повторного через 2-3 суток подсчёта СК в молоке из тех же долей вымени после устранения причины. При раздражении молочной железы через указанный срок количество СК снижается и приходит к исходному значению. Подсчёт числа СК осуществляют прямыми и косвенными методами.
Прямые методы подсчёта соматических клеток.
Для определения содержания СК в значительном количестве проб и установления качества молока, разработаны такие приборы, как «Фоссоматик», «Целлоскоп», «Пикоскель», «Культер-Каунтер», «Автоанализатор» и другие. ® Подсчёт соматических клеток на приборе «Фоссоматик». Работа прибора основана на флуоресцентно-оптическом принципе, где подсчитываются только клетки, имеющие ядро. Специфика методики основана на образовании флуоресцентного комплекса, в результате взаимодействия люминесцентного красителя с ДНК ядра клетки. Перемешивание пробы молока, отбор образца для исследования, разбавление его, окрашивание флюорохромовыми красителями (бромистым этидием) клеток и все другие операции, включая перевод результата исчисления в цифровое значение на светящемся экране и печатание его на специальной ленте, производятся в автоматическом режиме. Полученные результаты, умноженные на 1000, показывают число соматических, содержащих ядра клеток в 1,0 мл молока. Производительность аппарата составляет 150180 проб молока за | час.
® Подсчёт на электронных счётчиках частиц («Целлоскоп», «Культер-Каунтер», «Пикоскель», гемоцитометр копдуктометрический марки ГЦМК-3). Принцип действия этих приборов основан на изменении электрического сопротивления частиц, подлежащих подсчёту. При прохождении соматических клеток через капиллярное отверстие скачкообразно повышается сопротивление, что служит импульсом, который регистрируется и подсчитывается электронным путём. Перечисленные счётчики снабжены дискриминатором — устройством, которым вычисляют только частицы определенной величины.
® Метод подсиёта соматических клеток по И. И. Архангельскому и др. Предварительно готовят солюбилизирующий раствор по следующей прописи. К 0,9%-му раствору натрия хлорида, содержащего 1% формалина и 12,5% этилового спирта, добавляют 1% солюбизатора и нагревают при 60°C в течение 20 минут. В качестве солюбизатора используют синтанол ДС-10 (оксиэтилированные жирные спирты фракции Сь-Съь с 10 молями окиси этилена) или ПП-40 (полиоксиэтилированное производное пентола с 40 молями окиси этилена). После растворения солюбилизатора к раствору добавляют 1% насыщенного спиртового раствора основного фуксина и
фильтруют через бумажный фильтр. Краску к солюбилизирующему pacтору добавляют непосредственно перед исследованием. Для подсчёта соматических клеток в пробирку, содержащую 10,0 мл ипобизирующего раствора с красителем, добавляют 0,1 мл тщательно перемешанного молока (секрета) и прогревают в водяной бане при 80°Cв течение 30 минут. После остывания содержимое пробирки перемешивают и пиосяг каплю жидкости под покровное стекло счётной камеры Горяева, ‘Pyxca - Розенталя, Тома, Предтеченского, Бюркера и др. Вычисление количества клеток ведут под микроскопом (окуляр 7 или 10, объектив 8 или 10) ho вссй камере или определенном её объёме. Расчёт количества СКв 1 см? проводят по формуле X= 1000x Cx A
V
tw _Х — количество СК в 1 см? молока;
Л — количество соматических клеток; С — степень разведения; 1000 — коэффициент перевода к объёму 1 смз;
V- объём, в котором подсчитаны клетки.
В случае возникновения воспаления вымени происходят изменения в кленинюм составе секрета вымени. Клеточный состав секрета молочной железы у кишически здоровых и больных маститом коров приведён в таблице 5.
Таблица 5- Соотношение клеточных элементов в молоке здоровых
и секрете вымени больных маститом коров
| Показатель | Молоко здоровых коров | оч больных маститом коров |
|---|---|---|
| Нейтрофилы | 45 | 80 |
| Моноциты | 1.2 | |
| Маленькие мононуклеары |
®Метод И.И. Архангельского в модификации В.И. Слободяника. Особенность данного метода заключается в том, что насыщенный сииртовый раствор основного фуксина добавляют к солюбизирующему раствору в количестве не 1%, а 0,25% и используют готовый красящий раствор в количестве не 10,0 мл, а 5,0 мл. Это позволяет готовить полностью красящий раствор заблаговременно и использовать его в течение 15 дней после приготовления. Расчёты проводят по вышеуказанной формуле с учётом сделанного разведения пробы секрета вымени.
71
© Метод подсчета лейкоцитов в молоке по Н.М. Хилькевичу.
В пробирку наливают 0,4 мл разведенной краски Гимза (1,0 мл дистиллированной воды и 5 капель краски) и 20,0 мл исследуемого секрета вымени, получают разведение 1:20. Через 15—20 мини 1 час заполняют камеру Горяева. Лейкоциты подсчитывают во всей сетке. Если их очень много, ограничиваются подсчетом в пяти рядах или в пяти больших квадратах. Для определения количества клеток в 1,0 мл подсчитывают лейкоциты в одном квадрате и результат умножают на 5000.
При окраске по методу Н.М. Хилькевича лейкоциты не разрушаются в течение суток.
Косвенные методы одновременного определения концентрации водородных ионов и количества соматических клеток в пробах секрета из чегвертей вымени.
В России для этих целей используют ряд реактивов, в составе которых присутствуют поверхностно-активные вещества (ПАВ): димастин (В.И. Мутовин, 1965), мастидин (И.И. Архангельский и Н.К. Оксамитный, 1968), маститодиагност (И.С. Загаевский, 1969), «Дон» (А.И. Ивашура и В.Ф. Гордецов, 1973), мастоприм (Н.К. Оксамитный, 1977), Воронежский маститный тест (В.А. Париков, 1975), 20%-й раствор сульфанола (А.И. Ивашура, 1983). Поверхностно-активными веществами, или детергентами, называются вещества, способные адсорбироваться на различных поверхностях и понижать вследствие этого их поверхностное натяжение.
Механизм образования же-
леобразного сгустка при добав- .
лении ПАВ к секрету вымени ры =
состоит в следующем: ПАВ, - Ps
разрушая ядра соматических At : «.
клеток, образует комплексы с их SS ae SS
белками и вытесняет ДНК, Ko- |) eee ‚
торая переходит в свободное а. ee
зованиюсостояниесгустка.и способствует обра- | | Е is :
Исследования oe a 2 ty ;
молочно-контрольных пластин- : i ati
ках (МКП-1 или МКП-2).проводят на | ьо> 4 <.fi м№A
вин) (рис.МКП-120) (авторпредставляетВ.И. Мутсоб о -й ®— — ee=
пластинку с четырьмя полушаро- Рисунок 20 — Общий вид
выми лунками, которые имеют молочно-контрольной пластинки пластинки -1
молочно-контрольной пластинки пластинки -1
72
