Метод Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой. Технология этого метода такая же, как и метода Фюллеборна, но в качестве флотационной жидкости применяется нитрат аммония (техническая гранулированная аммиачная селитра), используемый для удобрений. При приготовлении флотационной жидкости в 1 л кипящей воды растворяют 1,5 кг селитры. Плотность раствора – 1,30. Поверхностную пленку можно микроскопировать через 10 мин.
В лабораторной практике эта методика широко применяется для выявления яиц аскарисов, трихоцефалюсов, эзофагостом и метастронгилюсов свиней, неоаскарисов, стронгилят пищеварительного тракта, трихоцефалюсов, авителлинид жвачных, параскарисов и стронгилят лошадей, токсокар и токсаскарисов собак, кошек, песцов, лисиц и других плотоядных, стронгилоидесов животных разных видов, аскарисов и гетеракисов кур.
Недостатком этого метода является то, что флотационная жидкость из аммиачной селитры не способна поднять тяжелые яйца трематод (фасциол, дикроцелиумов, описторхисов и др.), т.к. удельный вес этих яиц больше чем 1,3, Кроме того раствор быстро кристаллизуется.
Метод Котельникова-Хренова с нитратом свинца . Техника проведения этого метода аналогична методу Фюллеборна. В качестве флотационной жидкости при этом используется насыщенный раствор нитрата свинца (Pb(NO3)2) из расчета 0,65 кг на 1 л воды. Плотность этой жидкости достигает 1,5. Применение такого флотационного раствора дает возможность диагностировать широкий круг возбудителей гельминтозов и с его помощью легко выявляются и тяжёлые яйца фасциол (удельный вес 1,31–1,35, парамфистом (1,33–1,38), дикроцелий (1,3) и ещё быстрее яйца с меньшим удельным весом, аскарисов, стронгилят, метастронгилюсов, трихоцефал, стронгилоидесов, аноплоцефал, мониезий), тениат, скребней (макроканторинхусов), а также капсулы тизаниезий.
Недостатком данной методики является дороговизна нитрата свинца. Вместе с тем, при работе c таким раствором петли покрываются белым налетом (нитрат свинца входит в химическую реакцию с металлами), яйца трематод сильно деформируются, что создает определенные трудности при исследовании. Кроме того, используемый препарат является солью тяжелого металла – свинца, который является высокоядовитым веществом, что создает опасность для здоровья исследователей и окружающих, отработанные растворы данного препарата запрещено сливать в канализационные стоки. По совокупности этих причин, указанная методика не нашла широкого применения на практике.
В качестве флотационных жидкостей авторами также были предложены растворы из следующих солей: тиосульфата натрия – 1,75 кг препарата на 1л воды, ρ–1,40 (метод Болховитинова), карбоната калия – 0,6 кг на 1 л воды, ρ–1,41 (метод Вольфа). Однако эти методы по тем или иным причинам также не нашли широкого применения на практике.
Комбинированные методы. Эти методы основаны на комбинации совершенно противоположных приемов обработки проб фекалий, то есть седиментации и флотации. Поэтому их называют седиментационнофлотационными. Несмотря на усложнение приемов обработки проб эти методы являются более эффективными, на исследования расходуются значительно меньше флотационной жидкости, следовательно, они более экономичны.
Благодаря комбинации противоположных приемов достигается обогащение осадка и поверхностной пленки яйцами гельминтов и удаление излишних посторонних частиц взвеси, которые мешают микрокопированию. Применение двойного центрифугирования взвеси вначале с водой, а затем с флотационным раствором способствует в первом случае быстрому осаждению яиц в результате воздействия центростремительной силы, а во втором – всплыванию их за счёт воздействия центробежной силы.
Впервые комбинированный метод гельминтоовоскопии был предложен американским паразитологом Дарлингом (1911). В последующем на основе этого метода были разработаны различные методики и модификации.
Метод Дарлинга. Пробу фекалий весом 3–5 г помещают в химический стаканчик и тщательно размешивают в 18–20 мл воды, процеживают через сито в другой стаканчик, полученную жидкость переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 1–2 мин при 3000 об / мин. Затем надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют флотационную жидкость, состоящую из равных частей глицерина и насыщенного раствора хлорида натрия. Плотность такой жидкости равна 1,205 при температуре 18ºС. Содержимое взбалтывают и вновь центрифугируют в том же режиме. При этом яйца всплывают, их снимают проволочной петлей с поверхностной пленки и исследуют под микроскопом на предметном стекле. Этот метод применяют для диагностики аскаридатозов и других нематодозов у животных. Метод Щербовича . В качестве флотационных жидкостей автором предложены три раствора из насыщенных солей: натрия нитрата, магния сульфата и натрия тиосульфата.
Пробу фекалий величиной с грецкий орех кладут в стакан, добавляют 40 – 60 мл воды и тщательно размешивают до появления равномерной взвеси. При постоянном помешивании взвесь процеживают через металлическое сито или марлю в чистый стакан. После 5 минутного отстаивания надосадочную жидкость сливают. На дне оставляют такое количество взвеси, которое бы вместилось в центрифужную пробирку, и центрифугируют 1-2 мин при 3000 об / мин., после чего, всю жидкость до осадка сливают, а к осадку добавляют необходимый флотационный раствор. Осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют 1–2 мин при 1500 об / мин. После этого металлической
петлей снимают поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.
При диагностике метастронгилеза свиней применяют насыщенный раствор магния сульфата (0,92 кг MgSO4 на 1 л воды, ρ–1,28). При этом выявляются яйца и других нематод, в частности, трихоцефал, аскарисов, стронгилят пищеварительного тракта различных животных.
Насыщенные растворы натрия тиосульфата (1,75кг Na2S2O3 на 1 л воды, ρ–1,38) рекомендуются для диагностики макраканторинхоза свиней, а также других гельминтозов животных. Методику можно применять так же и для диагностики тениидозов собак, спируратозов (тетрамероза, стрептокароза, эхинуроза и полиморфоза) водоплавающих птиц, используя эти растворы.
Недостатком этого метода со всеми тремя флотационными жидкостями является то, что с его помощью не удается диагностировать тяжелые яйца трематод, в частности описторхисов, фасциол и парамфистом.
Метод Котельникова-Вареничева. Яйца описторхисов очень мелкие и тяжелые (удельный вес 1,38–1,46). В связи с этим обычные флотационные растворы непригодны. В качестве флотационной жидкости в этой методике применяют насыщенный раствор хлорида цинка (2 кг ZnCl2 на 1л воды) с плотностью 1,82. Техника проведения этого метода аналогична методу Щербовича.
Метод предложен для диагностики описторхоза плотоядных, но он пригоден и для гельминтоовоскопии других трематод, а также нематод и цестод у животных.
Недостатком этого метода является то, что из-за большого удельного веса флотационной жидкости (1,82) вместе с яйцами гельминтов поднимаются на поверхность после центрифугирования и не переваренные частицы корма, что затрудняет просмотр материала и в конечном итоге влияет на диагностическую эффективность этой методики.
Разработано также много других модификаций комбинированного метода гельминтоовоскопии. В качестве флотационной жидкости предложены насыщенные растворы из следующих солей: нитрата аммония – 1,5 кг NH4NO3 на 1л воды, ρ–1,30 (метод Котельникова – Хренова), калия карбоната – 0,6 кг K2CO3 на 1л воды, ρ–1,41 (метод Вольфа), цинка сульфата – 0,45 кг ZnSO4 на 1л воды, ρ–1,39 (метод Вишняускаса). Одни из перечисленных методов сложны по технике выполнения, другие малоэффективны при трематодозах. По этой причине они также не нашли широкого применения на практике.
Модифицированный метод (Латыпов Д.Г. и др., 2002). Разработана новая модификация комбинированного метода гельминтоовоскопии. Техника её проведения аналогична методу Щербовича. В качестве флотационной жидкости применяется смесь из трех ингредиентов – насыщенных солей цинка хлорида, натрия хлорида и сахара.
