гельминтов, как более тяжелые частички вымываются из фекалий водой и оседают на дно сосуда с различной скоростью, в зависимости от удельного веса. Быстрее всего оседают яйца более крупного размера. В растворах же солей высокого удельного веса яйца гельминтов наоборот всплывают (явление флотации) в верхний слой и концентрируются в нем.
На использовании этих физических закономерностей основана технология всех современных методов гельминтоовоскопии, которые подразделяются на три группы: осаждения, флотации и комбинированная. Методы осаждения (седиментации) основаны на принципе осаждения взвешенных в жидкости яиц гельминтов, промывки осадка и исследования его. Эти методы применяются в основном для диагностики тех гельминтозов, возбудители которых выделяют яйца с высоким удельным весом (фасциолез, дикроцелиоз, описторхоз и др.). Методы осаждения менее эффективны и более трудоемки, чем флотации. Это связано со сложностью отыскания яиц гельминтов в осадке взвеси.
Метод последовательных смывов. Пробу фекалий 3-5г кладут в стакан, вливают небольшое количество воды и размешивают палочкой или пинцетом до получения жидкой кашицеобразной массы, затем добавляют воду порциями до объема 50 мл при постоянном размешивании. После взвесь процеживают через металлическое сито в другой стакан, в нем отстаивают в течение 5–10 мин. Затем верхний слой жидкости над осадком сливают, а к осадку добавляют новую порцию воды и вновь отстаивают в течение 5–10 мин. Описанная процедура повторяется до тех пор, пока вода не станет прозрачной. Ее в последний раз сливают, а осадок (около 5 мл)
разливают на предметные стекла или стекла большего размера (12х19) и микроскопируют. Этот метод широко применяется в ветеринарных лабораториях для диагностики трематодозов у жвачных животных. Вместе с тем, она трудоемка и по диагностической эффективности значительно уступает специальным флотационным и комбинированным методам гельминтоовоскопии.
Флотационные методы. Все методы флотации (от англ. flotathion – всплывание) основаны на единой физической закономерности, обеспечивающей всплытие яиц гельминтов в насыщенных растворах солей. Для этого рекомендуются растворы различных солей, но предпочтительнее – дешевых и повсеместно доступных. Отдельные методы флотации называются по именам авторов, впервые предложивших ту или иную соль для приготовления флотационной жидкости.
Метод Фюллеборна. Для исследования по этому методу нужен насыщенный раствор поваренной соли, который готовят путем кипячения 400-420 г соли в 1 л воды.
Пробу фекалий весом 3–5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50–100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или один слой марлевой салфетки в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40–60 мин, затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микрокопирования.
Этот метод в отечественной лабораторной практике может применяться для диагностики аскариоза, неоаскариоза, параскариоза, стронгилятозов, стронгилоидозов, мониезиоза, тизанезиоза, авителлиноза жвачных.
Плотность насыщенного раствора поваренной соли составляет 1,18 – 1,20, тогда как удельный вес оплодотворенных яиц аскарисов равен 1,10 – 1,14, у неоплодотворенных – 1,26, а трихоцефал – 1,16–1,22. Поэтому при использовании насыщенного раствора поваренной соли всплывают только часть яиц аскарисов и трихоцефал, по этой причине диагностическая эффективность данной методики невысокая. Кроме того, раствор на предметном стекле быстро кристаллизуется.
Метод Калантарян – это видоизмененный метод Фюллеборна. Вместо насыщенного раствора поваренной соли применяют раствор нитрата натрия (NaNO3) с удельным весом 1,38. Для приготовления раствора 1 кг нитрата натрия растворяют в 1 л кипящей воды. Метод простой, дешевый, а эффективность выше метода Фюллеборна. Нитрат натрия как минеральное удобрение доступен для любого ветеринарного учреждения. Этот метод применяют в основном для диагностики нематодозов, в частности аскаридатозов, трихоцефалезов и др., а также для диагностики цестодозов и некоторых трематодозов (дикроцелиоз).
