охлаждения и нагревания объем образца, содержащего эмбрионы, не должен превышать 0,1 мкл. При криоконсервации по методу витрификации полученных in vitro эмбрионов млекопитающих используется широкий ряд носителей открытого и закрытого типов (Патент РФ на изобретение №2584584 от 20.05.16г. «Система и устройство (варианты) для криоконсервации группы ооцитов и эмбрионов млекопитающих по методу витрификации при использовании в качестве носителя полого волокна» (авторы Маленко Г. П., Корниенко Е. В., Косовский Г. Ю. )).
Требования к консервации и транспортировке эмбрионов согласно кодексу здоровья наземных животных МЭБ:
1) В одну группу криоконсервации должны входить эмбрионы, полученные от одной самки-донора или происходящие из одной партии.
2) Эмбрионы должны криоконсервироваться в очищенных и стерильных контейнерах с жидким азотом, а затем храниться с соблюдением строгих условий гигиены в специально предназначенном для этой цели месте.
3) Носители с криоконсервированными эмбрионами маркируются, как указано в Руководстве IETS.
4) После проведения процедуры по криоконсервации эмбрионов заполняют соответствующую документацию, в которой отражены характеристики доноров, эмбрионов и проведенных процедур.
ГЛАВА 5
Этапы и техника трансплантации эмбрионов
5.1. Требование к реципиентам
В качестве реципиентов отбираются взрослые коровы и телки:
-
тѐлок для использования в качестве реципиентов отбирают в возрасте 16-20 мес., с живой массой 340-400 кг;
-
реципиенты должны иметь крепкую конституцию и заводскую
-
упитанность;
-
отобранные реципиенты должны быть сосредоточены в стационарном месте со стабильным полноценным рационом кормления в течение 3-х мес. после трансплантации эмбрионов;
-
реципиенты должны быть клинически здоровыми;
-
проходить обязательное обследование на инфекционные заболевания
-
(бруцеллез, туберкулез, вирусные респираторные заболевания, лейкоз, трихомоноз, вибриоз, ящур и др.)
-
обязательная дегельминтизация предоставляемого поголовья для отбора в качестве реципиентов за 1,5 месяца до пересадки эмбрионов;
-
обязательное проведение биохимического анализа крови предоставляемого поголовья для отбора в качестве реципиентов на содержание макро- и микроэлементов и представлением результатов анализа;
-
реципиенты должны быть с нормальной физиологией половой системы без патологии родовых путей;
-
в качестве реципиентов используют наименее ценных в племенном отношении животных;
-
нельзя использовать в качестве реципиентов животных мелких пород для трансплантации эмбрионов от пород более крупных по массе.
После проведения мероприятий по отбору и комплектования группы реципиентов составляется акт (см. приложения).
5.2. Требование к методам управления и синхронизации половых циклов у доноров и реципиентов.
Управление половым циклом и синхронизация половой охоты (в пределах ± 12 ч) у доноров и реципиентов - важный элемент подготовки животных к получению и пересадке эмбрионов в запланированные сроки.
При подготовке реципиентов к трансплантации свежеполученных эмбрионов необходимо учитывать, что ко времени процедуры не все отобранные и прошедшие гормональную обработку реципиенты будут подходить по необходимым показателям к тому, чтобы им провели трансплантацию эмбриона. В этой связи надо исходить из расчета потребности на 1 донора должно быть подготовлено 3-5 реципиентов, при этом половая охота у подготавливаемых реципиентов должна совпадать с днем первого осеменения донора. Число реципиентов на одного донора может быть увеличено до 10 и более при суперовуляции донора, имеющего стабильный и высокий выход пригодных эмбрионов, а также при наличии криоконсервированных эмбрионов.
В практической работе по трансплантации эмбрионов коров выявить необходимое число реципиентов в спонтанной половой охоте в течение одного дня практически невозможно. Поэтому чтобы ко времени пересадки эмбрионов было необходимое поголовье реципиентов, проводят гормональную обработку отобранным для трансплантации коровам и телкам с целью управления их половым циклом и индуцирования у них половой охоты.
Гормональная обработка доноров и реципиентов позволяет управлять интроовариальными процессами, выравнивая стадии полового цикла, что позволяет планировать работы при пересадке эмбрионов без их
криоконсервации или использовать криоконсервированные эмбрионы для трансплантации большому числу реципиентов.
Для управления половым циклом и синхронизации половой охоты у доноров и реципиентов применяют препараты, разрешѐнные к использованию на территории РФ и содержащие такие гормоны как - прогестерон, синтетические аналоги простагландина F2α, различные релизинг-факторы.
Для проведения мероприятий по управлению половыми циклами и синхронизации половой охоты у доноров и реципиентов применяют разработанные схемы и режимы введения гормональных препаратов.
Накопленные данные показывают, что асинхронность половых циклов у доноров и реципиентов снижает процент стельности, если реципиент приходит в охоту позднее донора более чем на 12 ч (-12ч) или раньше донора более чем на 24 ч (+24 ч). Поэтому при проведении мероприятий по синхронизации необходимо рассчитать длительность схем и режимов, чтобы день первого осеменения донора совпадал с днем охоты у реципиента. Следует иметь в виду, что синхронизация охоты донора и реципиента не должна проводиться отвлеченно, без учета стадии развития эмбрионов.
После проведения мероприятий по синхронизации половых циклов у доноров и реципиентов составляют акт, где указывают применѐнные схемы и режимы введения гормонов, все характеристики применяемых препаратов и результаты гормональной обработки (см. приложение).
5.3. Трансплантация эмбрионов реципиентам
В практической работе по трансплантации эмбрионов применяют нехирургический метод пересадки. Трансплантация эмбрионов реципиентам нехирургическим методом представляет собой процедуру переноса эмбриона из пайеты (соломинки) в рог матки реципиента. Такая процедура проводится при помощи специальных катетеров под ректальным контролем половых органов. Этот метод требует хороших навыков, позволяющих избежать травмирования слизистой оболочки половых путей, и его проводят в строгом соответствии со всеми требованиями и правилами по контролю и профилактики инфекционных заболеваний.
Приживляемость эмбрионов в большой степени зависит от синхронности проявления эструса у доноров и реципиентов. Наилучшие результаты приживляемости эмбрионов достигаются при полной синхронности полового цикла у донора и реципиента. Допустимы отклонения синхронности не более чем на один день.
Успешность приживляемости пересаженных эмбрионов также зависит от места их локализации в роге матки при проведении процедуры трансплантации,
