Рисунок 8 - Процесс определения концентрации и разбавления спермы
При подсчете спермиев в счетной камере (Горяева, Тома или Бюркера), камеру предварительно моют и насухо вытирают салфеткой, затем накрывают покровным стеклом и притирают его до появления радужных колец. Счетные камеры имеют три площадки, разделенные прорезями. В счетной камере Горяева средняя площадка прорезью разделена на две, каждая из которых имеет выгравированную сетку. В эритроцитарный смеситель набирают сперму быка до деления - 1, после этого набирают 3%-ный раствор хлорида натрия до деления 101, под влиянием раствора спермин становятся неподвижными, что облегчает их подсчет. Большим и указательным пальцами зажимают оба конца смесителя и встряхивают в течение 2-3 минут. Когда сперма равномерно смешалась с раствором, из смесителя удаляют четыре капли жидкости. Этим достигается удаление из капилляра смесителя раствора не сме-
шанного со спермой. Следующую каплю наносят на сетку камеры под покровное стекло. Переносят камеру на предметный столик микроскопа и подсчитывают спермин при увеличении в 200400 раз. Подсчет производят в пяти больших квадратах (в 80 маленьких квадратиках). Считают только головки спермиев, расположенных внутри малых квадратов и лежащие на их левых и верхних линиях. При подсчете число спермиев в каждом большом квадрате (16 маленьких) записывают отдельно. Подсчет удобно вести с помощью счетчика для лейкоцитов крови, используя, пять клавиш, отдельно для каждого квадрата. Полученную сумму спермиев в пяти квадратах делят на 200 и определяют общее количество спермиев в 1 мл спермы.
С помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК — М) можно в течении 1-2 минут определить концентрацию спермиев в эякуляте. Метод определения концентрации спермиев основан на способности спермы ослаблять пропускаемый через нее пучок света пропорционально концентрации спермиев, то есть чем выше концентрация спермиев, тем больше ослабляется проходящий пучок света.
Определять на ФЭК-М концентрацию начинают спустя 1520 минут после включения лампы и подсветки фотоэлементов. Рукояткой устанавливают красные светофильтры. Левый отчетный барабан с помощью рукоятки выставляют на «0» по красной шкале. Затем во флакон наливают 10 мл 3,5 %-ного раствора лимоннокислого натрия и вносят туда микропипеткой 0,1 мл спермы быка (соотношение 1:100). После разбавления сперму тщательно перемешивают, осторожно переворачивая закрытый флакон в руке, наливают в кювету с рабочей длиной 10 мм до метки и быстро определяют ее оптическую плотность. Для этого в левый юоветодержатель ставят чистую кювету такой же длины (мм) наполненную 3,5 %-ным раствором лимоннокислого натрия, а В правый кюветодержатель две такие же кюветы - одну с разбавленной спермой, другую с 3,5 %-ным раствором лимоннокислого натрия. При этом кювету с разбавленной спермой устанавливают на пути прохождения пучка света, а кювету с рас-
твором - в запасное гнездо. Кюветы ставят на расстояний, наиболее удаленном от фотоэлемента.
Установив кюветы, закрывают крышки прибора и включают гальванометр рукояткой сначала на грубую чувствительность в положение «1», рукояткой нейтральных клиньев подводят стрелку гальванометра к «О», затем включают гальванометр на высокую чувствительность путем перевода рукоятки в положение «2» и точно устанавливают стрелку на «О».
После этого вынимают кювету со спермой из правого гнезда и ставят вместо нее кювету с раствором лимоннокислого натрия. Стрелка гальванометра при этом отклоняется и ее ставят на «О». Отчет плотности берут по красной шкале левого барабана. Каждые 0,05 деления шкалы соответствуют концентрации спермиев и обозначаются на градуированной кривой.
Предварительно необходимо построить. калибровочную кривую, изображающую зависимость оптической плотности от концентрации спермиев.
Из отобранных эякулятов путем разбавления их 3,5 %-ным раствором лимоннокислого натрия 1:1,1:2, 1:3 и т.д. готовят образцы спермы и уточняют концентрацию спермиев в каждом из них в счетной камере. Определяют величину оптической плотности каждого образца на приборе ФЭК-М. Зная фактическую концентрацию спермиев, установленную в счетной камере, строят для спермы быка калибровочную кривую.
Имея калибровочную кривую, можно легко определить неизвестную концентрацию любого эякулята. Для этого нужно лишь установить его оптическую плотность на приборе и посмотреть на калибровочную кривую, которую следует ежемесячно проверять, так как показания прибора могут изменяться (стареют фотоэлементы, гальванометр, лампы накаливания и др-), • ■
Определение патологических форм спермиев. При снижении качественных показателей спермы у отдельных производителей подсчитывают патологические формы спермиев. Существует прямая связь между клиническими симптомами болезни
