по голштинской породе. До опыта этим животным никаких вакцин не вводили. Противобруцеллезная вакцинация была первой в их жизни вакцинацией. По прошествии года после вакцинации всех телок ревакцинировали той же вакциной и контролировали их иммунный ответ еще 6 месяцев.
Второй опыт был проведен на 82 телках того же возраста. В 4-6 месячном возрасте им ввели вакцину из штамма 19, но в отличии от первой группы эти животные ранее были обработаны разными вакцинами согласно существующего ветеринарного законодательства (до постановки на опыт их вакцинировали 4 раза от других болезней). За подопытными животными проводили наблюдение в течение года.
Третий опыт, в отличии от предыдущих, проводился на фоне обработки животных иммуномодуляторами — Т-активиноми тимогеном. Всем подопытным телкам в первые 10 дней их жизни вводили Т-активин (ветеринарный препарат) или тимоген (получен медицинской промышленностью) согласно инструкций, а в 4- месячном возрасте вводили вакцину штамма 19. Этот опыт был проведен в 1990 ги повторен в 1991 г. Всего в эти годы под опытом было 181 животное.
В каждом опыте напряженность иммунитета определяли в день иммунизации и после иммунизации через 15, 45, 90 дней, би 12 месяцев. Во всех случаях опыты ставились таким образом, чтобы вакцинация животных проводилась в апреле-мае и под опыт ставились телки, родившиеся в ноябре-декабре.
Степень специфического иммунного ответа устанавливали по наличию специфических антител в сыворотке крови с помощью реакции агглютинации (РА) в пробирках (с переводом показателей титра антител в межпородные единицы), реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК) пластинчатой реакции агглютинации с розбентал антигеном (РБП). Уровень специфических иммуноглобулинов IgM и IgG определяли с помощью реакции агглютинации с применением меркаптоэтанола. Методика реакции основана на добавлении в сыворотку 0,1N 2-меркаптоэтанола с последующим определением реакции агглютинации в пробирках.
Рабочее разведение 2-меркаптоэтанола готовили путем добавления к 0,7 мл меркаптоэтанола 92,3 мл физиологического раствора. На 1,8 мл сыворотки (в разведении 1:12,5) добавляли | мл рабочего раствора 2-меркаптоэталона, смешивали, закрывали плотно резиновой пробкой и инкубировали в водяной бане при 37°С в течении 2 часов. Затем делали последовательные удвоения разведения сыворотки в физиологическом растворе и добавляли равное количество антигена в рабочем разведении с физиологическим раствором. Далее реакцию ставили как обычно. Стандартный тест РА выявляет общие агглютинины, а с меркаптоэтанолом — агглютинины IgG. Агглютинины IgM определяли по разнице титров двух проб — стандартной РАи реакции с меркаптоэтанолом.
Уровень неспецифической резистентности определяли в сыворотке крови общепринятыми методами по следующим показателям: бактерицидная активность, В-лизин, лизоцим. Специфический иммунный ответ на вакцинацию во всех опытах отличался большой индивидуальной изменчивостью как по интенсивности, так и по срокам образования антител. В качестве примера приведем динамику показателей иммунного ответа у 146 телок в первом опыте (табл. 12).
Розбенгал проба у большинства подопытных телок была выражена уже через 15 дней после вакцинации. У 25,6% животных РПБ сохранялась до 45 дней включительно, ау 3,5% в течение трех месяцев. У 18,4% телок наблюдалась замедленная реактивность и достаточно высокие значения РБП у них была выявлена только через 45 дней после вакцинации. У 2% подопытных животных РБП сохранялась до 6 месяцев. У 21,8% телок роз.бентал проба в течение всего периода исследований была отрицательна.
Уровень комплементсвязывающих антител, выявленных в реакции связывания комплемента, был наиболее высоким через 45 дней после вакцинации. Из 58 телок в сыворотке крови которых Уже через 15 дней после вакцинации, получена положительная РСК, 43,1% сохранили ее в течение 3 месяцев, 37,9% — только 45 дней, и 19% реагировали положительно только при первом обследовании после вакцинации. Из 49 животных, впервые давших положительную РСК только через 45 дней после вакцинации,
67,4% сохранили эту реакцию до последующего обследования (3 мес. после вакцинации), а 32,6% реагировали в этот период отрицательно. Через 6 и 9 месяцев ряд животных положительно реагировали в РДСК (через 6 месяцев - 12 телок, через 9 мес. — 1 телка). У 26,7% животных показатели РСК во все сроки исследования были очень низкие (не выше разведение 1:5).
Таблица 12. Показатели специфического иммунного ответа у телок
после вакцинации
| Реакция | Показатели | |||
|---|---|---|---|---|
| интенсивности ре- акции | дней | через 45 дней | | через 3 меся- ца | |
| Розбенгал проба | 0 | 29,0 | 21,8 | 63,8 |
| (оценка в крестах) | + | 19,3 | 16,5 | 18,1 |
| ++ | 2,7 | 14,3 | 4,3 | |
| +++ | 7,6 | 16,6 | 10,2 | |
| ++++ : | 41,4 | 30,8 | 3,6 | |
| Реакция связывания | |0 | 64,6 | 28,4 | 50,8 |
| комплемента (разве- | |1:5 | 20,8 | 20,9 | 25,8 |
| дение сыворотки) | 1:10 | 13,1 | 23,6 | 18,0 |
| 1:20 | 1,5 | 18,9 | 4,6 | |
| 1:40 | - | 8,2 | 0,8 | |
| Реакция агглютина- | |0 | 0,7 | 18,2 | 46,5 |
| ции (м.е./мл) | до 100 | 20,1 | 74,2 | 51,2 |
| от 101 до 200 | 29,2 | 7,6 | 2,3 | |
| от 201 до 400 | 29,2 | - | - | |
| от 401 до 800 | 20,8 | - | : | |
| Уровень иммуногло- | |0 | 11,9 | 33,3 | 77,0 |
| булинов KnaccalgM_ | | go 100 | 55,2 | 63,0 | 20,6 |
| (м.с./мл) | от 101 до 200 | 23,8 | 3,7 | 2,4 |
| от 201 до 400 | 91 | - | - | |
| от 401 до 800 | : | - | - | |
| Уровень иммуногло- | |0 | 15,5 | 47,8 | 55,8 |
| булинов класса 126 | |до 100 | 31,0 | 48,7 | 43,3 |
| (м.с./мл) | от 101 до 200 | 20,4 | 3,5 | 0,9 |
| от 201 до 400 | 19,0 | - | - | |
| от 401 до 800 | 14,1 | - | : |
Наиболее выраженной оказалась реакция агглютинации. У 18,2% животных реакция агглютинации была слабой и ее отмечали только при исследовании через 15 дней после вакцинации. У 28,3% телок агглютинирующие антитела присутствовали в сыворотке крови до 45 дней после вакцинации, ау 53,% - в течении 3
