♦ прилить 100 мл концентрированного наполнителя в 400 мл дважды продистиллированной охлажденной стерильной воды или эквивалента. Ополоснуть бутылку дважды окончательным раствором;
♦ гомогенизировать раствор - наполнитель готов к использованию
Рекомендуется использовать наполнитель для разбавления в течение 6 часов с момента его приготовления.
Один раз приготовленный наполнитель Bioxcell ТМ может быть заморожен при температуре минус -20 С, желательно сразу после ее приготовления, для дальнейшего использования. Приготовленный раствор нужно разделить на дозы по 100 мл.
Размораживание должно быть проведено быстро (опустить колбочки прямо в водяную баню при 32-34°С на 15 минут). Не следует вновь замораживать приготовленный гомогенизированный наполнитель.
Методика одноступенчатого разведения при температуре 32-34°С
Упаковка спермы при комнатной температуре (20 С) производится следующим образом:
-
♦ после анализа спермы делается предварительный раствор
-
1:1с помощью Bioxcell при 32-34°С;
-
♦ гомогенизируют колбу с раствором один раз;
♦ выдерживают в термостате предварительно разведенную сперму на водяной бане в течение 10 минут при температуре 3234 С и проводят окончательное разбавление, добавляя предварительно разведенную сперму в наполнитель (не гомогенизировать);
-
♦ бутылочки с разведенной спермой оставляют при ком
-
натной температуре на время от 10 до 15 минут;
♦ гомогенизируют и упаковывают сперму при температуре I 20 ’С. Концентрация спермиев в одной дозе (пайетгы объемом но 0,25 мл) должна быть не менее 15 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением (ППД);
-
♦ размещают соломку горизонтально в пластиковом кон
-
тейнере, затем ставят контейнер в холодную камеру с'температурой +4°С. Соломки должны быть защищены от холода, они могут выстоять при температуре от 20°С до +4°С в течение 1- 1,5 часа, количество соломок должно быть подогнано к типу используемого контейнера, Например: 300 мини соломок в кубке65 мм;
-
♦ выдерживают сперму о,т 3 до 5 часов вдали от света;
♦ помещают соломки на замораживающие полки в холодной камере (замораживающее устройство должно быть закрыто в холодной камере).
Упаковка семени при температуре +4°С производится в следующей последовательности:
-
♦ После анализа семени, делается предварительный раствор
-
1:1 Bioxcell при температуре 32-34°С; ♦ колбу с раствором гомогенизируют один раз; ♦ предварительно разведенную сперму выдерживают в
-
термостате на водяной бане при температуре 32-34°С; ♦ делается окончательный раствор путем добавления пред-i
-
варительно разбавленной спермы в наполнитель (не гомогензи-1 руют);
-
♦ поместить колбу с разведенной спермой в пластиковый]
-
контейнер с постоянным уровнем воды в водяной бане при 321 °С (уровень воды не должен быть выше уровня разведенного] семени). Затем, контейнер помещают в холодную камеру с тем- ] пературой +4°С. (Рекомендуется поставить в воду термометр).] Когда температура достигнет 12-14 , можно добавить кубики] льда в воду. В любом случае, температура 4 °С должна быть] достигнута в течение 1-1,5 час; 1 ♦ выдерживают сперму от 3 до 5 часов вдали от света; ♦ упаковывают сперму в соломки с концентрацией сперми-1
-
ев в одной дозе (пайетты объемом по 0,25 мл) не менее 25 млн. I спермиев с прямолинейно-поступательным движением (ППД); i ♦помещают соломки на полки в холодной камере; ♦замораживают сперму в соломках.
Методика двухступенчатого разведения (32-34°С и +4°С)
-
после анализа семени, делается предварительный раствор
-
1:1 Bioxcell при температуре 32-34°С;
-
колбу с раствором гомогенизируют один раз;
-
предварительно разведенную сперму помещают в водяную
-
баню с температурой 32-34°С на 10 минут и добавляют от 20 до 25 мл Bioxcell при температуре 32-34°С;
-
бутылочки с разведенной спермой помещают в пластико
-
вый контейнер, заполненный водой от водяной бани с температурой 32-34 С (рекомендуется поставить в воду термометр);
-
затем бутылочки помещают в холодную камеру с темпера
-
турой +4°С на 1-1,5 часа (когда температура достигнет 12-14 С, можно добавить кубики льда).
-
делают окончательный раствор при температуре +4°С;
-
выдерживают разведенную сперму от 3 до 5 часов вдали от
-
света;
-
упаковывают сперму в соломки с концентрацией спермиев
-
в одной дозе (иайетты объемом по 0,25 мл) не менее 25 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением (ГГПД), при температуре -ь4°С;
-
помещают соломки на полки и замораживают.
Использование Bioxcell со свежей спермой
Подготовка наполнителя включает следующие операции:
-
поместить бутылку со 100 мл концентрированного на
-
полнителя на водяную баню с температурой 32-34°С на 10 минут;
-
поместить Erlemneyer в 400 мл дважды про дистиллиро
-
ванной охлажденной стерильной воды или эквивалента на водяную баню с температурой 32-34°С;
-
налить 100 мл концентрированного наполнителя в 400 мл
-
дважды иродистиллированной охлажденной стерильной воды или эквивалента. Дважды промойте бутылку окончательным раствором;
