Процесс разбавления осуществляют придерживаясь рекомендаций, приведенных в таблице 23, с помощью технологической линии для расфасовки спермы быков в облицованные гранулы на автомате ПРЖ, позволяющий дозировано вводить среды в спермоприемник по закрытой системе без соприкосновения с окружающей средой.
Устройство состоит из эластичной полиэтиленовой емкости для разбавителя, соединенной эластичной трубкой с патрубками цилиндра-дозатора. Верхний конец дозатора герметически закрыт соразмерным его объему эластичным колпаком из полиэтиленовой пленки. Соединительная трубка по обе стороны от дозатора пережимается пружинными зажимами.
Емкость для разбавителя представляет собой пакет из полиэтиленовой пленки толщиной 120-150 микрон, к которому герметически подсоединен отрезок полиэтиленовой трубки диаметром 4-6 мм и длиной 20-25 мм. В качестве емкости может быть использован одноразовый спермоприемник.
Дозатор изготавливают из мерного цилиндра, в нижнюю часть которого вваривают два небольших стеклянных патрубка для соединения с трубками.
В качестве колпака используется пакет из полиэтиленовой пленки, который фиксируется резиновым кольцом на открытой цилиндрической части дозатора.
Перед работой емкость для разбавления стерилизуют ультрафиолетовым облучением, а дозатор с колпаком и соединительными трубками - пугем автоклавирования при 0,5 атмосфер в течение 30 минут. При этом свободные концы трубок заI крывают чехлами из пергаментной бумаги. Для разбавления используют два устройства, которые заполняют средами № 1 и 2. Устройство со средой № 1 размещают в термостате при температуре 35°С, устройство со средой № 2 используют в условиях комнатной температуры (18-22 С).
Таблица 23
Степени разбавления спермы быков из расчета получения 10-12 млн. подвижных спермиев в дозе после замораживания в облицованных гранулах (0,33 мл)
| Концентрация спермиев, млрд/мл | ||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Подвижность спер миев, баллов | 0,7 | 0,8 | 0,9 | 1,0 | 1Д | 1,3 | 1,4 | 1Д | 1,6 | 1,7 | 1,8 | 1,9 | 2,0 | |
| 10 | U 0 | 1:12 | 1:14 | 1:16 | 1:18 | 1:18 | 1:20 | 1:20 | | 1:22 | 1:24 | 1:26 | 1:28 | 1:30 | 1:32 |
| 1:9 | 1:10 | 1:12 | 1:14 | 1:14 | 1:16 | 1:18 | 1:20 | 1:20 | 1:22 | 1:24 | 1:24 | 1:26 | 1:28 | |
| 1:8 | 1:8 | 1:10 | 1:12 | 1:12 | 1:14 | 1:16 | 1:16 | 1:18 | 1:20 | 1:22 | 1:22 | 1:24 | 1:26 | |
Непосредственно после взятия сперму разбавляют средой № 1 в соотношении 1:1 и выдерживают при комнатной температуре (18-22 С) в течение 5-10 минут, до окончания оценки эякулята. Затем дополнительно ее разбавляют средой № 2, имеющей комнатную температуру, до требуемой концентрации спермиев в дозе.
Разбавление спермы синтетической средой для замораживания в форме гранул на фторопластовых пластинах. *Для разбавления применяют лактозо-желточную среду с глицерином. Разбавленную сперму охлаждают при 2-5°С в течение 3- 4 часов. После эквилибрации проверяют на подвижность спермиев, допуская к замораживанию сперму быков с оценкой не ниже 8 баллов, затем расфасовывают по 0,1 -02 мл на охлажденную пластину из полимерного материала (фторопласт).
4. Оттаивание и оценка замороженной спермы
Оттаивание и оценка замороженной спермы в соломинках. Оттаивание спермы в соломинках проводят в водяной бане при температуре 38 С в течение 10-11 с; соломинки помещают заводской пробкой вниз, а лабораторной вверх. За это время сперма достигает температуры О С и оценивается по общепринятой методике.
Оттаивание и оценка замороженной спермы в облицованных гранулах. Обойму с тубами, поднимают стержнемдержателем на уровень жидкого азота, открывают пробки и из каждого контейнера отбирают пинцетом с плоскими браншами по одной грануле, которые переносят в подогретую до 40 С воду на 8-10 секунд.
Поверхность пленочной оболочки гранулы с оттаянной спермой вытирают стерильной салфеткой, вскрывают ножницами и определяют подвижность под микроскопом. При герметизации спермодоз в оптически прозрачную трубку дозу вскрывают, а оценивают сперму под микроскопом через прозрачную стенку.
