генетические и цитогенетические исследования на предмет отсутствия наследственных заболеваний и стабильности генетического аппарата.
Подбор производителей и коров-доноров ведется в соответствии с планом селекционно-племенной работы.
С целью получения удовлетворительных результатов суперовуляции рекомендуют использовать дозу спермы от 20 млн. и более живых спермиев с прямолинейно-поступательным движением.
Семя для осеменения самок-доноров должно быть получено и обработано согласно положениям Главы 4.6 кодекса здоровья наземных животных МЭБ.
После проведения процедуры по осеменению донора составляют акт, где указывают все характеристики быка, чье семя использовалось, количество затраченных доз семени и т.д. (см. приложения).
3.5. Учет реакции и извлечение эмбрионов
Вымывание эмбрионов проводят на 7-8-й день после осеменения. Первый день эстрального цикла доноров принимают за ноль. Перед вымыванием эмбрионов из матки донора проводят учет реакции яичников на введение гонадотропинов. Непосредственно перед вымыванием эмбрионов проводят подсчет желтых тел и неовулировавших фолликулов. Следует учитывать, что полноценное желтое тело при ректальной пальпации представляет собой бугорок, твердый на ощупь и имеющий на верхушке небольшое углубление - «ямку», а неовулировавшие фолликулы - флюктуируют и имеют нечѐткие границы.
Эффективность получения эмбрионов во многом зависит от способа их извлечения, квалификации персонала, правильного использования приборов и инструментов.
Вымывание эмбрионов современными устройствами имеет ряд преимуществ: относительная простота исполнения, без риска нарушить воспроизводительную способность животных и повторного использования их в качестве доноров. Для вымывания эмбрионов не требуется специального операционного помещения, что позволяет успешно применять его непосредственно на животноводческих фермах.
Процедура вымывания эмбрионов представляет собой подачу промывочного раствора в рога матки самки-донора, орошения внутренней полости рога матки с целью смыва находящихся там эмбрионов, забора промывочного раствора с эмбрионами из рога матки, сбор его в специальный сосуд и/или локализации вымытых эмбрионов в эмбриосборнике.
Для проведения процедуры вымывания эмбрионов необходимо иметь фиксационный станок; катетеры для извлечения эмбрионов и необходимые к
ним вспомогательные инструменты (стилеты, мандрены, манжетки и т.д); системы для подачи и оттока промывочной среды, состоящие из гибких шлангов и трубок с зажимами; шприцы и устройства для подачи и забора промывочного раствора; промывочные среды, представляющие собой буферные растворы с добавленными к ним питательными веществами и антибиотиками; устройства и фильтры для локализации вымываемых эмбрионов; терапевтические средства для расслабления матки и прямой кишки донора.
Инструменты и устройства для проведения процедуры вымывания, сбора и локализации эмбрионов могут быть различной модификации и отличаться техническими характеристиками.
Методы извлечения эмбрионов способом вымывания их из матки зависят от модификации и технических характеристик используемого инструментария и могут быть разными по своему техническому исполнению:
-
Метод «шприцевания» – оператор вводит двуканальный катетер в рог матки донора, далее через катетер путем нагнетания промывочный раствор подаѐтся в дозах 20-60 мл в рог матки донора и забирается оттуда путем отсоса при помощи шприца Жане, на каждый рог матки используют 300-500 мл промывочного раствора;
-
Метод «самотѐка» – двуканальный катетер вводят в рог матки, и через него промывочный раствор самотѐком подается по системе трубок во внутреннюю полость рога матки, в дозе 20-60 мл, затем подачу прекращают, перекрыв подающий канал системы. Далее технолог проводит манипуляции с рогом матки, открывает заборный канал системы, и промывочный раствор с эмбрионами через катетер по системе трубок поступает в эмбриосборник или сосуд для его сбора. При этом методе можно использовать и трехканальный катетер, при этом необходимость прерывания циклов подачи и забора промывочного раствора отпадает, так как конструкция такого катетера позволяет проводить эти этапы синхронно. Для промывания одного рога матки используют 300-500 мл промывочного раствора.
-
Комбинированный метод – через установленный в роге матки двуканальный катетер по подающему каналу системы промывочный раствор при помощи нагнетательного устройства (шприц, насос, помпа) в дозах 20-60 мл поступает во внутреннюю полость рога матки, затем подающий канал системы перекрывают, технолог проводит манипуляции с рогом матки, открывают заборный канал системы, и промывочный раствор с эмбрионами
через катетер по системе трубок поступает в эмбриосборник или сосуд для его сбора. При использовании трехканального катетера необходимость прерывания циклов подачи и забора промывочного раствора отпадает, так как конструкция такого катетера позволяет проводить эти этапы синхронно. Для промывания одного рога матки используют 300-500 мл промывочного раствора.
Промывочные растворы, которые используются для вымывания эмбрионов, содержащие биологические продукты животного происхождения, не должны содержать патогенных микроорганизмов. Среды и растворы, используемые для вымывания эмбрионов, стерилизуют принятыми способами, описанными в Руководстве IETS (Международного общества пересадки эмбрионов), и подвергают манипуляциям в условиях, гарантирующих поддержание стерильности. Антибиотики должны добавляться в среды, используемые для отбора, манипуляции, промывки и хранения, согласно рекомендациям Руководства IETS.
Процедуру вымывания эмбрионов проводят, соблюдая все правила обращения с животными, техники безопасности и с соблюдением норм и правил ветеринарного контроля. После проведения процедуры вымывания эмбрионов составляют акт (см. приложения), где указывают все характеристики донора, применяемый метод, все характеристики используемого промывочного раствора.
3.6. Требования, предъявляемые к эмбрионам, полученным методом in vivo , и к условиям их обработки.
При получении эмбрионов методом in vivo проводят вымывание эмбрионов из матки донора на 7- 8 день после первого осеменения. Полученные таким способом эмбрионы коров подвергают микроскопическому исследованию при помощи стереомикроскопа или бинокулярной лупы при 150200-кратном увеличении. Характеризуют и классифицируют их согласно ГОСТ 28424-2014 «Средства воспроизводства. Эмбрионы крупного рогатого скота. Технические условия» ( далее- ГОСТ 28424-2014) .
При работе с эмбрионами соблюдают все предписания и правила, отраженные в ГОСТ 28424-2014, в кодексе здоровья наземных животных МЭБ (глава 4.7 статья 4.7.5) и ветеринарном законодательстве РФ.
В плане распространения болезней пересадка эмбрионов, полученных in vivo , представляет собой метод передачи генетического материала, несущий низкий риск.
Вне зависимости от вида животных процесс получения и трансплантации
