Вначале готовят отдельно насыщенный раствор цинка хлорида (2кг ZnCl2 на 1л воды, ρ–1,82), насыщенный раствор натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л воды, ρ–1,19), и сахара (1,67 кг C12H22O11 на 1л воды, ρ–1,28). Для получения комбинированной флотационной жидкости смешивают эти растворы в соотношении 2:1:1. Плотность такого раствора составляет 1,53.
Модифицированный комбинированный гельминтоовоскопический метод является универсальным и позволяет диагностировать одновременно яйца нематод, цестод и трематод. Диагностическая эффективность метода высокая. По результативности он превосходит все вышеперечисленные методы гельминтоовоскопии животных. Поверхностная пленка после центрифугирования с флотационной жидкостью остается чистой, нанесенные капли не подвергаются кристаллизации в течение 3-х часов.
Экспресс – метод групповой гельминтоовоскопии (Латыпов Д.Г. и др., 2007; на метод получен патент на изобретение). С увеличением объема диагностических исследований существующие лабораторные методы распознавания гельминтозных заболеваний, основанные на ручном труде не удовлетворяют практические запросы.
В течение рабочего времени гельминтоовоскопически можно исследовать не более 40–50 проб (в среднем 10 мин. на пробу). Вместе с тем, из-за низкой диагностической эффективности гельминтоовоскопических методов при трематодозах (фасциолез, дикроцелиоз, парамфистоматоз и др.) не представляется возможность индивидуальной дегельминтизации, т. к. большинство инвазированных животных остаются не выявленными. По этой причине, при обнаружении в стадах зараженных животных в практических условиях рекомендуется применять групповую дегельминтизацию.
Исходя из вышеизложенного, экспресс – метод групповой гельминтоовоскопии животных, как позволяющий в минимальном отрезке времени определить паразитологическую ситуацию в стадах или отарах заслуживает особого внимания практиков. Эта методика удобна также при контроле диагностической эффективности антгельминтиков, особенно когда у животных встречаются ассоциативные формы инвазии. Экспресс метод проводится по следующей схеме:
С каждой пробы фекалий (от 10 до 100 проб) с помощью пинцета кладут примерно по 1г фекалий в банку емкостью 2 л. Затем взятые пробы заливают небольшим количеством воды и тщательно размешивают пинцетом или палочкой, при постоянном помешивании добавляют воду порциями до объема 2л. Взвесь фильтруют через металлическое сито с размером ячеек 0,5 х0,5 мм в другую банку емкостью 3 л, а оставшийся на сите осадок промывают добавлением 200–250 мл воды. После взвесь снова фильтруют через сито с размером ячеек 0,25х0,25 мм в чистую банку емкостью 3 л. Оставшийся на сите осадок повторно промывают добавлением 200–250 мл воды. Двукратно отфильтрованную взвесь
отстаивают в течение 10 мин., надосадочную жидкость осторожно сливают, оставляя над осадком лишь небольшое её количество. Таким образом, осадок промывают 3–5 раз обычным сливом воды. После последнего промывания примерно 50 мл осадка наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 2 мин при 1500 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют флотационную смесь, состоящую из трех ингредиентов (насыщенных солей цинка хлорида, натрия хлорида и сахара в соотношении 2:1:1).
Техника изготовления комбинированной флотационной жидкости аналогична, как и при модифицированном методе. Осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют в том же режиме. После центрифугирования пипеткой осторожно доливают флотационную жидкость в центрифужные пробирки, чтобы получился выпуклый мениск, и сверху покрывают его предметным стеклом на 5 мин. Затем стекло быстро снимают, чтобы жидкость не стекала, повертывают соприкасающей стороной кверху и микроскопируют.
Гельминтоларвоскопия. Ларвоскопия (от лат. larva – личинка, греч, skopeo – смотрю) – совокупность приемов исследований проб фекалий, тканей и органов с целью выявления личинок гельминтов и возбудителей болезни. Гельминтоларвоскопию применяют для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидозов жвачных, стронгилятозов и стронгилоидоза у сельскохозяйственных животных.
Гельминтоларвоскопия при диктиокаулезе. В теплое время года в фекалиях быстро развиваются личинки стронгилят пищеварительного тракта, что затрудняет исследование материала. Поэтому пробы фекалий после взятия сразу следует направить в лабораторию.
Для дифференциации личинок диктиокаулюсов предложена методика окраски. К осадку в пробирке или на стекло добавляют 1–2 капли 0,1%ного водного раствора метиленового синего, встряхивают и через 20–30 с. микроскопируют. Личинки диктиокаулюсов овец окрашиваются в ярко – сиреневый, а личинки диктиокаулюсов телят в светло – сиреневый цвет. Личинки других нематод остаются неокрашенными, частицы корма окрашиваются в зеленый цвет, а жидкость – в голубоватый.
Личинки диктиокаулюсов овец располагаются в самых поверхностных слоях фекальных шариков. Поэтому разрушать их структуру при закладке проб не следует. Личинки протостронгилюсов, мюллерий, напротив, в шариках фекалий овец распределяются равномерно, на поверхности их находится незначительная часть. Поэтому при исследовании на указанные гельминтозы предварительно шарики фекалий следует разрушать. При этом эффективность исследований увеличивается в 10 раз.
Метод Вайда. Эта методика очень проста и применяется для диагностики диктиокаулеза жвачных, протостронгилеза, мюллериоза и цистокаулеза овец и коз.
На часовое стекло, бактериологические чашки или предметное стекло, кладут несколько шариков свежевыделенных фекалий овец и коз и добавляют небольшое количество воды (температура 38–40º С). Если шарики помещают на предметное стекло, то достаточно несколько капель воды. Через 30–40 мин шарики удаляют, оставшуюся жидкость на стекле микроскопируют на наличие личинок нематод.
Метод Бермана – Орлова. Эта методика наиболее широко распространена и несложна по технике выполнения. Для исследования нужно иметь металлические или пластмассовые воронки (с верхним диаметром 10 см), маленькие гельминтологические пробирки (5–8 см высотой и 0,8–1 см диаметром), резиновые трубки (диаметром 0,7–0,8 см), штатив для воронок и зажимы.
Метод основан на следующем: личинки в теплой влажной среде активно выбираются из фекалий и, попав в воду, падают на дно.
Фекалии (5–10 г) кладут на металлическое сито или заворачивают в марлю и помещают в воронку. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10 см с зажимом, в свободный конец трубки вставляют пробирку. Собранный в таком виде аппарат Бермана ставят в штатив и заполняют теплой водой (40ºС).
Аппарат с пробами от овец и коз оставляют при комнатной температуре на 3-6 час, крупного рогатого скота и лошадей на 12 час. За это время личинки нематод выползают из фекалий в жидкость и опускаются до места перекрытия трубки зажимом. После истечения срока зажимы открывают и наполняют пробирки водой, в которой могут находиться личинки нематод. Пробирки ставят в штатив на 20 мин для осаждения личинок затем воду из пробирок сливают, осадок встряхивают и переносят на предметное стекло, после чего микроскопируют. Личинки нематод подвижны и они легко обнаруживаются.
Метод Шильникова. Автор ещё более упростил методику Бермана. В этой методике используются обыкновенные медицинские градуированные стаканчики (емкостью 30 мл), имеющие форму усеченного конуса и сферическое дно, выпуклость дна направлена кверху. Пробы фекалий завертывают в марлевые салфетки, раскладывают по стаканчикам и заливают теплой водой. Через 8–10 час пробы осторожно вынимают, а жидкость отстаивают 10–15 мин. Затем стаканчики медленно наклоняют, сливают воду до появления мути. Дают отстояться осадку жидкости 5–10 мин. После этого стаканчик медленно наклоняют и из него глазной пипеткой отсасывают верхний прозрачный слой воды до тех пор, пока в пипетку не начнет всасываться осадок на дне. При аккуратном отсасывании на дне стаканчика остается 0,5–1 мл жидкости. Этот осадок каплями наносят на предметное стекло и микроскопируют. Эта методика заслуживает внимание практиков. Она проста и удобна для выполнения в любых условиях.
