индукции суперовуляции. При отсутствии реакции на гормональную обработку корову в группу доноров не переводят. Коров, прошедших разовую гормональную обработку и давших биологически полноценных эмбрионов, не менее 4-х за первую операцию, переводят в группу коров-доноров и составляют об этом акт (см. приложения).
3.3.Индукция суперовуляции
Проведение процедуры индукции суперовуляции у самок животных включает в себя введение гонадотропных гормонов, обладающих действием стимуляции роста (развития) антральных фолликулов яичника. В практике получения эмбрионов для проведения процедуры индукции суперовуляции используют препараты, содержащие следующие виды гонадотропинов:
-
1) Сывороточные гонадотропины – гонадотропин сыворотки жеребых кобыл (ГСЖК, eCG);
-
2) Гипофизарные гонадотропины – фолликулостимулирующий гормон (ФСГ, FSH);
-
3) Рекомбинантный ФСГ – полученный рекомбинантным методом (Рек-ФСГ, R-FSH).
Наиболее используемыми на практике по эффективности индукции суперовуляции являются препараты, содержащие гонадотропины гипофизарного происхождения. В настоящее время получают ФСГ и ЛГ (лютеинизирующий гормон) из гипофиза животных (свиней, овец) или рекомбинантным способом. В отличие от гонадотропных препаратов, полученных, например, из сыворотки крови жеребых кобыл, гипофизарные гонадотропины имеют короткий период полураспада, не нарушают воспроизводительную функцию животного после проведения процедуры индукции суперовуляции, сохраняют чувствительность яичников к вводимым гонадотропинам, не вызывают аллергических реакций.
Для полноценной реализации реакции и достижения успеха при проведении индукции суперовуляции в организме животного, помимо постоянного уровня ФСГ, необходимо одномоментное присутствие ЛГ. ФСГ вызывает и стимулирует рост и созревание фолликулов в яичниках, а ЛГ инициирует, в последующем, их овуляцию. Соотношение ФСГ/ЛГ имеет большое значение для получения хороших результатов индукции суперовуляции. При этом, диапазоном их соотношений, необходимых для оптимальной реакции суперовуляции у млекопитающих, является соотношение ФСГ/ЛГ, которое составляет 1/0,001-1/1 и используется при производстве коммерческих препаратов.
При проведении индукции суперовуляции общепринятым является 8-10кратное введение в лютеальную фазу полового цикла коровам- и телкам-
донорам препаратов, содержащих ФСГ и ЛГ, каждые 12 часов в течение 4-5 дней в общей дозе 30-50 единиц Арморовского стандарта (Арм.ед.) или 7001000 междунароных единц (МЕ) и с последующим введением простагландина F2α через 48 часов после первой инъекции ФСГ.
Для оптимизации процедуры индукции суперовуляции препаратами, содержащими гипофизарный ФСГ, разрешено их применение в виде однократной инъекции композиции полной дозы препарата (30-50 Арм.ед. или 700-1000 МЕ) с пролонгатором – полиэтиленгликоль (ПЭГ) и последующее через 48 часов после инъекции этой композиции (препарат ФСГ+ПЭГ) введение препарата простагландина F2α. Для снижения вариативности ответной реакции, повышения результативности индукции суперовуляции и выхода пригодных к использованию в репродукции эмбрионов допустима обработка доноров биологически активными препаратами (витамины, стимуляторы, пептиды). Повторную процедуру индукции суперовуляции у доноров эмбрионов проводят по прошествии как минимум одного полового цикла.
Для индукции суперовуляции применяют различные схемы гормональной обработки. Наиболее используемыми являются следующие схемы:
Схема 1
Индукция суперовуляции с применением
сывороточного гонадотропина (ГСЖК)
| День эстрального цикла | Препарат/ мероприятие | Доза |
|---|---|---|
| 2 10-12 12-14 14-16 21-23 | Витамин ГСЖК; Витамин Простагландин F2α ЛГ (Гн/Рг)/ Охота и осеменение, Вымывание эмбрионов | 10 мл 2500-3000 М.Е.; 10 мл 4 мл 5 мл |
Схема 2
Индукция суперовуляции с применением
гипофизарного гонадотропина (ФСГ)
| День эстрального цикла | Препарат/ мероприятие | Доза |
|---|---|---|
| 10 | ФСГ | утро – 2,5 мл / вечер – 2,5 мл |
| 11 | ФСГ | утро – 2,0 мл / вечер – 2,0 мл |
| 12 | ФСГ | утро – 1,5 мл / вечер– 1,5 мл |
| 13 | ФСГ - простагландин F2α | утро – 1 мл – 3 мл /вечер – 1 мл – |
| 15 | Охота и осеменение | 1,5 мл |
| 22 | Вымывание эмбрионов |
Применяемые с целью индукции суперовуляции гормональные препараты должны быть допущены к использованию на территории РФ, иметь не истѐкший срок годности и храниться в условиях согласно инструкции и требованиям к применению и хранению гормональных препаратов.
После проведения процедуры индукции суперовуляции составляют акт (см. приложения), где указывают название препарата, его серию, дату выпуска и срок годности, производителя и протокол (схему) введения.
3.4. Осеменение доноров эмбрионов. Требования, предъявляемые к семени и быкам- производителям
Осеменением должны заниматься высококвалифицированные техники, знающие особенности охоты у суперовулировавших доноров.
Для осеменения доноров применяют цервикальный метод введения спермы. Осеменение доноров проводят с применением стерильных инструментов одноразового использования. Наиболее предпочтителен ректоцервикальный способ, позволяющий контролировать состояние половых органов коров и более глубоко вводить сперму в тело матки. При проведении процедуры искусственного осеменения необходимо следовать правилам:
-
1) доноров следует осеменять трижды с 12-часовым интервалом;
-
2) семя необходимо оттаивать в теплой воде (35-37 °С) в течение 15-20 сек.;
-
3) инструмент рекомендуется проводить через шейку матки как при обычном искусственном осеменении;
4) введение спермы в один из рогов матки при осеменении донора недопустимо. Лучшим способом считается введение спермы поровну в каждый из рогов матки.
Отсутствие признаков полового возбуждения у донора в период осеменения может свидетельствовать о низкой реакции яичников на введѐнные гонадотропины. Таких коров выявляют до 5-7 %.
При отсутствии признаков охоты у суперовулировавших доноров либо повторяют обработку, либо проводят обычное осеменение.
Повторные слизистые выделения у донора через 2-3 дня после осеменения свидетельствуют о низкой вероятности получения жизнеспособных эмбрионов при вымывании, так как в яичниках, на месте фолликулов, не образовались полноценные желтые тела. При увеличении числа таких случаев по стаду специалистам необходимо обратить внимание на условия содержания и полноценность кормления доноров.
Для осеменения коров-доноров используют семя выдающихся быковпроизводителей, проверенных по качеству потомства, признанных улучшателями по селекционным признакам, прошедших молекулярно-
