годными, используют для пересадки. Все операции по удалению криопротекторов проводят при комнатной температуре под микроскопическим контролем.
При использовании соломин, заправленных с сахарозой, проводят одноэтапное разбавление криопротектора раствором сахарозы в той же соломине. Для этого соломину после оттаивания встряхивают подобно клиническому термометру 3-4 раза для вытеснения пузырьков воздуха и смешивания, находящихся в ней растворов. Для уравновешения осмотического давления соломины размещают при температуре 25ºС или 37°С в вертикальном положении на 15 минут. Проводят смену положений «верх-низ» с таким расчетом, чтобы в конце выдержки пыж находился в верхнем положении. Под лупой контролируют наличие эмбриона в соломинке и, по возможности, определяют его качество. После проведения указанных манипуляций эмбрион готов к пересадке. Данные по подготовке и проведению замораживания и оттаивания эмбрионов заносят в журнал криоконсервирования и использования эмбрионов.
2) Заправка инструментов эмбрионами для пересадки.
Подготовка инструментов для пересадки эмбрионов проводится в боксе, в стерильных условиях. Для пересадки эмбрионов весь инструментарий перед работой стерилизуют кипячением в течение 30 мин, затем подсушивают и выдерживают до начала работы с эмбрионами в настольном боксе под бактерицидными лампами. Перед началом работы с эмбрионами включают бактерицидные лампы.
При использовании для пересадки классических инструментов типа Кассу эмбрион заправляют в длинную тонкую соломину (диаметром 1 мм). Заправленную соломину, вставляют в наконечник устройства и присоединяют его к основной трубке. Прибор готов к работе, он передается специалисту по пересадке или сохраняется непродолжительное время в термостате или специальном термоконтейнере при температуре 37°С . Такие инструменты, как правило, изготовлены из нержавеющих материалов, довольно жесткие и их технические возможности не позволяют осуществлять доставку трансплантируемого эмбриона в верхушку рога матки реципиента не нарушив целостности эндометрия.
При использовании для пересадки инструментов с эластичными капиллярами (патент РФ на полезную модель №154919 «Устройство для аппликации эмбрионов крупного рогатого скота» (авторы Косовский Г.Ю., Попов Д.В., Бригида А.В.)) эмбрион заправляют в эластичный капилляр и передают его оператору для пересадки. Такое устройство позволяет провести процедуру трансплантации эмбриона в верхушку рога матки реципиента, а
также осуществлять транспортировку и трансплантацию эмбрионов на фермах за несколько километров от пункта трансплантации. При этом теплый (37°С) заряженный капилляр помещают в утепленный контейнер, имеющий внутри такую же температуру. Контейнер транспортируют в горизонтальном положении, избегая резких толчков и наклонов. Запасные соломины с эмбрионами для пересадки перевозят в тщательно упакованном виде в этом же контейнере при температуре 37°С.
После транспортирования эмбрионов проверяют сохранность первоначального чередования воздуха и среды в каждой пайете (соломинке) и, если она не нарушена, помещают пайету в катетер и проводят пересадку.
Инструменты после пересадки одного эмбриона моют и дезинфицируют спиртом, орошают стерильной средой Дюльбекко, вставляют соломинку с эмбрионом, прибор помещают в чехол и проводят пересадку. При использовании устройств с эластичными капиллярами, дезинфицируют только зонд-направитель, а эластичный капилляр утилизируют. По окончании пересадки все использованные приборы и оборудование моют, дезинфицируют и готовят к следующему этапу работ.
3) Подготовка реципиентов
Подготовка реципиентов к пересадке эмбрионов осуществляется так же, как и при подготовке доноров для нехирургического извлечения зародышей:
-животных фиксируют в станке, наружные половые органы обмывают теплой водой с мылом, дезинфицируют 70%-ным этанолом, делают сакральную анестезию 2%-ным раствором новокаина (5 мл). Сильно возбудимым животным вводят релаксанты внутримышечно в дозе 0,5-0,8 мл;
-подготовленный к пересадке прибор (катетер) вводят во влагалище до шейки матки, вынимают защитный чехол и под ректальным контролем проводят катетер через цервикальный канал. При этом выполняют ректально те же манипуляции, что и во время введения катетера при нехирургическом извлечении эмбрионов. Осторожным движением катетер подвигают ближе к верхушке рога матки, ректально контролируя положение округлой головной части прибора. Убедившись в правильности расположения прибора, плавным нажатием на поршень устройства вводят содержимое соломины в просвет рога матки. Также плавным и осторожным движением прибор вынимают из полости матки.
- при использовании устройства для пересадки эмбрионов с эластичным капилляром (патент РФ на полезную модель №153867 от 09.07.2015г. «Устройство для сбора эмбрионов животных» (авторы Косовский Г.Ю., Попов Д.В., Бригида А.В.)) оператор вводит во влагалище зонд-направитель, удаляет защитный чехол, под ректальным контролем проводит зонд-направитель через
цервикальный канал к точке бифуркации и размещает его так, чтобы выходное отверстие на дистальном конце было развѐрнуто в сторону канала рога матки, в который будет осуществляться трансплантация эмбриона, затем осторожным движением, через зонд-направитель, проводит эластичный капилляр с заправленным в него эмбрионом в рог матки и при достижении верхушки плавным нажатием на шприц вводит содержимое с эмбрионом в рог матки.
Как правило, эмбрион пересаживают в рог матки на стороне желтого тела в яичнике.
По окончании пересадки животных кормят и содержат в обычных условиях, не допуская скученности, травмоопасных и других стрессовых ситуаций.
После пересадки эмбрионов, ведут контроль за возможным проявлением повторной охоты у животных-реципиентов. На 60-90 день после пересадки животных исследуют на наличие стельности методом ректальной пальпации. Строго контролируют случаи и частоту абортов стельных реципиентов. Окончательные показатели пересадки эмбрионов учитывают по результатам отела.
После проведения мероприятий по трансплантации эмбрионов составляют акт (см. приложения).
ГЛАВА 6
Учет и отчетность
Метод трансплантации эмбрионов требует четкой организации и последовательности работ, пунктуального и добросовестного оформления документации. Правильный учет на всех этапах технологии трансплантации эмбрионов необходим для постоянного контроля и анализа результатов, применения отдельных схем, режимов и методов в работе, что позволит повысить эффективность применения метода этого в практике животноводства.
На каждого животного донора и реципиента, поступающего для работы по трансплантации эмбрионов, заполняется соответственно оформленная карточка племенной коровы, телки. К карточке прилагают пояснительную записку или зоотехническо-гинекологическую карточку с характеристикой воспроизводительной способности животного и других показателей, перечисленных в требованиях при отборе коров-доноров. На выбракованных из молочного стада коров указывают причину выбраковки.
