При симптомах обморочного состояния пострадавшего следует вывести из помещения на свежий воздух.
Сосуды Дьюара необходимо два раза в год обеззараживать парами формалина. Для этого сосуд освобождают от жидкого азота путем полного испарения, обезжиривают и на металлическом стержне в него опускают жестяной цилиндр с порошком марганцево-кислого калия, облитого формалином. Через сутки сосуд вновь можно заполнять жидким азотом.
Для предотвращения загрязнения сосудов при заправке жидким азотом, конец гибкого шланга следует закрывать специально приготовленным чехлом из брезента. При заправке сосуда загнутый на конец шланга чехол расшнуровывают и передвигают в сторону ТРЖК, а освобожденный от чехла конец шланга опускают в сосуд.
7. Оценка, разбавление и замораживание спермы быков по французской технологии
При поступлении спермы через бактерицидный бокс, сразу определяется объем эякулята, затем берут образец для опреде-1 ления густоты и подвижности спермиев и данные заносятся в рабочий журнал, после чего при помощи дозатора отбирается проба для определения концентрации спермиев на фотометре! французской конструкции, который считывает количество! спермиев в 1 мл спермы и выдает на дисплее цифровые показа-1 тели через принтер на писчей бумаге по каждому эякуляту быка, j с указанием даты и времени взятия спермы, объема эякулятал! концентрации спермиев и степени разбавления спермы.
Разбавление спермы на основании данных автоматической го прибора производится согласно методике, которая будет из-| ложена ниже по тексту;
После автоматической фасовки, сперма в соломинках под-1' вергается эквилибрации в течение 4-5 часов на специальном оборудовании.
После эквилибрации соломинки со спермой раскладывают j в контейнеры с ячейками из расчета 100 соломинок в каждый} ]*
контейнер и помещают в морозильную установку, в котором соломинки подвергаются автоматической заморозке начиная с +4°С до -140°С, под непосредственным контролем компьютерной программы. Во время заморозки на мониторе выводится калибровочная кривая хода заморозки. После достижения температуры спермы в соломинках -140°С, соломинки загружают в сосуд с жидким азотом предварительно поместив согласно номера быка в мешочки из капроновой ткани, на которые заносится номер и кличка быка, его породная принадлежность. Из полученной свежей спермы, а также по завершении замораживания, отбираются образцы спермы для проведения оценки качества спермы и ее бактериологической обсемененности, а после месячного карантина сперма проверяется на активность.
Сохранение высокого оплодотворяющего потенциала семени в процессе замораживания и размораживания требует соответствующих условий для криоконсервации. Многочисленные исследования в течение последних 50 лет были направлены на усовершенствование процессов замораживания и размораживания семени производителей.
Установлено, что специфический размер спермы, его форма, содержание мембранного липида, протеиновый состав, метаболические условия влияют на условия, предъявляемые к криоконсервации половых клеток.
Несмотря на успешные исследования по соверншенствованию криоконсервации, некоторые сперматозоиды не могут выжить в процессе замораживания и размораживания. Имеют место две основные причины гибели клеток или ущерба для них:
♦ образование кристалликов льда внутри сперматозоидов (внутриклеточное образование льда) при применении быстрого j темпа замораживания, который наносит непоправимый вред мембранам спермы;
♦ развитие районов высокой концентрации растворенного вещества (эффект растворимости), которые обезвоживают клетки при использовании медленного темпа замораживания или I размораживания.
Целью некоторых процедур по замораживанию спермы является оптимизация темпа замораживания, чтобы гибель клетки, вследствие внутриклеточного образования льда и гипертонических растворов была сведена до минимума. Индивидуальные процедуры обработки спермы в лаборатории по криоконсервации включают:
-
♦ темп замораживания;
-
♦ время уравновешивания;
-
♦ время уравновешивания - темп таяния;
-
♦ темп таяния - темп замораживания;
-
♦ темп замораживания - уровень глицерина;
-
♦ уровень глицерина — темп размораживания. В результате этих взаимодействий оценка' эффекта инди- видуальных составляющих процесса криоконсервации по жизнеспособности спермы может быть не точной. Поэтому, нет чет-; кого определения для «лучшего» наполнителя для спермы или методики обработки.
-
С самого начала развития техники криоконсервации спер- мы млекопитающих, глицерин, желток или молоко в большем части использовались как замороженные наполнители. Наполя нители, используемые для криоконсервации сперматозоидов быков, обычно содержат 20% желтка, а риск микробного зара! жения может иметь место.
IMV Techologies ввели новую концепцию криоконсерваЯ ции спермы быков: препарат Bioxcell ТМ, стерильный наполни! тель-желток, который был широко использован в центрах по ис| кусственному осеменению коров и телок во Франции. Подготовка наполнителя к использованию включае! следующие операции: К ♦ поместить бутылку со 100 мл концентрированного на! полнителя в водяную баню при температуре 32-34°С на 10 ми| нут;
-
♦ поместить 400 мл Erlemneyer дважды продистиллирован*
-
ной стерильной охлажденной воды или эквивалент в водянука баню при температуре 32-34°С;
