Культивирование личинок гельминтов. Личинок культивируют с целью диагностики гельминтозов вообще и дифференциальной диагностики в частности. Культивирование заключается в создании для яиц гельминтов, находящихся в фекалиях, благоприятных условий, чтобы личинки выросли до инвазионной стадии. По их морфологии определяют вид возбудителей болезни.
У домашних и диких травоядных в пищеварительном тракте часто паразитируют нематоды из подотряда стронгилят. Выделяющиеся с фекалиями яйца этих нематод трудно различимы. Поэтому методами овоскопии практически ставят только общий диагноз на стронгилятозы пищеварительного тракта. Дифференциальный диагноз можно поставить по развившимся личинкам.
Метод культивирования личинок. Порцию свежих фекалий животного в количестве 10–30 г помещают в стакан, закрывают стеклом и оставляют в термостате при температуре 25–30º С на 7–10 сут или при комнатной температуре в течении 10–12 сут. По мере подсыхания пробу фекалий слегка увлажняют водой и с истечением указанных сроков пробу фекалий исследуют по методу Бермана или Шильникова. Освобожденный от фекалий стакан заполняют водой, выдерживают 15–20 мин, затем верхний слой осторожно сливают, а осадок исследуют в часовом стекле под микроскопом.
Оборудование для гельминтокопроскопических исследований показано на рисунке 4.
4.4.2. СПЕЦИАЛЬНЫЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование содержимого конъюнктивальных полостей применяют для диагностики телязиоза крупного рогатого скота. Из спринцовки орошают конъюнктивальный мешок животного физиологическим или 3%ным раствором борной кислоты. Вытекающую жидкость собирают в кювет или тазик. Телязии светло – соломенного цвета, довольно крупные (около 2 см), хорошо видны невооруженным глазом.
Исследование крови проводят в основном для обнаружения личинок и яиц гельминтов подотряда филяриата. Для диагностики сетариоза крупного рогатого скота свежую кровь, взятую из яремной вены, консервируют 20%-ным раствором цитрата натрия из расчета 0,3 мл на 10 мл крови. Затем в центрифужную пробирку берут 1 мл крови и добавляют 9 мл дистиллированной воды. После центрифугирования в течение 3–5 мин при 1500 об/мин, осадок исследуют под микроскопом на наличие микросетарий (личинок).
Исследование кожи проводят для обнаружения микроонхоцерков (личинок). У крупного рогатого скота микроонхоцерки локализуются в коже пупка, вымени, холки, уха и конечностей. Для исследования срезают кусочек кожи размером с небольшую горошину (1,5–2 мм²) при помощи ножниц Купера. Пробу помещают в пробирку с 2 мл физраствора и выдерживают при температуре 37º С в течение 1 ч. Затем жидкость центрифугируют в течение 5 мин (1500 об/мин). Надосадочную часть сливают, а осадок микроскопируют..
Иммунологические методы диагностики.
Эти методы имеют большое значение для распознавания ранних стадий гельминтозов, когда яйца или личинки гельминтов еще не выделяются из организма животных во внешнюю среду. При ларвальных тениидозах (эхинококкозе, ценурозах, цистицеркозах и др.) иммунобиологические реакции являются основным методом диагностики.. При гельминтозах с диагностической целью ставят аллергические и серологические реакции.
Из аллергических методов наиболее широкое применение на практике нашла реакция Кацони при эхинококкозе крупного и мелкого рогатого скота. В качестве антигена используют стерильно полученную жидкость из эхинококкового пузыря. Его вводят в дозе 0,2 мл в область шеи или подхвостовой складки (у овец). Через 1–2 час на месте введения у больных эхинококкозом животных возникает реакция в виде припухлости до 2,5 см и более.
Недостатками этой реакции являются групповые реакции у животных больных другими гельминтозами (цистицеркоз овец, ценуроз, кишечные тениидозы). Для повышения специфичности реакции Кацони рекомендуется разбавлять эхинококковую жидкость стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:3.
Аллергическая внутрикожная проба при ценурозе овец и крупного рогатого скота проводится специально приготовленным (по способу Казахского НИВИ) антигеном или жидкостью из пузыря. Антиген в разведении 1:750 вводят в кожу века или подхвостовой складки в дозах: овцам – 0,2 мл, крупному рогатому скоту – 0,5 мл. Можно использовать свежую или консервированную (с добавлением 1% фенола) жидкость из пузыря. Результаты учитывают так же, как и при постановке аллергической пробы при эхинококкозе.
При многих гельминтозах разработаны серологические методы диагностики. Появление иммуноферментных методов диагностики в медицине и ветеринарии сделало реальным использование более очищенных антигенов при различных гельминтозах. Иммуноферментный метод имеет ряд преимуществ по сравнению с РСК, РНГА, РИД и др.
Серьезное внимание уделяют разработке серологических реакций, при которых в качестве антигена используют живых личинок гельминтов, внося их в сыворотку крови больных животных. По этому принципу ставят реакции микропреципитации и сколексопреципитации, в результате которых преципитины концентрируются вокруг ротового (на хоботке или сколексе) и полового отверстий личинок, гельминтов.
Диагностическая дегельминтизация. С целью ранней преимагинальной диагностики гельминтозов, когда возбудители не достигли половой зрелости, небольшой группе животных или птиц (15–20 гол) назначают антигельминтик. Затем их изолируют на 12–24 час и за это время исследуют их фекалии с помощью метода гельминтоскопии. Как
