На часовое стекло, бактериологические чашки или предметное стекло, кладут несколько шариков свежевыделенных фекалий овец и коз и добавляют небольшое количество воды (температура 38–40º С). Если шарики помещают на предметное стекло, то достаточно несколько капель воды. Через 30–40 мин шарики удаляют, оставшуюся жидкость на стекле микроскопируют на наличие личинок нематод.
Метод Бермана – Орлова. Эта методика наиболее широко распространена и несложна по технике выполнения. Для исследования нужно иметь металлические или пластмассовые воронки (с верхним диаметром 10 см), маленькие гельминтологические пробирки (5–8 см высотой и 0,8–1 см диаметром), резиновые трубки (диаметром 0,7–0,8 см), штатив для воронок и зажимы.
Метод основан на следующем: личинки в теплой влажной среде активно выбираются из фекалий и, попав в воду, падают на дно.
Фекалии (5–10 г) кладут на металлическое сито или заворачивают в марлю и помещают в воронку. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10 см с зажимом, в свободный конец трубки вставляют пробирку. Собранный в таком виде аппарат Бермана ставят в штатив и заполняют теплой водой (40ºС).
Аппарат с пробами от овец и коз оставляют при комнатной температуре на 3-6 час, крупного рогатого скота и лошадей на 12 час. За это время личинки нематод выползают из фекалий в жидкость и опускаются до места перекрытия трубки зажимом. После истечения срока зажимы открывают и наполняют пробирки водой, в которой могут находиться личинки нематод. Пробирки ставят в штатив на 20 мин для осаждения личинок затем воду из пробирок сливают, осадок встряхивают и переносят на предметное стекло, после чего микроскопируют. Личинки нематод подвижны и они легко обнаруживаются.
Метод Шильникова. Автор ещё более упростил методику Бермана. В этой методике используются обыкновенные медицинские градуированные стаканчики (емкостью 30 мл), имеющие форму усеченного конуса и сферическое дно, выпуклость дна направлена кверху. Пробы фекалий завертывают в марлевые салфетки, раскладывают по стаканчикам и заливают теплой водой. Через 8–10 час пробы осторожно вынимают, а жидкость отстаивают 10–15 мин. Затем стаканчики медленно наклоняют, сливают воду до появления мути. Дают отстояться осадку жидкости 5–10 мин. После этого стаканчик медленно наклоняют и из него глазной пипеткой отсасывают верхний прозрачный слой воды до тех пор, пока в пипетку не начнет всасываться осадок на дне. При аккуратном отсасывании на дне стаканчика остается 0,5–1 мл жидкости. Этот осадок каплями наносят на предметное стекло и микроскопируют. Эта методика заслуживает внимание практиков. Она проста и удобна для выполнения в любых условиях.
Культивирование личинок гельминтов. Личинок культивируют с целью диагностики гельминтозов вообще и дифференциальной диагностики в частности. Культивирование заключается в создании для яиц гельминтов, находящихся в фекалиях, благоприятных условий, чтобы личинки выросли до инвазионной стадии. По их морфологии определяют вид возбудителей болезни.
У домашних и диких травоядных в пищеварительном тракте часто паразитируют нематоды из подотряда стронгилят. Выделяющиеся с фекалиями яйца этих нематод трудно различимы. Поэтому методами овоскопии практически ставят только общий диагноз на стронгилятозы пищеварительного тракта. Дифференциальный диагноз можно поставить по развившимся личинкам.
Метод культивирования личинок. Порцию свежих фекалий животного в количестве 10–30 г помещают в стакан, закрывают стеклом и оставляют в термостате при температуре 25–30º С на 7–10 сут или при комнатной температуре в течении 10–12 сут. По мере подсыхания пробу фекалий слегка увлажняют водой и с истечением указанных сроков пробу фекалий исследуют по методу Бермана или Шильникова. Освобожденный от фекалий стакан заполняют водой, выдерживают 15–20 мин, затем верхний слой осторожно сливают, а осадок исследуют в часовом стекле под микроскопом.
Оборудование для гельминтокопроскопических исследований показано на рисунке 4.
4.4.2. СПЕЦИАЛЬНЫЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование содержимого конъюнктивальных полостей применяют для диагностики телязиоза крупного рогатого скота. Из спринцовки орошают конъюнктивальный мешок животного физиологическим или 3%ным раствором борной кислоты. Вытекающую жидкость собирают в кювет или тазик. Телязии светло – соломенного цвета, довольно крупные (около 2 см), хорошо видны невооруженным глазом.
Исследование крови проводят в основном для обнаружения личинок и яиц гельминтов подотряда филяриата. Для диагностики сетариоза крупного рогатого скота свежую кровь, взятую из яремной вены, консервируют 20%-ным раствором цитрата натрия из расчета 0,3 мл на 10 мл крови. Затем в центрифужную пробирку берут 1 мл крови и добавляют 9 мл дистиллированной воды. После центрифугирования в течение 3–5 мин при 1500 об/мин, осадок исследуют под микроскопом на наличие микросетарий (личинок).
Исследование кожи проводят для обнаружения микроонхоцерков (личинок). У крупного рогатого скота микроонхоцерки локализуются в коже пупка, вымени, холки, уха и конечностей. Для исследования срезают кусочек кожи размером с небольшую горошину (1,5–2 мм²) при помощи ножниц Купера. Пробу помещают в пробирку с 2 мл физраствора и выдерживают при температуре 37º С в течение 1 ч. Затем жидкость центрифугируют в течение 5 мин (1500 об/мин). Надосадочную часть сливают, а осадок микроскопируют..
Иммунологические методы диагностики.
